清肺消炎饮抗流感病毒作用实验研究
【摘要】 目的 通过实验观察清肺消炎饮对流感病毒的抑制作用。方法 制备用流感病毒感染的鸡胚、小鼠模型，观察清肺消炎饮抗病毒的作用。结果 清肺消炎饮在鸡胚内对流感病毒的增殖具有一定的抑制作用(P<0.05)，能明显降低小鼠的肺指数，对其肺部病变具有一定抑制作用(P<0.01)。可降低小鼠的死亡率(P<0.01)，对感染小鼠具有保护作用，减少死亡。结论 提示清肺消炎饮具有抗流感病毒作用。
关键词 清肺消炎饮 流感病毒 实验研究 抗病毒作用 鸡胚 小鼠
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2004)05-0577-02
An experimental study of antiviral effect of Qing fei xiao yan yin
Quan Shouxia，Tao Xuefei
, http://www.100md.com
The Affiliated Hospital of Liaoning College of TCM，Liaoning110032.
【Abstract】 Objective To observe the inhibiting effect of Qing fei xiao yan
yin，a Chinese herbs to influenza virus by experimental study.Methods Fowl embryo was infected by influenza virus of Asian A type mouse lung adapˉtative strain.Chicken(fowl)embryo method was adopted in extracorporeal antiviral experiment.Blood clotting reaction was measured to evaluate the inhibiting effect of Qingfei xiao yan yin.Animal model was induced by nose dropping method to infected mouse in vivo antiviral experiment.The change in the infected mouse lung，lung index and the morˉtality rate treating by Qing fei xiao yan yin were observed.Results Qing fei xiao yan yin can inhibit the reproduction of influenza virus in fowl embryo(P<0.05).It can significantly reduce the lung index in pneumonia of the virus inˉfected mouse，and has some inhibiting effect in lung process(P<0.01)，it can also reduce the mortality rate of the virus infected mouse(P<0.01).Conclusion Qing fei xiao yan yin has effect in antagonizing influenza virus.
, 百拇医药
Key words qing fei xiao yan yin influenza virus experimental study antiviral
effect fowl embryo mice
流感是由于流感病毒侵袭人体所引起的急性病毒性呼吸道传染病，特点是起病急骤、传播迅速、传染性强。除常见的呼吸道症状外，全身中毒症状明显，有高热、畏寒或明显寒战、头痛、肌痛、乏力等。流感病毒由于经常发生抗原变异，人群对变异后的新毒株缺乏免疫力，易引起流行或大流行。老年人及伴有慢性呼吸道疾病或心脏病的患者易并发肺炎，对人类的生命及健康造成严重的危害。清肺消炎饮是我院著名专家马智教授的经验方，在流感流行季节应用于临床，收到了满意的疗效，并进一步通过实验观察了解其对流感病毒的抑制作用。
1 实验材料
1.1 药物 清肺消炎饮:由麻黄、金银花、鱼腥草等中药制成的水煎剂，生药含量相当于1.8g/ml。病毒唑注射液(三氮唑核苷):100mg/ml，用时以生理盐水配制成7g/L(相当于临床等效剂量)。双黄连口服液:10ml/支，用时以生理盐水将原液稀释为20%浓度(相当于临床等效剂量)。
, http://www.100md.com
1.2 动物 (1)健康清洁级昆明种小白鼠，体重14～16g。(2)9～10日龄SPF鸡胚。均来源于辽宁中医学院动物室。
1.3 流感病毒 流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM 1 株)。
