应用免疫组化LSAB法进行ER和PR检测
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2004)03-0262-01
链霉亲和素生物素法(Laballad Streptavidin Biotin Method，LSAB)是近年来在免疫病理诊断中采用的一种新方法。雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的检测，对指导乳腺癌的临床治疗和预后判断具有重要意义。应用LSAB法进行ER和PR检测，是采用高度特异性的抗受体单克隆抗体显示受体的部位，结果准确可靠，目前已成为乳腺癌病人的常规检查项目之一。我科去年2～9月，开展了此项检查，共做病人28例，效果满意，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料和试剂 标本来源于本科外检乳腺癌组织，10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4cm，载玻片涂APES胶，以防脱片。微波炉为750w东芝产品。ER/PR试剂盒及DAB显色试剂盒均购于北京中山生物工程公司。
1.2 方法 (1)切片常规脱蜡至水，PBS液洗;(2)3%过氧化氢，室温10min，PBS洗;(3)切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液中，微波炉加热至92℃～98℃，持续10min，室温冷却10～30min，PBS洗;(4)滴加2%正常羊血清，室温20min。去多余液体，不洗;(5)滴加鼠抗人雌、孕激素受体单克隆抗体，37℃1～2h或4℃冰箱过夜，PBS洗;(6)滴加生物素化的抗鼠抗体，37℃30min，PBS洗;(7)滴加辣根过氧化酶标记链霉亲和素37℃30min，PBS洗;(8)DAB显色，苏木素淡染核，脱水，透明，封片。
1.3 判断标准 以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞<15%为-，15%～25%为+，25%～45%为++，>45%为+++。背景无颜色或淡黄色。
2 结果
2.1 ER和PR表达情况 见表1。
表1 ER和PR在乳腺癌组织中的表达
2.2 结果 28例病人48张病理切片中，ER背景清晰者26张，背景少差者2张，PR背景清晰者24例，背景少差者4例。
3 讨论
LSAB法是用链菌抗生物素(Streptavictin)代替了一般抗生物素(Vidin)的试剂，链菌抗生物素是一种从链霉菌中分离出来的不同糖基链的蛋白质，含有四个亚基，每个亚基可以与一个生物素分子结合，其结合力或亲和力很强，它仅标记过氧化物酶而本身没有与生物素连接，生物素是直接连接在第二抗体上，故分子量较小，渗透组织的能力强，反应速度快，敏感性高。此外，其等电点为6.5，接近中性，几乎不与组织中的内源性凝集素样物质发生非特异性结合，从而产生了底背景、高放大的效果。它与过去我们曾使用的ABC法、PAP法相比，具有敏感性高，特异性强，背景清晰等优点。应用LSAB法检测ER和PR，适用于冰冻切片及石蜡切片，并可作为ER和PR的回顾性研究，不强调标本的新鲜和及时冷冻处理，不需要特殊冷冻设备。其操作简便易行，省去了抗体的配置、稀释和测试等步骤，无须移动液器即可完成，染色时间短，阳性着色强度好，背景清晰，节省试剂，切片易保存，试剂稳定可靠，可在4℃冰箱保存1年。通过实践经验，我们认为应用LASB法检测ER和PR可以在基层医院推广应用。
作者单位:200240复旦大学附属上海市第五人民医院病理科
(编辑李 木), 百拇医药
链霉亲和素生物素法(Laballad Streptavidin Biotin Method，LSAB)是近年来在免疫病理诊断中采用的一种新方法。雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的检测，对指导乳腺癌的临床治疗和预后判断具有重要意义。应用LSAB法进行ER和PR检测，是采用高度特异性的抗受体单克隆抗体显示受体的部位，结果准确可靠，目前已成为乳腺癌病人的常规检查项目之一。我科去年2～9月，开展了此项检查，共做病人28例，效果满意，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料和试剂 标本来源于本科外检乳腺癌组织，10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4cm，载玻片涂APES胶，以防脱片。微波炉为750w东芝产品。ER/PR试剂盒及DAB显色试剂盒均购于北京中山生物工程公司。
1.2 方法 (1)切片常规脱蜡至水，PBS液洗;(2)3%过氧化氢，室温10min，PBS洗;(3)切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液中，微波炉加热至92℃～98℃，持续10min，室温冷却10～30min，PBS洗;(4)滴加2%正常羊血清，室温20min。去多余液体，不洗;(5)滴加鼠抗人雌、孕激素受体单克隆抗体，37℃1～2h或4℃冰箱过夜，PBS洗;(6)滴加生物素化的抗鼠抗体，37℃30min，PBS洗;(7)滴加辣根过氧化酶标记链霉亲和素37℃30min，PBS洗;(8)DAB显色，苏木素淡染核，脱水，透明，封片。
1.3 判断标准 以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞<15%为-，15%～25%为+，25%～45%为++，>45%为+++。背景无颜色或淡黄色。
2 结果
2.1 ER和PR表达情况 见表1。
表1 ER和PR在乳腺癌组织中的表达
2.2 结果 28例病人48张病理切片中，ER背景清晰者26张，背景少差者2张，PR背景清晰者24例，背景少差者4例。
3 讨论
LSAB法是用链菌抗生物素(Streptavictin)代替了一般抗生物素(Vidin)的试剂，链菌抗生物素是一种从链霉菌中分离出来的不同糖基链的蛋白质，含有四个亚基，每个亚基可以与一个生物素分子结合，其结合力或亲和力很强，它仅标记过氧化物酶而本身没有与生物素连接，生物素是直接连接在第二抗体上，故分子量较小，渗透组织的能力强，反应速度快，敏感性高。此外，其等电点为6.5，接近中性，几乎不与组织中的内源性凝集素样物质发生非特异性结合，从而产生了底背景、高放大的效果。它与过去我们曾使用的ABC法、PAP法相比，具有敏感性高，特异性强，背景清晰等优点。应用LSAB法检测ER和PR，适用于冰冻切片及石蜡切片，并可作为ER和PR的回顾性研究，不强调标本的新鲜和及时冷冻处理，不需要特殊冷冻设备。其操作简便易行，省去了抗体的配置、稀释和测试等步骤，无须移动液器即可完成，染色时间短，阳性着色强度好，背景清晰，节省试剂，切片易保存，试剂稳定可靠，可在4℃冰箱保存1年。通过实践经验，我们认为应用LASB法检测ER和PR可以在基层医院推广应用。
作者单位:200240复旦大学附属上海市第五人民医院病理科
(编辑李 木), 百拇医药