复方当归养血软胶囊中当归的超临界萃取(SFE)工艺及含量测定方法的研究
【摘要】 目的 研究复方当归养血软胶囊中当归的超临界Co2萃取的最佳工艺，建立当归养血软胶囊中当归的质量控制方法。方法 用正交设计试验筛选超临界萃取当归中有效成分的最佳条件，采用HPLC进行方法学研究，确定软胶囊中当归的活性成分阿魏酸的含量测定方法。结果 获得了SFE提取当归中挥发性有效成分最佳工艺条件，用HPLC控制当归补血软胶囊中当归的含量，结果满意。结论 利用超临界流体方法萃取当归中活性成分，方法简单，适用于工业生产。HPLC方法简便、灵敏，可用于复方当归养血软胶囊中阿魏酸的测定。
关键词 当归 超临界Co 2 萃取 阿魏酸 HPLC
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)09-0809-02
Study on the technique of supercritical fluids extract
, 百拇医药
and quantitative determination of angelica sinensis
in compound angelica sinensis yangxue soft capsules
Chen Guanglong
Shenzhen Baoan Hospital，Guandong518101.
【Abstract】 Objective To investigate the optimal technique of supercriticalfluids extracct on angelica sinenˉsis in compound angelica sinensis yangxue soft capsules，methed of mass control of angelica sinesis in compound angelˉica sinensis yangxue soft capsules was made.Methods By the orthogonal design test method modified optimal condiˉtion of the supercritical fluid extract.Conduct study of methods with HPLC，determine methods of quantitative determiˉnation on ferulic acid of activities compositoon of，The angelica sinensis in soft capsules.Results Obtain optimal technigue condition with SFE effective composition in angelica sinensis control content of angelca，sinesis in angelica sinesis yangtun soft capsules with HPLC，results was satisfied.Conclusion Supercritical fluuids extract method is simple for the activities of anglica sinensis and useful for thelarge-scale production.HPLC method is simple，sensiˉtive and suitable for the determination of ferulic acid in compund angelica sinensis yangxue sofe capsules.
, 百拇医药
Key words angelica sinesis supercritical fluids extraet(Co2)(SFE-Co 2 ) ferulic acid high performance liguid chromatography(HPLC)
复方当归补血软胶囊为当归、香附、黄精等提取物的制剂，主要成分为当归等，既能补血，又能活血，且兼行气止痛，入心、肝、脾三经，心主血、肝藏血，脾统血，故能主治一切血症，为血病之要品，尤为妇科良药。当归辛香善走，又有“血中气药”之称，与香附、黄精等味药配伍，具有养血调经、培补肝肾之功效，用于肝肾两亏、精血不足、月经失调，腰酸肢软等疾患。现代管理研究表明，当归是复方当归补血软胶囊中的君药，而其中阿魏酸是主要活性成分。因此，对其萃取工艺研究和含量测定方法研究具有重要意义。当归中挥发性成分的提取经典法可用压榨法、有机溶剂萃取法、水蒸汽蒸食留法等，前者收率低，后者工艺复杂，有机溶剂残留，水蒸汽蒸食留法效率低，有效成分被破坏。本实验采用现代新技术超临界流体萃取和HPLC方法，提取其活性成分和测定含量，得到理想的结果。
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1 当归的超临界Co 2 萃取工艺研究
超临界Co 2 萃取是近年来发展起来的一种现代新技术，它以Co 2 为溶剂，在临界温度和临界压力以上，使Co 2 成为既不是气体，又不是液体，而是成为超临界流体，它既具有穿透力强等气体的特性，又具有溶解度好、选择性强的液体的特性，且不污染环境，是中药现代化的一种理想新技术。
1.1 超临界萃取当归中挥发性成分的正交试验 当归中含有挥发性成分是本品中主要有效成分，因此可对其影响萃取效率的主要因素，如萃取压力、萃取温度、萃取时间等进行正交试验而获得最佳萃取工艺。SFE萃取当归中挥发性成分用三因素三水平进行考察，具体设置如表1，萃取结果见表2。
1.2 结果与讨论 由表2极差R可知:萃取压力的极差最大，为0.68，为主要影响萃取效果的因素，萃取温度和萃取时间的极差相似，均为次要因素，所以影响萃取因素由大到小依次为A、B、C。由表1，2直观可见，其最佳萃取条件为A 2 、B 3 、C 1 ，即萃取压力为25MPa，萃取温度为60℃，萃取时间为2h，经48立升SFE设备中放大试验研究，投料20kg，获取提取物达485g，提取得率为2.4%，达到了预期理想结果。
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表1 SFE萃取当归中挥发性成分因素水平表略
表2 SFE萃取当归的L9(33)试验结果 略
2 复方当归补血软胶囊中阿魏酸的测定方法研究
为了保证复方当归补血软胶囊的质量，对其中的君药当归中的活性成分阿魏酸的测定方法进行了评价。
