肝硬化患者外周血中TGF-β 1 和ET-1的表达
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【摘要】 目的 研究肝硬化患者转化生长因子β 1 (TGF-β 1 )及血浆内皮素-1(ET-1)的表达，并探讨其与肝脏贮备功能和食管静脉曲张的关系。方法 采用标准生物学方法即TGF-β 1 对水貂肺上皮细胞生长抑制的方法及放免法分别检测72例肝硬化患者及24例正常人血清GFˉβ 1 及血浆ET-1水平。结果 肝硬化组血清TGF-β 1 (11.77±1.32ng/ml)及血浆ET-1(78.37±17.54pg/ml)水平明显高于正常对照组(P<0.05);ET-1水平与肝功能及食道静脉曲张程度相关分析显示ET-1水平越高则肝脏贮备功能越差(r=0.94)，食道静脉曲张程度越重(r=0.87);TGF-β 1 含量与肝脏贮备功能及食道静脉曲张程度无关(r=0.11及0.03)。结论 TGF-β 1 和ET-1可能是参与肝硬化病理生理过程的重要神经肽。ET-1可作为反映肝硬化程度、判断预后的参考指标。
关键词 肝硬化 内皮素-1 转化生长因子β 1
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)12-1066-03
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TGF-β 1 and ET-1expression in the peripheral blood of patients with cirrhosis
Xie Jianmin
Department of Laboratory，Shun De First Hospital，Shunde528000.
【Abstract】 Objective The aims of this study were to determine;the variation of blood TGF-β 1 and ET-1in patients with liver cirrhosis;the relationship ofthe blood TGF-β 1 and ET-1with Child degree of liver function and the severityof esophage alvarices.Methods Peripheral blood samples were obtained from72patients and24norˉmal controls.The blood levels of TGF-β 1 and ET-1were measured by using as standard bioassay and the radioimˉmunoassay.Results TGF-β 1 level(11.77±1.32ng/ml)and ET-1level(78.37±17.54pg/ml)were signify-cantly higher in the patients than those in controls(P<0.05).Theincrease of the ET-1in the patients is closely as sociated with Child degree of liver function(r=0.94)and the severity of esophagealvarices(r=0.87).TGF-β 1 concentration is not as sociated with Child degree of liver function(r=0.11)and the severity of esophagealvarices.Conclusion TGF-β 1 and ET-1may play an important role in the pathophysiologic process of cirrhosis.ET-1concentration may reflect portal hypertension development.
, 百拇医药
Key words liver cirrhosis ET-1 TGF-β 1
本研究通过测定肝硬化患者血中的TGF-β 1 和ET-1的水平，并观察其与肝脏贮备功能和食道静脉曲张的关系，为探讨TGF-β1 和ET-1在肝硬化发生、发展过程中的作用提供依据。
1 资料与方法
1.1 临床资料 84例肝硬化患者均为我院1999年2月～2000年2月的住院病人，其中男62例、女22例，年龄为40～73岁，平均49岁。肝硬化组又根据肝功Child-pugh改良分级法分为A(18例)、B(30例)、C(36例)3级。肝硬化组还根据食道静脉曲张有无及程度分为无曲张组(10例)、轻度组(14例)、中度组(28例)和重度组(32例)。正常对照20例，为健康志愿者，其中男12例，女8例，年龄20～46岁，平均30岁。两组均无原发性心、肺、肾疾病及高血压病。
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1.2 测定方法 受检者空腹8h，于清晨7～8时取静脉血5ml，2ml加入装有EDTA二钠和抑肽酶的塑料试管中，送检ET-1;另3ml注入不抗凝试管中，待血块收缩后，以2000r/min离心10min，取血清置-20℃冰箱保存，检测TGF-β 1 。 血浆样品的ET-1含量测定采用放免法，试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供，操作步骤按说明书进行。TGF-β 1 含量的检测采用标准的生物学方法即TGF-β 1 对水貂肺上皮细胞Mv1Lu细胞(引自上海细胞所)生长抑制的方法测定。为测定总TGF-β 1 活性，标本须先经酸处理，再以碱中和至pH7.4，再用于检测。
