Wilson病基因突变酵母分析系统的建立
肝豆状核变性|遗传学|酿酒酵母|氧化酶|基因表达,WIlson病基因突变酵母分析系统的建立,关键词：
参见附件(979kb)。
黄帆；朱燕珍；丰岩清；国宁；王莹；徐琳；梁秀龄 中山大学附属第一医院神经科 广东广州510080 中山大学学报 2003 5
关键词：肝豆状核变性；遗传学；酿酒酵母；氧化酶；基因表达
【目的】建立一种能够对Wilson病(WD)基因突变进行分析的方法,为众多的WD基因突变进行致病性和致病程度的分析。【方法】本试验应用的酿酒酵母是YPH252,及其CCC2基因突变型ccc2酵母细胞。应用酶切方法构建了寡拷贝酵母表达质粒pMA92。将ATP7B亚克隆到酵母表达质粒pMA92上,进行ccc2酵母的转化和筛选,Westernblot分析转化后酵母ATP7B的表达情况,在铜、铁、色氨酸缺陷型的酵母SD培养基上培养转化的细胞,进行酵母生长曲线的分析,并进行Fet3p氧化酶活性的测定。【结果】在ccc2酵母细胞内表达人的ATP7B可以弥补ccc2的运铜功能,使ccc2酵母细胞在铜、铁及亮氨酸...
关键词：肝豆状核变性；遗传学；酿酒酵母；氧化酶；基因表达
【目的】建立一种能够对Wilson病(WD)基因突变进行分析的方法,为众多的WD基因突变进行致病性和致病程度的分析。【方法】本试验应用的酿酒酵母是YPH252,及其CCC2基因突变型ccc2酵母细胞。应用酶切方法构建了寡拷贝酵母表达质粒pMA92。将ATP7B亚克隆到酵母表达质粒pMA92上,进行ccc2酵母的转化和筛选,Westernblot分析转化后酵母ATP7B的表达情况,在铜、铁、色氨酸缺陷型的酵母SD培养基上培养转化的细胞,进行酵母生长曲线的分析,并进行Fet3p氧化酶活性的测定。【结果】在ccc2酵母细胞内表达人的ATP7B可以弥补ccc2的运铜功能,使ccc2酵母细胞在铜、铁及亮氨酸...
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