1.4 1%鸡红细胞 自制。
2 实验方法及结果
2.1 药物对鸡胚的毒性作用 [1] 将实验用药连续做2倍稀释，为原液～2 -5 。分别接种于鸡胚尿囊腔，每个浓度接种4只鸡胚，每腔0.2ml，置37℃培养，设生理盐水对照。连续观察4天，每日记录鸡胚的生长、发育、存活情况，以鸡胚可全部健康存活96h的最大药物浓度作为药物的最大无毒剂量。结果表明鸡胚能够耐受的药物最大浓度均为原液，故在鸡胚实验中以药物的原液浓度作为实验药物浓度。
, 百拇医药
2.2 清肺消炎饮在鸡胚内的抗流感病毒作用 将9～10日龄鸡胚随机分为5组，分组情况见表1。除正常对照组外，其余各组每只鸡胚尿囊腔内接种20ED 50 流感病毒0.1ml，室温放置1h。正常对照组与病毒对照组予尿囊腔内注入生理盐水0.2ml，其余各实验组分别注入清肺消炎饮0.2ml、双黄连口服液0.2ml、病毒唑0.2ml。注射完毕后，均用石蜡封口，置37℃温箱培养72h。3天后，将存活的鸡胚移至4℃冰箱过夜，次日收集每胚的尿囊液，用生理盐水将尿囊液稀释成不同浓度。加入1%鸡红细胞悬液，根据血细胞凝聚程度来进行判断，以“++”为血凝效价终点 [1] 。计算各组滴度的几何均数，组间比较用t检验，结果见表1。
2.3 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠肺指数的影响 将小白鼠随机分为5组，小鼠体重差异不超过2g，分组情况见表2。将小鼠用乙醚轻度麻醉后，以15LD 50 流感病毒0.05ml，由鼻腔滴入感染小鼠，造成流感病毒感染小鼠模型。正常对照组用等容量生理盐水代替病毒液滴鼻，并另室饲养，避免感染。于感染后2h开始予灌胃给药，每日2次，每次0.2ml/只，连续给药共7天。病毒对照组及正常对照组按照相同方法给予等容量的生理盐水。最后一次给药后，将小鼠禁食12h，称体重，处死，解剖，肉眼观察肺部病变。取出全肺，用精密天平准确称重，逐个计算肺指数值和肺指数抑制率 [2] 。
, http://www.100md.com
表1 清肺消炎饮对鸡胚内流感病毒的作用略
由表1可以看出清肺消炎饮对鸡胚内流感病毒的增殖具有抑制作用(P<0.05)。
肺指数=小鼠肺重(g)/小鼠体重(g) ×100%，
肺指数抑制率=病毒对照组平均肺指数-实验组平均肺指数/病毒对照组平均肺指数 ×100%。将各组肺指数值进行组间t检验，结果见表2。
表2 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠肺指数的影响略
由表2可以看出，清肺消炎饮组的肺指数最小，与病毒对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，表明清肺消炎饮可以降低流感病毒感染小鼠的肺指数，减轻小鼠肺部的病理损害。
2.4 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠的抗死亡保护作用 动物分组、感染、给药方法同2.3，每组小鼠数量见表3。从病毒感染后开始，连续观察14天，观察记录动物感染后的发病症状、死亡数。计算各组死亡率、抗死亡保护率。
, 百拇医药
抗死亡保护率=(对照组死亡率-实验组死亡率)×100%。组间死亡率作χ 2 检验，结果见表3。
表3 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠的抗死亡保护作用 略
由表3可以看出，清肺消炎饮组死亡率与病毒对照组对比差异有非常显著性(P<0.01)，说明清肺消炎饮可降低小鼠的死亡率，对流感病毒感染小鼠具有抗死亡保护作用。
3 讨论
在引起急性呼吸道感染性疾病的病原体中，病毒占绝 大部分，流感便是其中之一。对于该类疾病，现阶段尚无理想的治疗药物。目前治疗流感常用的西药是金刚烷胺及金刚乙胺，两药只对甲型流感病毒有抑制作用，对于乙型流感病毒无效，可迅速出现耐药毒株，并具有一定的不良反应 [3] 。近年研制的神经氨酸酶抑制剂主要用于流感的早期治疗，对有合并症的流感疗效较差，不适于儿童，对有哮喘或慢性阻塞性肺病患者可能有增加支气管痉挛危险 [4] 。因此，应用中医药治疗流感具有重要意义，中医认为其主要病因病机为外感六淫、风热毒邪，初起邪在肺卫，继之可入里化热，出现痰热壅肺，肺失宣肃之证。治疗上应以清热解毒，宣肺止咳为主要治疗大法。清肺消炎饮由麻杏石甘汤化裁而成，方中麻黄开宣肺气，开腠理，发汗解表、平喘。《本草纲目》曰:“麻黄乃肺经专药，故治肺病多用之。……盖皮毛外闭，邪热内攻，而肺气郁，故用麻黄……”。现代研究报道，其有效成分1-α-萜松醇(1-α-terpineol)经组织培养法实验表明对流感病毒有抑制作用。麻黄挥发油对流感病毒PR 8 株感染的小鼠有治疗作用 [5] 。金银花为清热解毒要药，其性轻宣疏散，临床多用于风邪初起或温热病。研究报道，在鸡胚实验中，无论预防实验或治疗实验，金银花对流感病毒京科68-1的增殖均有明显抑制作用。金银花水提物还能使病毒感染后48h增殖高峰时鼠肺细支气管内特异性荧光颗粒明显减少，表明金银花水提物于体内外均具有一定抗病毒活性 [5] 。鱼腥草可清肺经热邪，《本草经疏》谓之“治痰热壅肺”，临床多用于治疗肺热咳嗽，鱼腥草的醇提物部分具有抗流感病毒的作用 [6] 。
