升白合剂对胃癌细胞抑制作用的实验研究
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2004)06-0496-02
升白合剂，由黄芪、三七、鹿茸、补骨脂等组成，具有益气养血、补肾生髓、活血化瘀作用。临床主要用于治疗白细胞减少症，尤其对肿瘤病人放、化疗所引起的白细胞下降具有较好的防治作用。以前实验证实，该药对CTX化疗所造成的白细胞减少模型鼠，有较好的提升白细胞作用。为进一步了解其功效，本研究观察了该药对胃癌细胞的生长抑制的影响。
1 材料与方法
1.1 材料来源 实验细胞株:人胃低分化腺癌BGC-823细胞株引自中国科学研究院上海细胞生物研究所细胞库。升白合剂由同济医院药剂科提供，用紫外分光光度计在A280测定浓度为4.5mg/ml，用不含血清的1640培养液将原液分别按2、4、10、20、50、100、200、500倍稀释为另8种浓度:2.25mg/ml、1.125mg/ml、0.45mg/ml、0.225mg/ml、0.09mg/ml、0.045mg/ml、0.0225mg/ml、0.009mg/ml供实验用。
, 百拇医药
1.2 主要试剂和仪器 RPMI-1640培养基(GIBCO公司产品);MTT(sigma公司产品)，WJ-12C型CO 2 细胞培养箱(NAPCO MODEL5410);Multiscan MK-3酶联免疫检测仪(Thermo Labsystems)。
1.3 方法与步骤 采用MTT显色法:在含10%胎牛血清的1640培养液中培养细胞，在细胞达到指数增长期时用于实验。台盼蓝染色，细胞活力大于90%，记数细胞浓度为1×10 6 /ml，接种于无菌的96孔培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液100μl，再分别加入各100μl的9种不同浓度升白合剂提取液，设空白对照孔加1640培养液，实验对照孔加肿瘤细胞，每组均为3复孔。混匀后置于37℃、5%CO 2 培养箱中继续培养24h。于结束4h每孔吸去20μl上清液，然后每孔加入20μl浓度为5mg/ml MTT(四甲基偶氮唑蓝)，继续培养4h，吸去全部上清液，每孔加入二甲基亚砜100μl溶解液，微型混合器振荡10～15min，充分溶解，放入CO 2 培养箱中过夜后，用酶联免疫检测仪于570nm波长处测定光密度OD值，按抑制率计算公式计算升白合剂抑制胃癌细胞的百分率，确定最佳药物浓度，并用该浓度药物与细胞作用，通过同上的酶联免疫检测法来观察升白合剂不同时间对胃癌细胞作用和生长情况。
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1.4 肿瘤细胞抑瘤率计算公式 抑瘤率=1-(OD 实验组 -OD 空白组 )/(OD 实验对照组-OD 空白组 )×100%
2 结果
不同浓度升白合剂对抑制细胞作用比较:原液药物浓度4.5mg/ml平均吸光度值最低，抑瘤率最高，达到77.16%，药物浓度降低，抑瘤率随之下降，结果见表1、图1。图1 不同浓度升白合剂抑瘤率曲线图
表1 不同浓度升白合剂对细胞作用72h的平均吸光度值与抑制率
3 讨论
虽然应用化疗药物直接杀伤肿瘤细胞，是目前肿瘤治疗的常用方法，但易抑制和损害造血系统及免疫活性细胞，出现白细胞减少、免疫功能下降等不良反应，削弱机体抗肿瘤和抗感染的能力。中医药防治肿瘤的基本原则是扶正祛邪，攻补兼施。升白合剂是临床治疗白细胞减少的有效方，由黄芪、三七、鹿茸、补骨脂等组成。现代研究表明黄芪、三七、鹿茸、补骨脂能提升环磷酰胺所致外周血白细胞计数及骨髓DNA含量，明显减轻化疗的毒副作用，对肿瘤亦有一定的抑制作用。 本研究采用MMT法对不同浓度升白合剂作用下细胞72h的生长情况进行了观察，结果表明升白合剂对细胞生长的抑制成明显的浓度依赖性:最佳药物浓度在4.5mg/ml(原液)，对胃低分化腺癌有明显的杀伤作用，其抑制率达到77.16%。当药物浓度较低时(原液稀释10倍，0.45mg/ml)后，细胞吸光度值>0.93，提示对肿瘤无明显抑制作用。本研究提示升白合剂在一定浓度下对胃癌细胞有较明显的生长抑制作用，为临床用于肿瘤患者的辅助治疗进一步提供了药理学基础。
作者单位:200065同济大学附属同济医院
(收稿日期:2004-02-24)