1.3 统计学处理 所有数据均以(X±s)表示。显著性检验采用t检验。相关性分析采用Spearman方法。
2 结果
2.1 外周血TGF-β 1 及ET-1检测结果结果见表1。肝硬化组血清TGF-β 1 及血浆ET-1的浓度均显著高于正常对照组(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与肝功能Child分级的关系由表2可见，肝功能Child分级与血浆ET-1水平呈正相关(r=0.94)，与血清TGF-β 1 水平无关(r=0.11)，即肝硬化患者肝功能越差则其外周血中ET-1水平越高，而TGF-β 1 水平与患者肝功能无关。表1 外周血TGF-β 1 及ET-1检测结果 (略)表2 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与肝功能Child分级的关系 (略)
2.3 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与食道静脉曲张程度的关系由表3可见，食道静脉曲张程度与血浆ET-1水平呈正相关(r=0.87)，与血清TGF-β 1 水平无关(r=0.03)， 即肝硬化患者食道静脉曲张程度越重则其外周血中ET-1水平越高，而TGFβ 1 水平与患者食道静脉曲张程度无关。表3 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与食道静脉曲张程度的关系 (略)
3 讨论
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已有报道证实肝硬化时血清HA、IVC·C含量明显升高，认为HA是一种蛋白多糖，由间质细胞合成，肝内皮细胞清除，在肝硬化时血清内源性HA水平升高，是由于产生HA过多及清除减少所致 [1] 。其血清水平能同时反映肝纤维化的活动和肝功能损害的程度，随着纤维化加重而逐渐升高 [1] 。IVC·C是基底膜的主要成分，在肝内合成与代谢，肝纤维化IV·C异常增生，分布紊乱，从而使肝组织内间隔及门管区的基底膜含量明显增多，大量沉积，形成肝窦毛细血管化，血清中IVC·C呈上升趋势 [2] 。HA、IVC·C两项同时检测是判断肝纤维化的良好指标。肝脏内的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)主要由单核细胞产生，肝脏内TNF-α水平可反映肝组织损伤的严重程度，有研究发现:慢性重型肝炎和肝硬化患者肝组织中的TNF-α阳性细胞明显高于正常对照组，且随肝纤维化程度加重其阳性细胞数明显增多，认为TNF-α与肝纤维化形成密切相关，并可能促进肝纤维化的发生和发展 [3] 。
, http://www.100md.com 本文研究结果显示肝硬化患者血清TNF-α、HA与IVC·C的含量与对照组比较明显升高，说明HA、IVC·C既是反映肝脏活动性纤维化的定量指标，又是反映肝脏损伤的定量指标，两项联合检测可以提高特异性，有助于早期肝硬化的诊断，为临床治疗提供必要的实验依据。本文还发现TNF-α与HA、IVC·C水平变化呈正相关。说明TNF-α作为免疫细胞因子不仅参与慢性肝病的炎症过程，促进慢性肝病持续发展，并可能是发生肝纤维化的重要原因，在肝纤维化过程中，三者存在着某种协同作用，对早 期诊断肝纤维化、肝硬化有一定实用价值。
肝纤维化的形成主要是细胞外基质生成过多而降解不足，以致细胞外基质在肝细胞间隙大量沉积所致。肝硬化是细胞外基质由肝纤维化的可逆性沉积进一步发展为不可逆性沉积的结果。活化的星状细胞是细胞外基质生成的主要来源。多种细胞因子如TGF-β 1 、ET-1、TNF-α及HGF等直接或间接参与星状细胞的激活。而TGF-β 1 是最重要的促星状细胞活化因子之一 [4] 。本研究采用放免法及生物学方法检测了肝硬化患者外周血TGF-β 1 及ET-1水平，结果表明肝硬化患者血清TGF-β 1 及血浆ET-1水平明显高于正常对照组(P<0.05)。
, 百拇医药
GF-β 1 通过激活星状细胞使细胞外基质生成过多，导致细胞外基质在肝细胞间隙大量沉积，产生肝纤维化、肝硬化;还可促使星状细胞合成和释放ET-1 [5] 。星状细胞受到ET-1刺激后本身也分泌ET-1，反过来又刺激肝窦内皮细胞产生ET-1 [5] 。ET-1是一种在全身各组织广泛表达的强力缩血管肽。肝脏主要在间质细胞及胆道上皮细胞合成。肝脏如肝细胞、肝窦内皮细胞、星状细胞、中央静脉及门静脉存在大量的内皮素受体。ET-1能够诱导激活肝脏的星状细胞产生收缩反应，使肝窦缩小，导致肝脏微循环障碍，肝内血流阻力增加，引起门脉高压 [3] ，同时使肝脏发生缺血缺氧性损伤，说明TGF-β 1 和ET-1是参与肝硬化病理生理过程的重要神经肽，在肝脏损伤的病理过程中具有重要意义 [6] 。通过ET-1水平与肝功能及食道静脉曲张程度相关分析显示ET-1水平越高则肝脏贮备功能越差(r=0.94)，食道静脉曲张程度越重(r=0.87)，而血清TGF-β 1 水平与肝功能Child分级及食道静脉曲张程度均无关，说明ET-1可作为反映肝脏贮备功能及门脉高压程度的参考指标，而TGF-β 1与肝脏贮备功能及门脉高压的程度可能无直接的关系。
