转移抑制因子nm23和微血管密度在食管癌放射治疗中的临床意义
【摘要】 目的 探讨肿瘤转移抑制因子nm23和微血管密度(MVD)在食管癌放射治疗中临床意义。方法 应用免疫组织化学技术检测59例食管癌放射治疗前食管镜活检组织nm23表达和MVD，分析其表达与食管癌放射治疗前临床病理指标及放射治疗预后的相关关系。结果初步研究显示本组食管癌病例nm23表达和MVD与性别、分期及癌组织分化程度等临床病理指标无显著相关关系;总体生存率和局部控制率的多因素分析未能显示nm23表达和MVD在放射治疗中的独立预后价值。随着nm23表达增强及MVD的降低，远处转移和区域淋巴结转移有减少的趋势，但差异未达到显著性水平。结论 nm23表达增强及MVD的降低，远处转移和区域淋巴结转移有减少的趋势，值得今后通过扩大样本量及规范检测方法进一步深入研究。
关键词 食管肿瘤 放射治疗 食管癌转移抑制因子nm23 微血管密度 相互影响分析
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)09-0769-04
, 百拇医药
Clinical value of expression of suppressor gene of tumor metastasis nm23
and microvessel density in the radiotherapy for esophageal carcinoma
Wang Yang，He Shaoqin，Shi Xuehui，et al.
Department of Radiation Oncology，Cancer Hospital，Fudan University，Shanghai200032.
【Abstract】 Objective To determine the clinical value of the expression of suppressor gene of tumor metastaˉsis nm23and microvessel density(MVD)and the outcome of radiotherapy of esophageal carcinoma.Methods In59cases of esophageal cancer，expression of nm23gene and MVD of the biopsies from endoscopic examination were perˉformed by immunohistological stain.Correlation between expressionof nm23and MVD and clinically pathological endˉpoints and prognosis were analyzed.Results Primary study demonstrated that the expression of nm23and MVD had nosignificant correlation with clinical endpoints such as gender，classification and histological grade.Neither correlaˉtion between nm23and local control or overall survival rate nor that between MVD and local control or overall survival rate was found significanth.Although there is a trend that decreasing incidence ofdistant and local lymph node metasˉtasis is accompanied by elevated nm23expression and low MVD，the correlation is not significant.Conclusion Alˉthough our study did not show any correlation between nm23and MVD and metastasis and prognosis in the radiotheraˉpy for esophageal carcinoma，further study by uniform analysis method is needed for the limited cases.
, 百拇医药
Key words esophageal neoplasms/radiotherapy suppressor gene of tumor metastasis nm23 microvessel denˉsity transactional analysis