, http://www.100md.com
中草药含有的抗病毒活性成分主要有多酚类以及黄酮类物质。有学者对以金银花为主药的银翘散抗流感病毒有效部位进行研究，认为黄酮类成分可能是银翘散抗流感病毒作用的主要物质基础之一，其中发现金银花贡献较大 [7] 。鱼腥草也含有黄酮类化合物，主要有槲皮素、槲皮苷等 [5] 。以上研究报道为本方的药理学基础提供了有力依据。
实验结果表明清肺消炎饮可显著降低接种病毒鸡胚的血凝效价，与病毒对照组相比，其差异具有显著性(P<0.05)。能够明显降低病毒感染小鼠的肺指数，显著低于病毒对照组(P<0.01)，提示该药能减轻流感病毒所致肺病变。可降低感染小鼠的死亡率，对于流感病毒感染小鼠具有很好的抗死亡保护作用，与病毒对照组比，其差异具有非常显著性(P<0.01)。该实验说明清肺消炎饮具有较好的抗流感病毒作用，具有一定的临床应用价值，并为该药的临床广泛应用提供了实验依据。
参考文献
, 百拇医药
1 黄祯祥.医学病毒学基础与实验技术.北京:科学出版社，1990，122，679，152.
2 李仪奎.中药药理实验方法学.上海:上海科技出版社，1991，29.
3 衣淑珍.抗病毒药的现状与展望.药学进展，1999，23(1):7-8.
4 阮君.抗流感病毒药.扎那米韦.国外医药.合成药:生化药制剂分册，2000，21(3):169-170.
5 王本祥.中药药理学.天津:天津科学技术出版社，1997，126.
6 朱宇同.中草药，1983，14(7):25.
7 石钺.银翘散抗流感病毒有效部位群总黄酮含量的测定.北京中医药大学学报，2001，24(2):44-45.
作者单位:1 110032辽宁中医学院附属医院
2 110032辽宁中医学院
(收稿日期:2004-02-26)
(编辑 李阳), 百拇医药
关键词 清肺消炎饮 流感病毒 实验研究 抗病毒作用 鸡胚 小鼠
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2004)05-0577-02
An experimental study of antiviral effect of Qing fei xiao yan yin
Quan Shouxia，Tao Xuefei
, http://www.100md.com
The Affiliated Hospital of Liaoning College of TCM，Liaoning110032.
【Abstract】 Objective To observe the inhibiting effect of Qing fei xiao yan
yin，a Chinese herbs to influenza virus by experimental study.Methods Fowl embryo was infected by influenza virus of Asian A type mouse lung adapˉtative strain.Chicken(fowl)embryo method was adopted in extracorporeal antiviral experiment.Blood clotting reaction was measured to evaluate the inhibiting effect of Qingfei xiao yan yin.Animal model was induced by nose dropping method to infected mouse in vivo antiviral experiment.The change in the infected mouse lung，lung index and the morˉtality rate treating by Qing fei xiao yan yin were observed.Results Qing fei xiao yan yin can inhibit the reproduction of influenza virus in fowl embryo(P<0.05).It can significantly reduce the lung index in pneumonia of the virus inˉfected mouse，and has some inhibiting effect in lung process(P<0.01)，it can also reduce the mortality rate of the virus infected mouse(P<0.01).Conclusion Qing fei xiao yan yin has effect in antagonizing influenza virus.
