乳腺癌组织中PCNA的表达及其意义
【摘要】 目的 探讨乳腺癌组织中PCNA的表达及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法 采用SABC免疫组织化学技术，对53例乳腺癌组织中PCNA的表达进行了检测。结果 53例乳腺癌组织中PCNA的阳性表达率为71.7%，其表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期、ER、PR的表达无显著相关性(P>0.05)，而与组织学分级、淋巴结转移及VEGF的表达密切相关(P<0.05)。结论 PCNA的表达与乳腺癌组织的低分化及浸润、转移密切相关，可作为乳腺癌的生物学标记。 关键词 乳腺癌 PCNA 免疫组织化学 表达
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)05-0401-02
The expression and significance of PCNA in breast cancer tissue
Zeng Guqing，Liu Yan，Gu Yixue，et al.
, http://www.100md.com
Medical College of Nanhua University，Hengyang421001.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of PCNA in breast cancer and it’s correlation with cliniˉcopathologcal indicators.Methods Expression of PCNA were tested in53breast cancer tissues with SABC immunoˉhistochemical methods.Results Positive rates of PCNA in53breast cancer were71.7%(38/53).Expression of PCˉNA was not correlated with patient’s age，tumer size，ER，PR，and TNM stage(P>0.05)，but correlated with histoˉlogical grade，lymph-node metastasis and the expressions of VEGF(P<0.05).Conclusion The expression of PCˉNA isclosely related to poor differentiation，tumor invasion and lymph-node metastasis of breast carcinoma，and it could be used as a biologic marker for breast cancer.
, 百拇医药
Key words breast cancer PCNA immunohistochemistry expression
增殖细胞核抗原(PCNA)是反映细胞增殖活性的重要指标，PCNA表达越多则提示肿瘤细胞增殖越快。关于PCˉNA的表达与乳腺癌临床病理因素之间的关系虽有报道，但不同学者报道不尽相同，争论颇多 [1，2] 。本文检测了PCNA在乳腺癌组织中的表达并探讨了其与乳腺癌临床病理特征、VEGF、ER、PR的关系。
1 资料与方法
1.1 资料收集 选取南华大学附属第一医院1997年1月～1998年6月确诊为乳腺癌并行乳腺癌根治术的病例53例，均为女性，年龄23～74岁(平均48岁)。术前未做过任何化疗或放疗。复阅HE切片和临床病史资料。按WHO分类标准进行病理分型，其中浸润性导管癌47例，浸润性小叶癌3例，粘液癌1例，髓样癌2例。对浸润性导管癌参考Bloom-Richardson分级法进行评分定量分级(Ⅰ～Ⅲ级)。所有病例均进行了VEGF、ER、PR蛋白检测 [3] 。
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1.2 试剂与免疫组化方法 抗PCNA抗体、SABC试剂盒和DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。采用免疫组织化学SABC法，取存档蜡块连续切片，厚4μm，常规脱蜡、水化后，采用微波进行抗原修复，严格按照试剂说明书操作，DAB镜下控制显色，以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。免疫组化染色结果判断标准以癌细胞胞核呈黄色或棕黄色为阳性，每张切片由2名病理医师双盲观测5个具有代表性的高倍视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，依据镜下阳性染色细胞占癌细胞总数的百分率综合判定。PCNA标记指数(PCNA LI)=阳性细胞数/1000×100%，≤20%为阴性，>20%为阳性。
1.3 统计学方法 采用卡方检验。
2 结果
2.1 PCNA蛋白在乳腺癌组织中的表达 PCNA的阳性表达产物位于细胞核，为黄色或棕黄色，呈颗粒状(见图1)。PCNA标记指数为5.9%～91.2%。阳性率为71.7%(38/53)。
, 百拇医药
2.2 PCNA的表达与乳腺癌临床病理特征的关系 PCNA的表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期及ER、PR的表达无关(P>0.05)，而与肿瘤的组织学分级、是否有淋巴结转移及VEGF的表达密切相关。PCNA的阳性表达率与浸润性导管癌分级呈正相关，其中Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ级比较差异有显著性(χ 2 =4.97，P<0.05)，淋巴结转移者PCNA的阳性率明显高于无淋巴结转移者(χ 2 =6.4，P<0.05)，PCNA的阳性表达与VEGF的阳性表达成正相关。见表1。