影响食管癌放射疗效的因素很多，传统的预后参数诸如肿瘤长度、组织学分类、临床分期等为临床提供了不少帮助。随着放射治疗技术的完善，食管癌局部控制率有所提高，临床所见远处转移病例愈来愈多。近年来研究发现肿瘤转移可受转移抑制基因和肿瘤微环境的调控。目前转移抑制基因nm23和微血管密度(MVD)在肿瘤转移过程中的作用日益受到重视 [1，2] 。而有关nm23表达和MVD在食管癌放射治疗中的临床研究较少，为此，笔者通过检测放射治疗前食管镜活检组织nm23表达和MVD，分析nm23表达和MVD与食管癌转移的相关关系及其在放射治疗中的临床应用价值。
1 资料与方法
, 百拇医药
1.1 研究对象 1994年11月～1998年7月收治的59例无基金项目:卫生部直属医疗单位临床学科重点项目(97030222) 远处转移的食管鳞癌，疗前均行食管镜检查并取活检。其中男42例，女17例;年龄42～80岁，中位年龄65岁。参照1976年全国食管癌工作会议制订的食管癌临床病理分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期14例，Ⅲ+Ⅳ期40例。
1.2 放射治疗方法 选用Co 60 γ射线或6MV X线或18MV X射线。50例患者接受常规分割放射治疗，55.0～71.9Gy，29～39分次，42～62d完成;9例后程加速超分割放疗，68～71.6Gy，40～41分次，44～47d完成。所有患者放疗前及放疗中未予化疗。
1.3 免疫组织化学染色(EnVision二步法) (1)石蜡切片5μm，烤片50～60℃4h，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化。(2)置枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)，经微波抗原修复(95℃，5min，2次)，室温下自然冷却。(3)TBS缓冲液(pH6.0，0.05ml)洗涤3次，3min/次。(4)第1抗体(鼠抗人)[nm231:500(丹麦Dako公司)，CD341:50(丹麦DAKO公司)]室温孵育60min后4℃冰箱过夜。(5)TBS缓冲液洗涤3次，3min/次。(6)第2抗体(EnVision)室温下作用30min。(7)TBS缓冲液洗涤3次。(8)0.4%DBA-H 2 O 2 显色。(9)流水洗涤，苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。此外，以TBS缓冲液代替1抗作为阴性对照。
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1.4 结果评定 nm23检测标准 [3] 按细胞染色程度计分。0分:无染色;1分:浅黄色;2分:棕黄色;3分:棕褐色。按染色瘤细胞占瘤细胞总数的比例计分。1分:<1/3;2分:1/3～2/3;3分:>2/3。每例肿瘤积分=染色程度得分×瘤细胞所占比例得分，按积分高低分3等:阴性:0分;弱阳性:1～4分;强阳性:>4分。MVD检测 [4] :染成棕色的单个血管内皮细胞或血管内皮细胞簇，视为一个微血管。先用40倍光镜扫视整个切片，寻找高血管密度区，即“热点”，然后在200倍视野下计数血管数目，记录3个视野内的微血管数，取其平均数作为该病例的MVD。按中位值分低密度组和高密度组。
1.5 统计学方法 采用SPSS8.0统计软件包，运用X 2 检验分析nm23表达和MVD与临床病理指标的相关性。应用Kaplan-Meier法和Log rank法进行局部控制率和总体生存率单因素分析，应用Cox比例风险模型进行局部控制率和总体生存率的多因素分析。
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2 结果
2.1 本组nm23和MVD表达 nm23蛋白阳性染色为浅黄、棕黄或棕褐色颗粒，定位于肿瘤细胞浆内。nm23阳性表达40例(67.8%)，其中弱阳性16例(27.1%)，强阳性24例(40.7%);MVD表达:食管癌组织中的毛细血管、小静脉和小动脉内皮细胞均显示CD34抗体染色阳性。
2.2 临床因素与nm23表达与MVD的关系 nm23阳性表达与MVD和性别、年龄、分期、累及全周情况及癌组织分化程度无显著相关关系(见表1、表2)。
表1 本组病例临床因素与nm23蛋白表达的关系 (例)
注:因个别项目例数太少，在统计分析时作部分合并
2.3 nm23表达与MVD的关系 本研究未发现nm23表达与MVD水平之间存在显著相关关系，详见表3。
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表3 本组病例nm23表达与MVD的关系 (例)
2.4 局部控制率和总体生存率分析 本组病例1、2、3、4和5年局部控制率分别为57.7%、45.9%、42.6%、42.6%和32%;1、2、3、4和5年生存率分别为58.2%、34.4%、27.8%、25.2%和25.2%。局部控制率多因素分析未能提出影响食管癌放射治疗局部控制率的独立预后因子，详见表4。
表4 本组病例局部控制率因素分析因素
总体生存率单因素分析显示病灶累及全周是影响总体生存率的预后因子，即放射治疗前肿瘤累及食管壁全周的患者预后较差。而Cox模型多因素分析未能发现影响总体生存率的独立预后因子，详见表5。
