应用高效液相色谱法测定头清颗粒中芍药苷含量
【摘要】 目的 建立头清颗粒中芍药苷含量测定方法。方法 采用C18柱，以甲醇:水(25:75)为流动相，检测波长为243nm。结果 线性范围为0.20～1.00μg，本法回收率为99.88%，RSD为1.41%。结论 本法操作简便易行，可供头清颗粒中芍药苷质量控制用。
关键词 头清颗粒 芍药苷 高效液相色谱法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2004)06-0543-02 头清颗粒由白芍、天麻、川芎、黄芩、白芷等数味中药制成，具有平肝通络，行气活血，祛风止痛。用于肝郁化火，肝阳上亢所致头晕头痛，烦躁易怒，心神不安，或伴恶心呕吐，舌苔薄黄，脉弦数。方中白芍 [1] 具有养血敛阴、柔肝止痛之功效。文献报道白芍中芍药苷 [2] 具有抗炎镇痛之功，为方中主要有效成分之一，为了更好地控制产品的内在质量，保证临床用药的安全有效。本文采用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量 [3～5] ，并进行了方法学考察，作为头清颗粒质量控制的一个方面进行研究。
, 百拇医药
1 仪器与试药
1.1 仪器 HP-1100高效液相色谱仪，WDL-95色谱工作站;KQ-250型超声波仪。
1.2 试药 头清颗粒(哈药集团制药六厂提供);甲醇为色谱纯，水为双蒸水;芍药苷对照品:中国药品生物制品检定所提供。
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ○ R BDS C 18 (4.6mm×150mm)柱，流动相:甲醇-水(25:75)，柱温为室温，检测波长:243nm;流速:1.0ml/min，进样量:10μl。
2.2 线性范围 精密称取芍药苷对照品10mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液;1，2，3，4，5ml分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，绘制标准曲线，表明芍药苷在0.20～1.00μg范围内呈良好线性关系，其回归方程为:A=53.190+68083.129c(r=0.9999)。
, 百拇医药
2.3 精密度试验 精密量取对照品溶液2μl，重复进样5次，分别测得峰面积RSD为1.32%(n=5)。
2.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于1h，2h，12h，24h，36h进样10ul，测得峰面积，RSD为2.93%(n=5)，其在36h内基本稳定。
2.5 重复性试验 取同一批样品5份，各2g，精密称定，并按样品测定方法测定，RSD为2.24%(n=5)。
2.6 回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品0.1g，分别精密加入芍药苷对照品溶液0.24mg，按样品测定方法测定，平均回收率为99.88%，RSD为1.41%(n=5)。测定 结果见表1。
表1 回收率测定结果 略
3 测定方法与结果
, 百拇医药
3.1 测定方法 取头清颗粒粉末2g，精密称定，置于50m1锥形瓶中，加50%乙醇25m1，密塞，摇匀，称定重量，超声溶解，取出，放冷，称重，用50%乙醇溶液补足损失的重量，摇匀，滤过后取续滤液即得。分别精密吸取芍药苷对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定即得，色谱图(见图1(A)，图1(B))。
图1 头清颗粒中芍药苷测定HPLC色谱图 略
3.2 干扰性试验 按处方比例，配制不含白芍的空白样品溶液，按测定方法测定，在与芍药苷对照品相同保留时间处未显示明显色谱峰，认为无干扰，见图1(C)。
3.3 样品测定结果 对三批样品进行含量测定，测定方法见前文，结果见表2。
表2 样品含量测定结果 略
4 讨论
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4.1 检测波长的选择 取对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果显示芍药苷在243nm波长处有一特征吸收峰，这与文献报道一致，在此波长下阴性样品无干扰。因此，以此波长作为测定波长。
4.2 提取溶剂的确定 根据文献及芍药苷的性质可知，芍药苷在水、不同浓度乙醇、甲醇中均有较好的溶解性能，取本品适量，精密加入100倍溶剂，超声提取测定。实验结果表明水及50%乙醇的提取量相近，但水提时含杂质成分较 多，故采用50%乙醇为提取溶剂。
4.3 提取时间的确定 根据文献综合考虑，选择超声为提取方法，对其超声时间进行考察，实验结果表明超声时间最好在15min以内，否则，超声时间长会对芍药苷有破坏作用，从而降低了其含量。
4.4 试验结果表明 本方法简便、准确、可靠。可以用于本品的质量控制。
参考文献
, 百拇医药
1 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社，2000:一部78.
2 徐国钧.生药学.第二版.北京:人民卫生出版社，1997，111.
3 马涵涛，谢秀娟，张翠英.HPLC测定妇科消炎颗粒中芍药苷的含量.中华实用中西医杂志，2003;16(5):635.
4 葛萍，雷岁合，曹新宪.HPLC法测定益智壮骨冲剂中芍药甙的含量.中成药，1996，18(2):13.