, 百拇医药
Key words qing fei xiao yan yin influenza virus experimental study antiviral
effect fowl embryo mice
流感是由于流感病毒侵袭人体所引起的急性病毒性呼吸道传染病，特点是起病急骤、传播迅速、传染性强。除常见的呼吸道症状外，全身中毒症状明显，有高热、畏寒或明显寒战、头痛、肌痛、乏力等。流感病毒由于经常发生抗原变异，人群对变异后的新毒株缺乏免疫力，易引起流行或大流行。老年人及伴有慢性呼吸道疾病或心脏病的患者易并发肺炎，对人类的生命及健康造成严重的危害。清肺消炎饮是我院著名专家马智教授的经验方，在流感流行季节应用于临床，收到了满意的疗效，并进一步通过实验观察了解其对流感病毒的抑制作用。
1 实验材料
1.1 药物 清肺消炎饮:由麻黄、金银花、鱼腥草等中药制成的水煎剂，生药含量相当于1.8g/ml。病毒唑注射液(三氮唑核苷):100mg/ml，用时以生理盐水配制成7g/L(相当于临床等效剂量)。双黄连口服液:10ml/支，用时以生理盐水将原液稀释为20%浓度(相当于临床等效剂量)。
, http://www.100md.com
1.2 动物 (1)健康清洁级昆明种小白鼠，体重14～16g。(2)9～10日龄SPF鸡胚。均来源于辽宁中医学院动物室。
1.3 流感病毒 流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM 1 株)。
1.4 1%鸡红细胞 自制。
2 实验方法及结果
2.1 药物对鸡胚的毒性作用 [1] 将实验用药连续做2倍稀释，为原液～2 -5 。分别接种于鸡胚尿囊腔，每个浓度接种4只鸡胚，每腔0.2ml，置37℃培养，设生理盐水对照。连续观察4天，每日记录鸡胚的生长、发育、存活情况，以鸡胚可全部健康存活96h的最大药物浓度作为药物的最大无毒剂量。结果表明鸡胚能够耐受的药物最大浓度均为原液，故在鸡胚实验中以药物的原液浓度作为实验药物浓度。
, 百拇医药
2.2 清肺消炎饮在鸡胚内的抗流感病毒作用 将9～10日龄鸡胚随机分为5组，分组情况见表1。除正常对照组外，其余各组每只鸡胚尿囊腔内接种20ED 50 流感病毒0.1ml，室温放置1h。正常对照组与病毒对照组予尿囊腔内注入生理盐水0.2ml，其余各实验组分别注入清肺消炎饮0.2ml、双黄连口服液0.2ml、病毒唑0.2ml。注射完毕后，均用石蜡封口，置37℃温箱培养72h。3天后，将存活的鸡胚移至4℃冰箱过夜，次日收集每胚的尿囊液，用生理盐水将尿囊液稀释成不同浓度。加入1%鸡红细胞悬液，根据血细胞凝聚程度来进行判断，以“++”为血凝效价终点 [1] 。计算各组滴度的几何均数，组间比较用t检验，结果见表1。
2.3 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠肺指数的影响 将小白鼠随机分为5组，小鼠体重差异不超过2g，分组情况见表2。将小鼠用乙醚轻度麻醉后，以15LD 50 流感病毒0.05ml，由鼻腔滴入感染小鼠，造成流感病毒感染小鼠模型。正常对照组用等容量生理盐水代替病毒液滴鼻，并另室饲养，避免感染。于感染后2h开始予灌胃给药，每日2次，每次0.2ml/只，连续给药共7天。病毒对照组及正常对照组按照相同方法给予等容量的生理盐水。最后一次给药后，将小鼠禁食12h，称体重，处死，解剖，肉眼观察肺部病变。取出全肺，用精密天平准确称重，逐个计算肺指数值和肺指数抑制率 [2] 。
, http://www.100md.com
表1 清肺消炎饮对鸡胚内流感病毒的作用略
由表1可以看出清肺消炎饮对鸡胚内流感病毒的增殖具有抑制作用(P<0.05)。
肺指数=小鼠肺重(g)/小鼠体重(g) ×100%，
肺指数抑制率=病毒对照组平均肺指数-实验组平均肺指数/病毒对照组平均肺指数 ×100%。将各组肺指数值进行组间t检验，结果见表2。
表2 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠肺指数的影响略