2.5 nm23表达与MVD与远处转移和区域淋巴结转移的相 关关系 详见表6。进一步分析nm23表达与MVD与本组病例远处转移和区域淋巴结转移的相关关系，结果显示随着nm23阳性表达的增强，远处转移和区域淋巴结转移有减少的趋势，但差异未达到显著性水平。而随MVD的增加远处转移和区域淋巴结转移有增加的趋势，但差异亦未达到显著性水平。
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表5 本组病例总体生存率因素分析因素
表6nm23表达与MVD和远处转移与区域淋巴结转移相关关系 (例)
3 讨论
转移抑制基因nm23的发现是近年来有关肿瘤转移研究的重要贡献。1988年Steel等 [5] 首先分离鉴定了nm23基因，它定位于人体17号染色体长臂17q22上，编码的蛋白与人红细胞二磷酸核苷酸激酶(NDPK)有高度同源性。nm23基因抑制肿瘤转移的机制尚不完全清楚。目前认为nm23基因编码NDPK，NDPK能使5’NTP的λ-磷酸基因转移到5’NDP，使GDP还原为GTP，而GTP有调节细胞膜G蛋白的功能以参与跨膜信息传递和影响微管、微丝等细胞骨架蛋白的生物活性，从而阻断肿瘤转移信息传递、抑制癌转移。Yamagychi等对肝细胞癌的研究发现nm23表达与肝癌肝内转移呈负相关 [6] 。Hennessy发现nm23基因与乳腺癌淋巴结转移密切相关，无淋巴结转移者的nm23表达明显高于有淋巴结转移者 [7]。所以大多数实验显示nm23基因参与抑制肿瘤转移，支持nm23基因是肿瘤转移抑制基因的观点。本组资料显示:nm23表达与食管癌临床病理指标无显著相关关系;而随着nm23阳性表达的增强，放射治疗后远处转移和区域淋巴结转移有减少的趋势。虽然差异未达到显著性水平，笔者认为这可能与病例数较少有关，nm23在食管癌放射治疗中的临床价值有待于进一步研究。也有作者报道在肺癌、结肠癌和甲状腺癌中，不论转移潜能高低，nm23表达均有增强，推测这可能与nm23基因突变有关 [8～10] 。肿瘤的转移依赖于肿瘤血管生成。MVD作为血管生成 活性的定量指标之一，能够比较直观的评估肿瘤内血管生成状态。肿瘤内微血管是由血管生成因子刺激内皮细胞增生形成。由于新生的微血管发育不成熟，管壁仅为一层有裂隙的内皮细胞，缺乏基底膜;同时受内皮细胞分泌的纤维蛋白溶酶的作用，肿瘤细胞容易进入微血管，经血循环远处转移。文献报道MVD与某些肿瘤的侵袭与转移相关，如胃癌 [11] 、非小细胞肺癌 [12] 、乳腺癌 [13] 等。有关食管癌MVD研究不多，Masahika报道食管癌MVD与肿瘤大小、分期和淋巴结侵犯相关 [14] 。Sarbia则报道食管癌MVD与T分期、淋巴结受侵相关，而与病灶大小、组织学分级、有无脉管侵犯和增殖能力无关 [15] 。本组病例未发现MVD与食管癌临床病理指标及放射治疗预后显著相关;随着MVD的增加，放射治疗后远处转移和区域淋巴结转移有增加的趋势，但差异未达到显著水平。复习文献发现也并非所有的报道都支持MVD的预后价值，如宫颈癌 [16] 、头颈部肿瘤 [17] 等。即使在MVD研究较多的乳腺癌和肺癌中，MVD的临床意义也未得到一致肯定。如Costello对87例淋巴结阴性乳腺癌患者的预后研究发现:MVD的高低与乳腺癌的预后无关 [18] 。Chandrachud取88例随访5年以上的非小细胞肺癌患者手术标本，发现肿瘤血管密度与临床分期无关，而肿瘤内血管丰富的患者预后较好 [19] 。
, 百拇医药
究其原因，肿瘤血管分布存在异质性可能是造成MVD研究结果不一的主要原因。Schor认为MVD值不足以代表非小细胞肺癌血管形成活性，如果只检测肿瘤内某一区域的MVD，其评估肿瘤内血管丰富程度的准确性低于68% [20] 。另外检测抗体不同(CD31、CD34或Ⅷ因子)、计数区域选择不同(肿瘤内或肿瘤浸润前缘)、微血管计数标准不一致，以及研究人员的检测误差也是目前肿瘤MVD研究中需要解决的问题。
综上所述，食管癌放射治疗后远处转移日益多见，转移相关因子研究的重要性凸现。虽然本研究不足以支持nm23表达和MVD与食管癌放射治疗后远处转移和预后相关，但初步研究显示随nm23表达增强及MVD的降低，远处转移和区域淋巴结转移有减少趋势，鉴于我院食管癌放射治疗前行食管镜检查还不普及，笔者搜集病例数较少，所以nm23和MVD和食管癌放射治疗预后关系及在治疗中的价值有待今后通过扩大样本量及规范检测方法进一步研究。(致谢:实验室工作得到我院病理科陆宏芬副教授、范月珍老师的大力支持。)
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参考文献
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20 Schor AM，Pazouki S，Morris J，et al.Heterogeneity in microvascular density in lung tumors:comparison with normal bronchus.Br J Cancer，1998:77(6):946-951.