3 讨论
PCNA是δ-DNA聚合酶的一个辅助蛋白，在DNA合成中发挥重要作用，认为是一评价肿瘤增生活性和肿瘤恶性程度的可靠指标。免疫组化技术是一种检测基因蛋白水平变化的有方法，笔者用SABC法检测到PCNA在乳腺癌组织中定位于癌细胞核内。53例乳腺癌中阳性表达率为71.7%。本实验通过研究PCNA蛋白的表达与乳腺癌的临床病理特征的关系，发现PCNA的阳性表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期、ER、PR的阳性表达情况没有明显的相关性(P>0.05)，但与乳腺癌的组织学分级有关。随着组织学分级的上升，PCNA的阳性率逐渐上升，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级比较差异有显著性(P<0.05)。有淋巴结转移者PCNA的表达率明显高于无淋巴结转移者，并且组间差异有显著性。这说明组织分化愈低、细胞核分化愈差、有淋巴结转移者则 PCNA阳性表达愈高。PCNA的表达与乳腺癌组织的低分化及浸润、转移密切相关。53例乳腺癌中，33例PCNA和
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表1 PCNA的表达与乳腺癌临床病理特征的关系
注: ˇ 包括浸润性小叶癌3例，粘液癌1例，髓样癌2例VEGF均呈阳性表达，9例VEGF呈阳性表达而PCNA呈阴性表达，5例PCNA呈阳性表达而VEGF呈阴性表达，6例两者均呈阴性表达。配对资料的χ 2 检验显示，PCNA蛋白和VEGF具有相关性(χ 2 =4.71，P<0.05)。VEGF具有特异性促进内皮细胞分裂增殖并增加血管通透性的活性，在实体肿瘤的生长和转移中起着重要的作用。本研究结果表明VEGF和PCNA两者在乳腺癌中的表达呈明显的相关关系，VEGF表达强度越强，PCNA LI亦越高，其机理可能是由于细胞增生增加，使肿瘤集聚，张力增高，可致缺氧，缺氧诱导VEGF表达 [4] ，促进血管生成，而血管生成又可使肿瘤细胞得到更多的氧和养分，细胞增殖加快。
总之，我们认为PCNA的表达与乳腺癌组织的低分化 及浸润、转移密切相关，可作为乳腺癌的生物学标记。
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参考文献
1 Lazaris ACh，Chatzigianni EB，Panoussopoulos D，et al.Proliferating cell nuclear antigen and heat shock protein70immunolocalization in invasive ductal breast cancer not otherwise specified.Breast Cancer Res Treat，1997，43(1):43-51.
2 李晓军，史海安.原发性乳腺癌PCNA、P53表达及临床意义.腹部外科，2001，14(3):182-183.
3 曾谷清，方松清，刘彦，等.血管内皮因子在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.南华大学学报，医学版，2003，31(3):269-271.4 Carmelet P，Jain RK.Angiogenesis in cancer and other diseases.Nature，2000，14:249-257.
作者单位:421001湖南衡阳南华大学医学院外总手术学教研室
(收稿日期:2003-10-14)
(编辑秋 实), http://www.100md.com
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)05-0401-02
The expression and significance of PCNA in breast cancer tissue
Zeng Guqing，Liu Yan，Gu Yixue，et al.
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Medical College of Nanhua University，Hengyang421001.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of PCNA in breast cancer and it’s correlation with cliniˉcopathologcal indicators.Methods Expression of PCNA were tested in53breast cancer tissues with SABC immunoˉhistochemical methods.Results Positive rates of PCNA in53breast cancer were71.7%(38/53).Expression of PCˉNA was not correlated with patient’s age，tumer size，ER，PR，and TNM stage(P>0.05)，but correlated with histoˉlogical grade，lymph-node metastasis and the expressions of VEGF(P<0.05).Conclusion The expression of PCˉNA isclosely related to poor differentiation，tumor invasion and lymph-node metastasis of breast carcinoma，and it could be used as a biologic marker for breast cancer.