, http://www.100md.com
综上所述，肝硬化患者外周血中总TGF-β 1 和ET-1明显升高，TGF-β 1 和ET-1可能是参与肝硬化病理生理过程的重要神经肽。ET-1血浆水平与病情轻重有关，可作为反映病情、判断预后的参考指标。
参考文献
1 Bissell DM.Hepatic fibrisis as woundre pair:A progress report.Gastro-enterol，1998，33(2):295.
2 Gabriel A，Kuddus RH，Rao AS，et al.Down regulation of endothelin receptors by transforming growth factor beta1in hepatic stellate cells.Hepatol，1999，30(3):440.
, 百拇医药 3 Bauer M，Zhang JX，BauerI，et al.ET-1in duced al ternations of hepatic microcirculation:sinusoidalandextrasinusoidalsitesofaction.AmJˉPhysiol，1994，267(1Pt1):143.
4 Goto M，Takei Y，Kawano S，et al.Endothelin-1isinvolvedinthepathogenesisofischemic/reperfusionlivˉerinjurybyhepaticmicrocirculatorydisturbance.Hepatology，1994，19(3):675.
5 吴军，季闻行.一种简便快捷的总TGF测定方法.细胞生物学杂志，1992，14(4):189.
6 Bachem MG，Meyer D，Melchior R，et al.Action of rat liver perisinusoidallipocytes by transforming growth factors derived from my ofibrobˉlastlike cellsa potential mechanism of self perpetuation in liverfibroˉgenes is.Clin Inwest，1992，89(1):1.
(收稿日期:2004-03-06)
作者单位:528000广东省佛山市顺德区第一人民医院检验科
(编辑青 山), http://www.100md.com
关键词 肝硬化 内皮素-1 转化生长因子β 1
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)12-1066-03
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TGF-β 1 and ET-1expression in the peripheral blood of patients with cirrhosis
Xie Jianmin
Department of Laboratory，Shun De First Hospital，Shunde528000.
【Abstract】 Objective The aims of this study were to determine;the variation of blood TGF-β 1 and ET-1in patients with liver cirrhosis;the relationship ofthe blood TGF-β 1 and ET-1with Child degree of liver function and the severityof esophage alvarices.Methods Peripheral blood samples were obtained from72patients and24norˉmal controls.The blood levels of TGF-β 1 and ET-1were measured by using as standard bioassay and the radioimˉmunoassay.Results TGF-β 1 level(11.77±1.32ng/ml)and ET-1level(78.37±17.54pg/ml)were signify-cantly higher in the patients than those in controls(P<0.05).Theincrease of the ET-1in the patients is closely as sociated with Child degree of liver function(r=0.94)and the severity of esophagealvarices(r=0.87).TGF-β 1 concentration is not as sociated with Child degree of liver function(r=0.11)and the severity of esophagealvarices.Conclusion TGF-β 1 and ET-1may play an important role in the pathophysiologic process of cirrhosis.ET-1concentration may reflect portal hypertension development.