作者单位:200032复旦大学附属肿瘤医院放射治疗科(现单位:复旦大学附属华山医院上海伽玛刀医院放射治疗中心; 通讯作者)
(收稿日期:2004-02-18)
(编辑青 山), http://www.100md.com
关键词 食管肿瘤 放射治疗 食管癌转移抑制因子nm23 微血管密度 相互影响分析
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)09-0769-04
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Clinical value of expression of suppressor gene of tumor metastasis nm23
and microvessel density in the radiotherapy for esophageal carcinoma
Wang Yang，He Shaoqin，Shi Xuehui，et al.
Department of Radiation Oncology，Cancer Hospital，Fudan University，Shanghai200032.
【Abstract】 Objective To determine the clinical value of the expression of suppressor gene of tumor metastaˉsis nm23and microvessel density(MVD)and the outcome of radiotherapy of esophageal carcinoma.Methods In59cases of esophageal cancer，expression of nm23gene and MVD of the biopsies from endoscopic examination were perˉformed by immunohistological stain.Correlation between expressionof nm23and MVD and clinically pathological endˉpoints and prognosis were analyzed.Results Primary study demonstrated that the expression of nm23and MVD had nosignificant correlation with clinical endpoints such as gender，classification and histological grade.Neither correlaˉtion between nm23and local control or overall survival rate nor that between MVD and local control or overall survival rate was found significanth.Although there is a trend that decreasing incidence ofdistant and local lymph node metasˉtasis is accompanied by elevated nm23expression and low MVD，the correlation is not significant.Conclusion Alˉthough our study did not show any correlation between nm23and MVD and metastasis and prognosis in the radiotheraˉpy for esophageal carcinoma，further study by uniform analysis method is needed for the limited cases.
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Key words esophageal neoplasms/radiotherapy suppressor gene of tumor metastasis nm23 microvessel denˉsity transactional analysis
影响食管癌放射疗效的因素很多，传统的预后参数诸如肿瘤长度、组织学分类、临床分期等为临床提供了不少帮助。随着放射治疗技术的完善，食管癌局部控制率有所提高，临床所见远处转移病例愈来愈多。近年来研究发现肿瘤转移可受转移抑制基因和肿瘤微环境的调控。目前转移抑制基因nm23和微血管密度(MVD)在肿瘤转移过程中的作用日益受到重视 [1，2] 。而有关nm23表达和MVD在食管癌放射治疗中的临床研究较少，为此，笔者通过检测放射治疗前食管镜活检组织nm23表达和MVD，分析nm23表达和MVD与食管癌转移的相关关系及其在放射治疗中的临床应用价值。