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Key words breast cancer PCNA immunohistochemistry expression
增殖细胞核抗原(PCNA)是反映细胞增殖活性的重要指标，PCNA表达越多则提示肿瘤细胞增殖越快。关于PCˉNA的表达与乳腺癌临床病理因素之间的关系虽有报道，但不同学者报道不尽相同，争论颇多 [1，2] 。本文检测了PCNA在乳腺癌组织中的表达并探讨了其与乳腺癌临床病理特征、VEGF、ER、PR的关系。
1 资料与方法
1.1 资料收集 选取南华大学附属第一医院1997年1月～1998年6月确诊为乳腺癌并行乳腺癌根治术的病例53例，均为女性，年龄23～74岁(平均48岁)。术前未做过任何化疗或放疗。复阅HE切片和临床病史资料。按WHO分类标准进行病理分型，其中浸润性导管癌47例，浸润性小叶癌3例，粘液癌1例，髓样癌2例。对浸润性导管癌参考Bloom-Richardson分级法进行评分定量分级(Ⅰ～Ⅲ级)。所有病例均进行了VEGF、ER、PR蛋白检测 [3] 。
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1.2 试剂与免疫组化方法 抗PCNA抗体、SABC试剂盒和DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。采用免疫组织化学SABC法，取存档蜡块连续切片，厚4μm，常规脱蜡、水化后，采用微波进行抗原修复，严格按照试剂说明书操作，DAB镜下控制显色，以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。免疫组化染色结果判断标准以癌细胞胞核呈黄色或棕黄色为阳性，每张切片由2名病理医师双盲观测5个具有代表性的高倍视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，依据镜下阳性染色细胞占癌细胞总数的百分率综合判定。PCNA标记指数(PCNA LI)=阳性细胞数/1000×100%，≤20%为阴性，>20%为阳性。
1.3 统计学方法 采用卡方检验。
2 结果
2.1 PCNA蛋白在乳腺癌组织中的表达 PCNA的阳性表达产物位于细胞核，为黄色或棕黄色，呈颗粒状(见图1)。PCNA标记指数为5.9%～91.2%。阳性率为71.7%(38/53)。
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2.2 PCNA的表达与乳腺癌临床病理特征的关系 PCNA的表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期及ER、PR的表达无关(P>0.05)，而与肿瘤的组织学分级、是否有淋巴结转移及VEGF的表达密切相关。PCNA的阳性表达率与浸润性导管癌分级呈正相关，其中Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ级比较差异有显著性(χ 2 =4.97，P<0.05)，淋巴结转移者PCNA的阳性率明显高于无淋巴结转移者(χ 2 =6.4，P<0.05)，PCNA的阳性表达与VEGF的阳性表达成正相关。见表1。
3 讨论
PCNA是δ-DNA聚合酶的一个辅助蛋白，在DNA合成中发挥重要作用，认为是一评价肿瘤增生活性和肿瘤恶性程度的可靠指标。免疫组化技术是一种检测基因蛋白水平变化的有方法，笔者用SABC法检测到PCNA在乳腺癌组织中定位于癌细胞核内。53例乳腺癌中阳性表达率为71.7%。本实验通过研究PCNA蛋白的表达与乳腺癌的临床病理特征的关系，发现PCNA的阳性表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期、ER、PR的阳性表达情况没有明显的相关性(P>0.05)，但与乳腺癌的组织学分级有关。随着组织学分级的上升，PCNA的阳性率逐渐上升，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级比较差异有显著性(P<0.05)。有淋巴结转移者PCNA的表达率明显高于无淋巴结转移者，并且组间差异有显著性。这说明组织分化愈低、细胞核分化愈差、有淋巴结转移者则 PCNA阳性表达愈高。PCNA的表达与乳腺癌组织的低分化及浸润、转移密切相关。53例乳腺癌中，33例PCNA和
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表1 PCNA的表达与乳腺癌临床病理特征的关系
注: ˇ 包括浸润性小叶癌3例，粘液癌1例，髓样癌2例VEGF均呈阳性表达，9例VEGF呈阳性表达而PCNA呈阴性表达，5例PCNA呈阳性表达而VEGF呈阴性表达，6例两者均呈阴性表达。配对资料的χ 2 检验显示，PCNA蛋白和VEGF具有相关性(χ 2 =4.71，P<0.05)。VEGF具有特异性促进内皮细胞分裂增殖并增加血管通透性的活性，在实体肿瘤的生长和转移中起着重要的作用。本研究结果表明VEGF和PCNA两者在乳腺癌中的表达呈明显的相关关系，VEGF表达强度越强，PCNA LI亦越高，其机理可能是由于细胞增生增加，使肿瘤集聚，张力增高，可致缺氧，缺氧诱导VEGF表达 [4] ，促进血管生成，而血管生成又可使肿瘤细胞得到更多的氧和养分，细胞增殖加快。
总之，我们认为PCNA的表达与乳腺癌组织的低分化 及浸润、转移密切相关，可作为乳腺癌的生物学标记。
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参考文献
1 Lazaris ACh，Chatzigianni EB，Panoussopoulos D，et al.Proliferating cell nuclear antigen and heat shock protein70immunolocalization in invasive ductal breast cancer not otherwise specified.Breast Cancer Res Treat，1997，43(1):43-51.
2 李晓军，史海安.原发性乳腺癌PCNA、P53表达及临床意义.腹部外科，2001，14(3):182-183.
3 曾谷清，方松清，刘彦，等.血管内皮因子在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.南华大学学报，医学版，2003，31(3):269-271.4 Carmelet P，Jain RK.Angiogenesis in cancer and other diseases.Nature，2000，14:249-257.
作者单位:421001湖南衡阳南华大学医学院外总手术学教研室
(收稿日期:2003-10-14)
(编辑秋 实), http://www.100md.com