由表2可以看出，清肺消炎饮组的肺指数最小，与病毒对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，表明清肺消炎饮可以降低流感病毒感染小鼠的肺指数，减轻小鼠肺部的病理损害。
2.4 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠的抗死亡保护作用 动物分组、感染、给药方法同2.3，每组小鼠数量见表3。从病毒感染后开始，连续观察14天，观察记录动物感染后的发病症状、死亡数。计算各组死亡率、抗死亡保护率。
, 百拇医药
抗死亡保护率=(对照组死亡率-实验组死亡率)×100%。组间死亡率作χ 2 检验，结果见表3。
表3 清肺消炎饮对流感病毒感染小鼠的抗死亡保护作用 略
由表3可以看出，清肺消炎饮组死亡率与病毒对照组对比差异有非常显著性(P<0.01)，说明清肺消炎饮可降低小鼠的死亡率，对流感病毒感染小鼠具有抗死亡保护作用。
3 讨论
在引起急性呼吸道感染性疾病的病原体中，病毒占绝 大部分，流感便是其中之一。对于该类疾病，现阶段尚无理想的治疗药物。目前治疗流感常用的西药是金刚烷胺及金刚乙胺，两药只对甲型流感病毒有抑制作用，对于乙型流感病毒无效，可迅速出现耐药毒株，并具有一定的不良反应 [3] 。近年研制的神经氨酸酶抑制剂主要用于流感的早期治疗，对有合并症的流感疗效较差，不适于儿童，对有哮喘或慢性阻塞性肺病患者可能有增加支气管痉挛危险 [4] 。因此，应用中医药治疗流感具有重要意义，中医认为其主要病因病机为外感六淫、风热毒邪，初起邪在肺卫，继之可入里化热，出现痰热壅肺，肺失宣肃之证。治疗上应以清热解毒，宣肺止咳为主要治疗大法。清肺消炎饮由麻杏石甘汤化裁而成，方中麻黄开宣肺气，开腠理，发汗解表、平喘。《本草纲目》曰:“麻黄乃肺经专药，故治肺病多用之。……盖皮毛外闭，邪热内攻，而肺气郁，故用麻黄……”。现代研究报道，其有效成分1-α-萜松醇(1-α-terpineol)经组织培养法实验表明对流感病毒有抑制作用。麻黄挥发油对流感病毒PR 8 株感染的小鼠有治疗作用 [5] 。金银花为清热解毒要药，其性轻宣疏散，临床多用于风邪初起或温热病。研究报道，在鸡胚实验中，无论预防实验或治疗实验，金银花对流感病毒京科68-1的增殖均有明显抑制作用。金银花水提物还能使病毒感染后48h增殖高峰时鼠肺细支气管内特异性荧光颗粒明显减少，表明金银花水提物于体内外均具有一定抗病毒活性 [5] 。鱼腥草可清肺经热邪，《本草经疏》谓之“治痰热壅肺”，临床多用于治疗肺热咳嗽，鱼腥草的醇提物部分具有抗流感病毒的作用 [6] 。
, http://www.100md.com
中草药含有的抗病毒活性成分主要有多酚类以及黄酮类物质。有学者对以金银花为主药的银翘散抗流感病毒有效部位进行研究，认为黄酮类成分可能是银翘散抗流感病毒作用的主要物质基础之一，其中发现金银花贡献较大 [7] 。鱼腥草也含有黄酮类化合物，主要有槲皮素、槲皮苷等 [5] 。以上研究报道为本方的药理学基础提供了有力依据。
实验结果表明清肺消炎饮可显著降低接种病毒鸡胚的血凝效价，与病毒对照组相比，其差异具有显著性(P<0.05)。能够明显降低病毒感染小鼠的肺指数，显著低于病毒对照组(P<0.01)，提示该药能减轻流感病毒所致肺病变。可降低感染小鼠的死亡率，对于流感病毒感染小鼠具有很好的抗死亡保护作用，与病毒对照组比，其差异具有非常显著性(P<0.01)。该实验说明清肺消炎饮具有较好的抗流感病毒作用，具有一定的临床应用价值，并为该药的临床广泛应用提供了实验依据。
参考文献
, 百拇医药
1 黄祯祥.医学病毒学基础与实验技术.北京:科学出版社，1990，122，679，152.
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6 朱宇同.中草药，1983，14(7):25.
7 石钺.银翘散抗流感病毒有效部位群总黄酮含量的测定.北京中医药大学学报，2001，24(2):44-45.
作者单位:1 110032辽宁中医学院附属医院
2 110032辽宁中医学院
(收稿日期:2004-02-26)
(编辑 李阳), 百拇医药