(编辑日 强), 百拇医药
升白合剂，由黄芪、三七、鹿茸、补骨脂等组成，具有益气养血、补肾生髓、活血化瘀作用。临床主要用于治疗白细胞减少症，尤其对肿瘤病人放、化疗所引起的白细胞下降具有较好的防治作用。以前实验证实，该药对CTX化疗所造成的白细胞减少模型鼠，有较好的提升白细胞作用。为进一步了解其功效，本研究观察了该药对胃癌细胞的生长抑制的影响。
1 材料与方法
1.1 材料来源 实验细胞株:人胃低分化腺癌BGC-823细胞株引自中国科学研究院上海细胞生物研究所细胞库。升白合剂由同济医院药剂科提供，用紫外分光光度计在A280测定浓度为4.5mg/ml，用不含血清的1640培养液将原液分别按2、4、10、20、50、100、200、500倍稀释为另8种浓度:2.25mg/ml、1.125mg/ml、0.45mg/ml、0.225mg/ml、0.09mg/ml、0.045mg/ml、0.0225mg/ml、0.009mg/ml供实验用。
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1.2 主要试剂和仪器 RPMI-1640培养基(GIBCO公司产品);MTT(sigma公司产品)，WJ-12C型CO 2 细胞培养箱(NAPCO MODEL5410);Multiscan MK-3酶联免疫检测仪(Thermo Labsystems)。
1.3 方法与步骤 采用MTT显色法:在含10%胎牛血清的1640培养液中培养细胞，在细胞达到指数增长期时用于实验。台盼蓝染色，细胞活力大于90%，记数细胞浓度为1×10 6 /ml，接种于无菌的96孔培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液100μl，再分别加入各100μl的9种不同浓度升白合剂提取液，设空白对照孔加1640培养液，实验对照孔加肿瘤细胞，每组均为3复孔。混匀后置于37℃、5%CO 2 培养箱中继续培养24h。于结束4h每孔吸去20μl上清液，然后每孔加入20μl浓度为5mg/ml MTT(四甲基偶氮唑蓝)，继续培养4h，吸去全部上清液，每孔加入二甲基亚砜100μl溶解液，微型混合器振荡10～15min，充分溶解，放入CO 2 培养箱中过夜后，用酶联免疫检测仪于570nm波长处测定光密度OD值，按抑制率计算公式计算升白合剂抑制胃癌细胞的百分率，确定最佳药物浓度，并用该浓度药物与细胞作用，通过同上的酶联免疫检测法来观察升白合剂不同时间对胃癌细胞作用和生长情况。
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1.4 肿瘤细胞抑瘤率计算公式 抑瘤率=1-(OD 实验组 -OD 空白组 )/(OD 实验对照组-OD 空白组 )×100%
2 结果
不同浓度升白合剂对抑制细胞作用比较:原液药物浓度4.5mg/ml平均吸光度值最低，抑瘤率最高，达到77.16%，药物浓度降低，抑瘤率随之下降，结果见表1、图1。图1 不同浓度升白合剂抑瘤率曲线图
表1 不同浓度升白合剂对细胞作用72h的平均吸光度值与抑制率
3 讨论
虽然应用化疗药物直接杀伤肿瘤细胞，是目前肿瘤治疗的常用方法，但易抑制和损害造血系统及免疫活性细胞，出现白细胞减少、免疫功能下降等不良反应，削弱机体抗肿瘤和抗感染的能力。中医药防治肿瘤的基本原则是扶正祛邪，攻补兼施。升白合剂是临床治疗白细胞减少的有效方，由黄芪、三七、鹿茸、补骨脂等组成。现代研究表明黄芪、三七、鹿茸、补骨脂能提升环磷酰胺所致外周血白细胞计数及骨髓DNA含量，明显减轻化疗的毒副作用，对肿瘤亦有一定的抑制作用。 本研究采用MMT法对不同浓度升白合剂作用下细胞72h的生长情况进行了观察，结果表明升白合剂对细胞生长的抑制成明显的浓度依赖性:最佳药物浓度在4.5mg/ml(原液)，对胃低分化腺癌有明显的杀伤作用，其抑制率达到77.16%。当药物浓度较低时(原液稀释10倍，0.45mg/ml)后，细胞吸光度值>0.93，提示对肿瘤无明显抑制作用。本研究提示升白合剂在一定浓度下对胃癌细胞有较明显的生长抑制作用，为临床用于肿瘤患者的辅助治疗进一步提供了药理学基础。
作者单位:200065同济大学附属同济医院
(收稿日期:2004-02-24)
(编辑日 强), 百拇医药