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Key words liver cirrhosis ET-1 TGF-β 1
本研究通过测定肝硬化患者血中的TGF-β 1 和ET-1的水平，并观察其与肝脏贮备功能和食道静脉曲张的关系，为探讨TGF-β1 和ET-1在肝硬化发生、发展过程中的作用提供依据。
1 资料与方法
1.1 临床资料 84例肝硬化患者均为我院1999年2月～2000年2月的住院病人，其中男62例、女22例，年龄为40～73岁，平均49岁。肝硬化组又根据肝功Child-pugh改良分级法分为A(18例)、B(30例)、C(36例)3级。肝硬化组还根据食道静脉曲张有无及程度分为无曲张组(10例)、轻度组(14例)、中度组(28例)和重度组(32例)。正常对照20例，为健康志愿者，其中男12例，女8例，年龄20～46岁，平均30岁。两组均无原发性心、肺、肾疾病及高血压病。
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1.2 测定方法 受检者空腹8h，于清晨7～8时取静脉血5ml，2ml加入装有EDTA二钠和抑肽酶的塑料试管中，送检ET-1;另3ml注入不抗凝试管中，待血块收缩后，以2000r/min离心10min，取血清置-20℃冰箱保存，检测TGF-β 1 。 血浆样品的ET-1含量测定采用放免法，试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供，操作步骤按说明书进行。TGF-β 1 含量的检测采用标准的生物学方法即TGF-β 1 对水貂肺上皮细胞Mv1Lu细胞(引自上海细胞所)生长抑制的方法测定。为测定总TGF-β 1 活性，标本须先经酸处理，再以碱中和至pH7.4，再用于检测。
1.3 统计学处理 所有数据均以(X±s)表示。显著性检验采用t检验。相关性分析采用Spearman方法。
2 结果
2.1 外周血TGF-β 1 及ET-1检测结果结果见表1。肝硬化组血清TGF-β 1 及血浆ET-1的浓度均显著高于正常对照组(P<0.05)。
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2.2 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与肝功能Child分级的关系由表2可见，肝功能Child分级与血浆ET-1水平呈正相关(r=0.94)，与血清TGF-β 1 水平无关(r=0.11)，即肝硬化患者肝功能越差则其外周血中ET-1水平越高，而TGF-β 1 水平与患者肝功能无关。表1 外周血TGF-β 1 及ET-1检测结果 (略)表2 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与肝功能Child分级的关系 (略)
2.3 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与食道静脉曲张程度的关系由表3可见，食道静脉曲张程度与血浆ET-1水平呈正相关(r=0.87)，与血清TGF-β 1 水平无关(r=0.03)， 即肝硬化患者食道静脉曲张程度越重则其外周血中ET-1水平越高，而TGFβ 1 水平与患者食道静脉曲张程度无关。表3 外周血TGF-β 1 及ET-1水平与食道静脉曲张程度的关系 (略)
3 讨论
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已有报道证实肝硬化时血清HA、IVC·C含量明显升高，认为HA是一种蛋白多糖，由间质细胞合成，肝内皮细胞清除，在肝硬化时血清内源性HA水平升高，是由于产生HA过多及清除减少所致 [1] 。其血清水平能同时反映肝纤维化的活动和肝功能损害的程度，随着纤维化加重而逐渐升高 [1] 。IVC·C是基底膜的主要成分，在肝内合成与代谢，肝纤维化IV·C异常增生，分布紊乱，从而使肝组织内间隔及门管区的基底膜含量明显增多，大量沉积，形成肝窦毛细血管化，血清中IVC·C呈上升趋势 [2] 。HA、IVC·C两项同时检测是判断肝纤维化的良好指标。肝脏内的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)主要由单核细胞产生，肝脏内TNF-α水平可反映肝组织损伤的严重程度，有研究发现:慢性重型肝炎和肝硬化患者肝组织中的TNF-α阳性细胞明显高于正常对照组，且随肝纤维化程度加重其阳性细胞数明显增多，认为TNF-α与肝纤维化形成密切相关，并可能促进肝纤维化的发生和发展 [3] 。