2.1 仪器与试药 Waters公司高效液相色谱仪，Waters2487紫外检测仪，515HPLC泵，杭州英谱HS色谱工作台。阿魏酸对照品(中国药品生物制品核定所提供含量为99.66%，甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂均为分析纯)。
2.2 方法与结果
2.2.1 色谱条件 色谱柱为DiamonsilTM C18柱(200×4.65μ)，流动相为甲醇-水(69∶31)，检测波长为254nm，流速为1ml/min。
, 百拇医药
2.2.2 对照品液的配制 精密称取阿魏酸对照品9.8mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取0.4g的复方当归补血软胶囊2粒，取内容物，精密稳定，置50ml量瓶中，用流动相溶介并稀释至刻度，过滤备用。
2.2.4 线性关系考察 精密量取对照品溶液各适量，分别用流动相配制成0.98μg/ml、1.96μg/ml、2.94μg/ml、3.92μg/ml、4.90μg/ml，分别进样10μl，各进样二次，测定峰面积，求平均值，以进样量对峰面积，绘制标准曲线，得回归方程如下。回归方程:Y=12227.41X+0.00 相关系数r=0.9999
2.2.5 稳定性试验 精密取对照品液适量，用流动相稀释并制成每1ml含阿魏酸3.92μg/ml的溶液按测定方法色谱条件，分别0、4、8、12、24h内各进样10μl，测定峰面积，结果见表3。
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表3 稳定性试验结果表略
2.2.6 加样回收率试验 分别精密量取已知含量样品液各1.0ml，置10ml量瓶中，分别精密加入浓度98μg/ml，对照品液0.10、0.15、0.15、0.20、0.22ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，各精密量取10μl和对照品液(1.96μg/ml)10μl，注入液相色谱仪中，按测定方法色谱条件测定，即得结果，见表4。
表4 阿魏酸加样回收率试验结果表略
2.2.7 三批样品中阿魏酸含量测定 取不同批号的复方当归补血软胶囊，按2.2.3项方法制备供试液，分别精密量取对照液和供试液各10μl，注入液相色谱仪中测定峰面积，按外标法计算各批样品含量，结果见表5。
表5 复方当归补血软胶囊中阿魏酸含量测量结果(略)
, http://www.100md.com 3 讨论
当归的质量差别对超临界流体萃取得率和活性成分含量影响很大，因此必须采用符合中国药典2000年度版一部要求的药材 [1，2] ，才能保证成品的质量。
当归的粉碎粒度也是影响萃取收率的重要因素，因此事先必须将当归粉碎，过20～40目筛，提取得率才较为满意。
参考文献
1 卫生部药典委员会.中国药典.北京:化工出版社，2000.VOL1.2 The Forth NationalSymposiam on Supercritical Fluids(2002)(第四届全国超临界流体技术学术及应用研讨会论文集).
作者单位:518101广东省深圳市宝安区人民医院
(编辑 海涛), http://www.100md.com
关键词 当归 超临界Co 2 萃取 阿魏酸 HPLC
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)09-0809-02
Study on the technique of supercritical fluids extract
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and quantitative determination of angelica sinensis
in compound angelica sinensis yangxue soft capsules
Chen Guanglong
Shenzhen Baoan Hospital，Guandong518101.
【Abstract】 Objective To investigate the optimal technique of supercriticalfluids extracct on angelica sinenˉsis in compound angelica sinensis yangxue soft capsules，methed of mass control of angelica sinesis in compound angelˉica sinensis yangxue soft capsules was made.Methods By the orthogonal design test method modified optimal condiˉtion of the supercritical fluid extract.Conduct study of methods with HPLC，determine methods of quantitative determiˉnation on ferulic acid of activities compositoon of，The angelica sinensis in soft capsules.Results Obtain optimal technigue condition with SFE effective composition in angelica sinensis control content of angelca，sinesis in angelica sinesis yangtun soft capsules with HPLC，results was satisfied.Conclusion Supercritical fluuids extract method is simple for the activities of anglica sinensis and useful for thelarge-scale production.HPLC method is simple，sensiˉtive and suitable for the determination of ferulic acid in compund angelica sinensis yangxue sofe capsules.