1 资料与方法
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1.1 研究对象 1994年11月～1998年7月收治的59例无基金项目:卫生部直属医疗单位临床学科重点项目(97030222) 远处转移的食管鳞癌，疗前均行食管镜检查并取活检。其中男42例，女17例;年龄42～80岁，中位年龄65岁。参照1976年全国食管癌工作会议制订的食管癌临床病理分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期14例，Ⅲ+Ⅳ期40例。
1.2 放射治疗方法 选用Co 60 γ射线或6MV X线或18MV X射线。50例患者接受常规分割放射治疗，55.0～71.9Gy，29～39分次，42～62d完成;9例后程加速超分割放疗，68～71.6Gy，40～41分次，44～47d完成。所有患者放疗前及放疗中未予化疗。
1.3 免疫组织化学染色(EnVision二步法) (1)石蜡切片5μm，烤片50～60℃4h，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化。(2)置枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)，经微波抗原修复(95℃，5min，2次)，室温下自然冷却。(3)TBS缓冲液(pH6.0，0.05ml)洗涤3次，3min/次。(4)第1抗体(鼠抗人)[nm231:500(丹麦Dako公司)，CD341:50(丹麦DAKO公司)]室温孵育60min后4℃冰箱过夜。(5)TBS缓冲液洗涤3次，3min/次。(6)第2抗体(EnVision)室温下作用30min。(7)TBS缓冲液洗涤3次。(8)0.4%DBA-H 2 O 2 显色。(9)流水洗涤，苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。此外，以TBS缓冲液代替1抗作为阴性对照。
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1.4 结果评定 nm23检测标准 [3] 按细胞染色程度计分。0分:无染色;1分:浅黄色;2分:棕黄色;3分:棕褐色。按染色瘤细胞占瘤细胞总数的比例计分。1分:<1/3;2分:1/3～2/3;3分:>2/3。每例肿瘤积分=染色程度得分×瘤细胞所占比例得分，按积分高低分3等:阴性:0分;弱阳性:1～4分;强阳性:>4分。MVD检测 [4] :染成棕色的单个血管内皮细胞或血管内皮细胞簇，视为一个微血管。先用40倍光镜扫视整个切片，寻找高血管密度区，即“热点”，然后在200倍视野下计数血管数目，记录3个视野内的微血管数，取其平均数作为该病例的MVD。按中位值分低密度组和高密度组。
1.5 统计学方法 采用SPSS8.0统计软件包，运用X 2 检验分析nm23表达和MVD与临床病理指标的相关性。应用Kaplan-Meier法和Log rank法进行局部控制率和总体生存率单因素分析，应用Cox比例风险模型进行局部控制率和总体生存率的多因素分析。
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2 结果
2.1 本组nm23和MVD表达 nm23蛋白阳性染色为浅黄、棕黄或棕褐色颗粒，定位于肿瘤细胞浆内。nm23阳性表达40例(67.8%)，其中弱阳性16例(27.1%)，强阳性24例(40.7%);MVD表达:食管癌组织中的毛细血管、小静脉和小动脉内皮细胞均显示CD34抗体染色阳性。
2.2 临床因素与nm23表达与MVD的关系 nm23阳性表达与MVD和性别、年龄、分期、累及全周情况及癌组织分化程度无显著相关关系(见表1、表2)。
表1 本组病例临床因素与nm23蛋白表达的关系 (例)
注:因个别项目例数太少，在统计分析时作部分合并
2.3 nm23表达与MVD的关系 本研究未发现nm23表达与MVD水平之间存在显著相关关系，详见表3。
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表3 本组病例nm23表达与MVD的关系 (例)
2.4 局部控制率和总体生存率分析 本组病例1、2、3、4和5年局部控制率分别为57.7%、45.9%、42.6%、42.6%和32%;1、2、3、4和5年生存率分别为58.2%、34.4%、27.8%、25.2%和25.2%。局部控制率多因素分析未能提出影响食管癌放射治疗局部控制率的独立预后因子，详见表4。
表4 本组病例局部控制率因素分析因素
总体生存率单因素分析显示病灶累及全周是影响总体生存率的预后因子，即放射治疗前肿瘤累及食管壁全周的患者预后较差。而Cox模型多因素分析未能发现影响总体生存率的独立预后因子，详见表5。