, http://www.100md.com 本文研究结果显示肝硬化患者血清TNF-α、HA与IVC·C的含量与对照组比较明显升高，说明HA、IVC·C既是反映肝脏活动性纤维化的定量指标，又是反映肝脏损伤的定量指标，两项联合检测可以提高特异性，有助于早期肝硬化的诊断，为临床治疗提供必要的实验依据。本文还发现TNF-α与HA、IVC·C水平变化呈正相关。说明TNF-α作为免疫细胞因子不仅参与慢性肝病的炎症过程，促进慢性肝病持续发展，并可能是发生肝纤维化的重要原因，在肝纤维化过程中，三者存在着某种协同作用，对早 期诊断肝纤维化、肝硬化有一定实用价值。
肝纤维化的形成主要是细胞外基质生成过多而降解不足，以致细胞外基质在肝细胞间隙大量沉积所致。肝硬化是细胞外基质由肝纤维化的可逆性沉积进一步发展为不可逆性沉积的结果。活化的星状细胞是细胞外基质生成的主要来源。多种细胞因子如TGF-β 1 、ET-1、TNF-α及HGF等直接或间接参与星状细胞的激活。而TGF-β 1 是最重要的促星状细胞活化因子之一 [4] 。本研究采用放免法及生物学方法检测了肝硬化患者外周血TGF-β 1 及ET-1水平，结果表明肝硬化患者血清TGF-β 1 及血浆ET-1水平明显高于正常对照组(P<0.05)。
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GF-β 1 通过激活星状细胞使细胞外基质生成过多，导致细胞外基质在肝细胞间隙大量沉积，产生肝纤维化、肝硬化;还可促使星状细胞合成和释放ET-1 [5] 。星状细胞受到ET-1刺激后本身也分泌ET-1，反过来又刺激肝窦内皮细胞产生ET-1 [5] 。ET-1是一种在全身各组织广泛表达的强力缩血管肽。肝脏主要在间质细胞及胆道上皮细胞合成。肝脏如肝细胞、肝窦内皮细胞、星状细胞、中央静脉及门静脉存在大量的内皮素受体。ET-1能够诱导激活肝脏的星状细胞产生收缩反应，使肝窦缩小，导致肝脏微循环障碍，肝内血流阻力增加，引起门脉高压 [3] ，同时使肝脏发生缺血缺氧性损伤，说明TGF-β 1 和ET-1是参与肝硬化病理生理过程的重要神经肽，在肝脏损伤的病理过程中具有重要意义 [6] 。通过ET-1水平与肝功能及食道静脉曲张程度相关分析显示ET-1水平越高则肝脏贮备功能越差(r=0.94)，食道静脉曲张程度越重(r=0.87)，而血清TGF-β 1 水平与肝功能Child分级及食道静脉曲张程度均无关，说明ET-1可作为反映肝脏贮备功能及门脉高压程度的参考指标，而TGF-β 1与肝脏贮备功能及门脉高压的程度可能无直接的关系。
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综上所述，肝硬化患者外周血中总TGF-β 1 和ET-1明显升高，TGF-β 1 和ET-1可能是参与肝硬化病理生理过程的重要神经肽。ET-1血浆水平与病情轻重有关，可作为反映病情、判断预后的参考指标。
参考文献
1 Bissell DM.Hepatic fibrisis as woundre pair:A progress report.Gastro-enterol，1998，33(2):295.
2 Gabriel A，Kuddus RH，Rao AS，et al.Down regulation of endothelin receptors by transforming growth factor beta1in hepatic stellate cells.Hepatol，1999，30(3):440.
, 百拇医药 3 Bauer M，Zhang JX，BauerI，et al.ET-1in duced al ternations of hepatic microcirculation:sinusoidalandextrasinusoidalsitesofaction.AmJˉPhysiol，1994，267(1Pt1):143.
4 Goto M，Takei Y，Kawano S，et al.Endothelin-1isinvolvedinthepathogenesisofischemic/reperfusionlivˉerinjurybyhepaticmicrocirculatorydisturbance.Hepatology，1994，19(3):675.
5 吴军，季闻行.一种简便快捷的总TGF测定方法.细胞生物学杂志，1992，14(4):189.
6 Bachem MG，Meyer D，Melchior R，et al.Action of rat liver perisinusoidallipocytes by transforming growth factors derived from my ofibrobˉlastlike cellsa potential mechanism of self perpetuation in liverfibroˉgenes is.Clin Inwest，1992，89(1):1.
(收稿日期:2004-03-06)
作者单位:528000广东省佛山市顺德区第一人民医院检验科
(编辑青 山), http://www.100md.com