5 林伟忠.白芍及其复方制剂中芍药甙测定方法研究.中成药，1997;19(6):43.
作者单位: 50056黑龙江省哈尔滨哈药集团制药六厂
(编辑 元红), http://www.100md.com
关键词 头清颗粒 芍药苷 高效液相色谱法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2004)06-0543-02 头清颗粒由白芍、天麻、川芎、黄芩、白芷等数味中药制成，具有平肝通络，行气活血，祛风止痛。用于肝郁化火，肝阳上亢所致头晕头痛，烦躁易怒，心神不安，或伴恶心呕吐，舌苔薄黄，脉弦数。方中白芍 [1] 具有养血敛阴、柔肝止痛之功效。文献报道白芍中芍药苷 [2] 具有抗炎镇痛之功，为方中主要有效成分之一，为了更好地控制产品的内在质量，保证临床用药的安全有效。本文采用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量 [3～5] ，并进行了方法学考察，作为头清颗粒质量控制的一个方面进行研究。
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1 仪器与试药
1.1 仪器 HP-1100高效液相色谱仪，WDL-95色谱工作站;KQ-250型超声波仪。
1.2 试药 头清颗粒(哈药集团制药六厂提供);甲醇为色谱纯，水为双蒸水;芍药苷对照品:中国药品生物制品检定所提供。
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ○ R BDS C 18 (4.6mm×150mm)柱，流动相:甲醇-水(25:75)，柱温为室温，检测波长:243nm;流速:1.0ml/min，进样量:10μl。
2.2 线性范围 精密称取芍药苷对照品10mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液;1，2，3，4，5ml分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，绘制标准曲线，表明芍药苷在0.20～1.00μg范围内呈良好线性关系，其回归方程为:A=53.190+68083.129c(r=0.9999)。
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2.3 精密度试验 精密量取对照品溶液2μl，重复进样5次，分别测得峰面积RSD为1.32%(n=5)。
2.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于1h，2h，12h，24h，36h进样10ul，测得峰面积，RSD为2.93%(n=5)，其在36h内基本稳定。
2.5 重复性试验 取同一批样品5份，各2g，精密称定，并按样品测定方法测定，RSD为2.24%(n=5)。
2.6 回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品0.1g，分别精密加入芍药苷对照品溶液0.24mg，按样品测定方法测定，平均回收率为99.88%，RSD为1.41%(n=5)。测定 结果见表1。
表1 回收率测定结果 略
3 测定方法与结果
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3.1 测定方法 取头清颗粒粉末2g，精密称定，置于50m1锥形瓶中，加50%乙醇25m1，密塞，摇匀，称定重量，超声溶解，取出，放冷，称重，用50%乙醇溶液补足损失的重量，摇匀，滤过后取续滤液即得。分别精密吸取芍药苷对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定即得，色谱图(见图1(A)，图1(B))。
图1 头清颗粒中芍药苷测定HPLC色谱图 略
3.2 干扰性试验 按处方比例，配制不含白芍的空白样品溶液，按测定方法测定，在与芍药苷对照品相同保留时间处未显示明显色谱峰，认为无干扰，见图1(C)。
3.3 样品测定结果 对三批样品进行含量测定，测定方法见前文，结果见表2。
表2 样品含量测定结果 略
4 讨论
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4.1 检测波长的选择 取对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果显示芍药苷在243nm波长处有一特征吸收峰，这与文献报道一致，在此波长下阴性样品无干扰。因此，以此波长作为测定波长。
4.2 提取溶剂的确定 根据文献及芍药苷的性质可知，芍药苷在水、不同浓度乙醇、甲醇中均有较好的溶解性能，取本品适量，精密加入100倍溶剂，超声提取测定。实验结果表明水及50%乙醇的提取量相近，但水提时含杂质成分较 多，故采用50%乙醇为提取溶剂。
4.3 提取时间的确定 根据文献综合考虑，选择超声为提取方法，对其超声时间进行考察，实验结果表明超声时间最好在15min以内，否则，超声时间长会对芍药苷有破坏作用，从而降低了其含量。
4.4 试验结果表明 本方法简便、准确、可靠。可以用于本品的质量控制。
参考文献
, 百拇医药
1 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社，2000:一部78.
2 徐国钧.生药学.第二版.北京:人民卫生出版社，1997，111.
3 马涵涛，谢秀娟，张翠英.HPLC测定妇科消炎颗粒中芍药苷的含量.中华实用中西医杂志，2003;16(5):635.
4 葛萍，雷岁合，曹新宪.HPLC法测定益智壮骨冲剂中芍药甙的含量.中成药，1996，18(2):13.
5 林伟忠.白芍及其复方制剂中芍药甙测定方法研究.中成药，1997;19(6):43.
作者单位: 50056黑龙江省哈尔滨哈药集团制药六厂
(编辑 元红), http://www.100md.com
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