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Key words angelica sinesis supercritical fluids extraet(Co2)(SFE-Co 2 ) ferulic acid high performance liguid chromatography(HPLC)
复方当归补血软胶囊为当归、香附、黄精等提取物的制剂，主要成分为当归等，既能补血，又能活血，且兼行气止痛，入心、肝、脾三经，心主血、肝藏血，脾统血，故能主治一切血症，为血病之要品，尤为妇科良药。当归辛香善走，又有“血中气药”之称，与香附、黄精等味药配伍，具有养血调经、培补肝肾之功效，用于肝肾两亏、精血不足、月经失调，腰酸肢软等疾患。现代管理研究表明，当归是复方当归补血软胶囊中的君药，而其中阿魏酸是主要活性成分。因此，对其萃取工艺研究和含量测定方法研究具有重要意义。当归中挥发性成分的提取经典法可用压榨法、有机溶剂萃取法、水蒸汽蒸食留法等，前者收率低，后者工艺复杂，有机溶剂残留，水蒸汽蒸食留法效率低，有效成分被破坏。本实验采用现代新技术超临界流体萃取和HPLC方法，提取其活性成分和测定含量，得到理想的结果。
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1 当归的超临界Co 2 萃取工艺研究
超临界Co 2 萃取是近年来发展起来的一种现代新技术，它以Co 2 为溶剂，在临界温度和临界压力以上，使Co 2 成为既不是气体，又不是液体，而是成为超临界流体，它既具有穿透力强等气体的特性，又具有溶解度好、选择性强的液体的特性，且不污染环境，是中药现代化的一种理想新技术。
1.1 超临界萃取当归中挥发性成分的正交试验 当归中含有挥发性成分是本品中主要有效成分，因此可对其影响萃取效率的主要因素，如萃取压力、萃取温度、萃取时间等进行正交试验而获得最佳萃取工艺。SFE萃取当归中挥发性成分用三因素三水平进行考察，具体设置如表1，萃取结果见表2。
1.2 结果与讨论 由表2极差R可知:萃取压力的极差最大，为0.68，为主要影响萃取效果的因素，萃取温度和萃取时间的极差相似，均为次要因素，所以影响萃取因素由大到小依次为A、B、C。由表1，2直观可见，其最佳萃取条件为A 2 、B 3 、C 1 ，即萃取压力为25MPa，萃取温度为60℃，萃取时间为2h，经48立升SFE设备中放大试验研究，投料20kg，获取提取物达485g，提取得率为2.4%，达到了预期理想结果。
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表1 SFE萃取当归中挥发性成分因素水平表略
表2 SFE萃取当归的L9(33)试验结果 略
2 复方当归补血软胶囊中阿魏酸的测定方法研究
为了保证复方当归补血软胶囊的质量，对其中的君药当归中的活性成分阿魏酸的测定方法进行了评价。
2.1 仪器与试药 Waters公司高效液相色谱仪，Waters2487紫外检测仪，515HPLC泵，杭州英谱HS色谱工作台。阿魏酸对照品(中国药品生物制品核定所提供含量为99.66%，甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂均为分析纯)。
2.2 方法与结果
2.2.1 色谱条件 色谱柱为DiamonsilTM C18柱(200×4.65μ)，流动相为甲醇-水(69∶31)，检测波长为254nm，流速为1ml/min。
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2.2.2 对照品液的配制 精密称取阿魏酸对照品9.8mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取0.4g的复方当归补血软胶囊2粒，取内容物，精密稳定，置50ml量瓶中，用流动相溶介并稀释至刻度，过滤备用。
2.2.4 线性关系考察 精密量取对照品溶液各适量，分别用流动相配制成0.98μg/ml、1.96μg/ml、2.94μg/ml、3.92μg/ml、4.90μg/ml，分别进样10μl，各进样二次，测定峰面积，求平均值，以进样量对峰面积，绘制标准曲线，得回归方程如下。回归方程:Y=12227.41X+0.00 相关系数r=0.9999
2.2.5 稳定性试验 精密取对照品液适量，用流动相稀释并制成每1ml含阿魏酸3.92μg/ml的溶液按测定方法色谱条件，分别0、4、8、12、24h内各进样10μl，测定峰面积，结果见表3。
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表3 稳定性试验结果表略
2.2.6 加样回收率试验 分别精密量取已知含量样品液各1.0ml，置10ml量瓶中，分别精密加入浓度98μg/ml，对照品液0.10、0.15、0.15、0.20、0.22ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，各精密量取10μl和对照品液(1.96μg/ml)10μl，注入液相色谱仪中，按测定方法色谱条件测定，即得结果，见表4。
表4 阿魏酸加样回收率试验结果表略
2.2.7 三批样品中阿魏酸含量测定 取不同批号的复方当归补血软胶囊，按2.2.3项方法制备供试液，分别精密量取对照液和供试液各10μl，注入液相色谱仪中测定峰面积，按外标法计算各批样品含量，结果见表5。
表5 复方当归补血软胶囊中阿魏酸含量测量结果(略)
, http://www.100md.com 3 讨论
当归的质量差别对超临界流体萃取得率和活性成分含量影响很大，因此必须采用符合中国药典2000年度版一部要求的药材 [1，2] ，才能保证成品的质量。
当归的粉碎粒度也是影响萃取收率的重要因素，因此事先必须将当归粉碎，过20～40目筛，提取得率才较为满意。
参考文献
1 卫生部药典委员会.中国药典.北京:化工出版社，2000.VOL1.2 The Forth NationalSymposiam on Supercritical Fluids(2002)(第四届全国超临界流体技术学术及应用研讨会论文集).
作者单位:518101广东省深圳市宝安区人民医院
(编辑 海涛), http://www.100md.com