2.5 nm23表达与MVD与远处转移和区域淋巴结转移的相 关关系 详见表6。进一步分析nm23表达与MVD与本组病例远处转移和区域淋巴结转移的相关关系，结果显示随着nm23阳性表达的增强，远处转移和区域淋巴结转移有减少的趋势，但差异未达到显著性水平。而随MVD的增加远处转移和区域淋巴结转移有增加的趋势，但差异亦未达到显著性水平。
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表5 本组病例总体生存率因素分析因素
表6nm23表达与MVD和远处转移与区域淋巴结转移相关关系 (例)
3 讨论
转移抑制基因nm23的发现是近年来有关肿瘤转移研究的重要贡献。1988年Steel等 [5] 首先分离鉴定了nm23基因，它定位于人体17号染色体长臂17q22上，编码的蛋白与人红细胞二磷酸核苷酸激酶(NDPK)有高度同源性。nm23基因抑制肿瘤转移的机制尚不完全清楚。目前认为nm23基因编码NDPK，NDPK能使5’NTP的λ-磷酸基因转移到5’NDP，使GDP还原为GTP，而GTP有调节细胞膜G蛋白的功能以参与跨膜信息传递和影响微管、微丝等细胞骨架蛋白的生物活性，从而阻断肿瘤转移信息传递、抑制癌转移。Yamagychi等对肝细胞癌的研究发现nm23表达与肝癌肝内转移呈负相关 [6] 。Hennessy发现nm23基因与乳腺癌淋巴结转移密切相关，无淋巴结转移者的nm23表达明显高于有淋巴结转移者 [7]。所以大多数实验显示nm23基因参与抑制肿瘤转移，支持nm23基因是肿瘤转移抑制基因的观点。本组资料显示:nm23表达与食管癌临床病理指标无显著相关关系;而随着nm23阳性表达的增强，放射治疗后远处转移和区域淋巴结转移有减少的趋势。虽然差异未达到显著性水平，笔者认为这可能与病例数较少有关，nm23在食管癌放射治疗中的临床价值有待于进一步研究。也有作者报道在肺癌、结肠癌和甲状腺癌中，不论转移潜能高低，nm23表达均有增强，推测这可能与nm23基因突变有关 [8～10] 。肿瘤的转移依赖于肿瘤血管生成。MVD作为血管生成 活性的定量指标之一，能够比较直观的评估肿瘤内血管生成状态。肿瘤内微血管是由血管生成因子刺激内皮细胞增生形成。由于新生的微血管发育不成熟，管壁仅为一层有裂隙的内皮细胞，缺乏基底膜;同时受内皮细胞分泌的纤维蛋白溶酶的作用，肿瘤细胞容易进入微血管，经血循环远处转移。文献报道MVD与某些肿瘤的侵袭与转移相关，如胃癌 [11] 、非小细胞肺癌 [12] 、乳腺癌 [13] 等。有关食管癌MVD研究不多，Masahika报道食管癌MVD与肿瘤大小、分期和淋巴结侵犯相关 [14] 。Sarbia则报道食管癌MVD与T分期、淋巴结受侵相关，而与病灶大小、组织学分级、有无脉管侵犯和增殖能力无关 [15] 。本组病例未发现MVD与食管癌临床病理指标及放射治疗预后显著相关;随着MVD的增加，放射治疗后远处转移和区域淋巴结转移有增加的趋势，但差异未达到显著水平。复习文献发现也并非所有的报道都支持MVD的预后价值，如宫颈癌 [16] 、头颈部肿瘤 [17] 等。即使在MVD研究较多的乳腺癌和肺癌中，MVD的临床意义也未得到一致肯定。如Costello对87例淋巴结阴性乳腺癌患者的预后研究发现:MVD的高低与乳腺癌的预后无关 [18] 。Chandrachud取88例随访5年以上的非小细胞肺癌患者手术标本，发现肿瘤血管密度与临床分期无关，而肿瘤内血管丰富的患者预后较好 [19] 。
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究其原因，肿瘤血管分布存在异质性可能是造成MVD研究结果不一的主要原因。Schor认为MVD值不足以代表非小细胞肺癌血管形成活性，如果只检测肿瘤内某一区域的MVD，其评估肿瘤内血管丰富程度的准确性低于68% [20] 。另外检测抗体不同(CD31、CD34或Ⅷ因子)、计数区域选择不同(肿瘤内或肿瘤浸润前缘)、微血管计数标准不一致，以及研究人员的检测误差也是目前肿瘤MVD研究中需要解决的问题。
综上所述，食管癌放射治疗后远处转移日益多见，转移相关因子研究的重要性凸现。虽然本研究不足以支持nm23表达和MVD与食管癌放射治疗后远处转移和预后相关，但初步研究显示随nm23表达增强及MVD的降低，远处转移和区域淋巴结转移有减少趋势，鉴于我院食管癌放射治疗前行食管镜检查还不普及，笔者搜集病例数较少，所以nm23和MVD和食管癌放射治疗预后关系及在治疗中的价值有待今后通过扩大样本量及规范检测方法进一步研究。(致谢:实验室工作得到我院病理科陆宏芬副教授、范月珍老师的大力支持。)
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作者单位:200032复旦大学附属肿瘤医院放射治疗科(现单位:复旦大学附属华山医院上海伽玛刀医院放射治疗中心; 通讯作者)
(收稿日期:2004-02-18)
(编辑青 山), http://www.100md.com