新生鼠提取液对高脂血症大鼠血脂代谢的影响及其抗氧化作用研究
【摘要】 目的 观察新生大鼠提取液对实验性高脂血症大鼠血清总胆固醇、脂蛋白-胆固醇代谢的影响及其抗氧化作用。方法 新生鼠提取液按1.0、2.0、4.0ml/(kg·d)给大鼠连续灌胃给药12天，测血脂和MDA含量及SOD活性，并观察肝脏脂肪沉积情况。结果 新生鼠提取液2.0、4.0ml/kg能明显降低实验性高脂血症大鼠TG、TC、LDL-c及MDA含量，并明显提高HDL-c含量及SOD活性，亦能使TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c比值明显降低。病理检查可见肝脏脂肪沉积明显减轻。结论 新生鼠提取液可能通过调节体内血脂代谢、纠正自由基代谢紊乱发挥抗动脉硬化作用。
关键词 新生鼠提取液 高脂血症大鼠 血脂代谢 脂肪沉积
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2004)07-0577-03
Effect of NRE on blood lipid metabolism and anti-oxidation in hyperlipidemia rats
, 百拇医药
Chen Manqiu，Dong Junshu，Yang Jingwen，et al.
Dept.of Medicine，the First Clinical College，Jilin University，Changchun130021.
【Abstract】 Objective To observe effect of NRE on total cholesterol，lipoprotein cholesterol metabolism and anti-oxidation in experimental hyperlipidemia rats. Methods Hyperlipidemia rats were respectively given NRE 1.0、2.0、4.0ml/(kg·d)ig for twelve days. Blood lipid and malonydialdehyde(MDA)contents and superoxide dismutase(SOD)activitywere measured. At the same time，fat accumulation in liver was observed. Results Triglyceride(TG)、total cholesterol(TC)、low density lipoprotein cholesterol(LDL-c)and LPO contents were significantly decreased，and high density lipoprotein cholesterol(HDL-c)and SOD activity were significantly increased by NRE(2.0、4.0ml/kg)in experimental hyperlipidemia rats. In addition，NRE could decrease TC/HDL-c，LDL-c/HDL-c ratio and inhibit fat accumulation in liver. Conclusion NRE could have anti-arteriosclerosis effect by improving cholesterol and lipoprotein-cholesterol metabolism，suppressing lipid peroxidation，increasing anti-oxidase activity.
, http://www.100md.com
Key words NRE hyperlipidemia rats blood lipidmetabolism fat accumulation
随着生物化学的发展，生化药物已经成为临床治疗上不可缺少的药物之一。由新生大鼠提取物、山楂及荷叶等组成的降脂抗栓丸，作为治疗高血脂及动脉硬化的院内制剂，在临床上取得良好的疗效。为进一步开发利用院内制剂，本文对降脂抗栓丸的主要成分—新生大鼠提取液(Newborn rat extract，NRE)进行了活性成分测定，并通过实验性高脂血症模型，观察其对血脂代谢的影响，现报道如下。
1 材料和方法
1.1 动物及试剂 Wistar大鼠，雄性，体重208±13g，合格证号:医动字第10-5112，由白求恩医科大学实验动物部提供。甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
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1.2 NRE制备 将正常分娩后1天内的新生Wistar大鼠剪碎，按1:1(w/v)比例加生理盐水制成匀浆，电动搅拌将细胞打碎，以3000rpm离心20min，取上清液部分，置低温(-40℃)保存。
1.3 NRE活性物质测定 按照放免药盒的测定方法，测定NRE中雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、促滤泡成熟素(FSH)、垂体泌乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)、生长激素(GH)及心钠素(ANP)含量。
1.4 高脂模型制备[1] 高脂饮食组在给药前一天开始，每晚6:00～7:00给予高脂饲料(配方:2%胆固醇、0.2%甲基硫氧嘧啶、0.3%胆酸钠、7.5%猪油、90%普通饲料)，每只鼠平均20g，白天补充普通饲料，共12天。
1.5 方法 取Wistar大鼠72只，随机分为6组，每组12只。正常对照组:喂普通饲料，给生理盐水2ml/kg;模型对照组:喂高脂饲料，给生理盐水2ml/kg;阳性对照组:喂高脂饲料，给非诺贝特200mg/kg;NRE小、中、大剂量组:喂高脂饲料，分别给NRE1.0、2.0、4.0ml/kg。各组均于上午9:00～10:00灌胃给药1次，连续12天。于给药最后1天晚间禁食，不禁水，次日上午，将动物用3%戊巴比妥钠30mg/kg ip麻醉，自腹主动脉采血，分离血清，按试剂盒说明书方法测定TG、TC、LDL-c、HDL-c、MDA及SOD。取1/2肝脏置10%甲醛液中固定以行脂肪染色，观察脂肪沉积情况。另1/2肝脏待测MAD及SOD。
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2 结果
2.1 NRE活性物质测定 以8种放免药盒测定NRE中活性物质含量，结果E2(ng/ml)为35.10±31.22，ANP(ng/ml)为0.37±0.35，GH(ng/ml)为6.804.11，LH(mIU/ml)为0.49±0.05，h-PRL(mU/ml)为5.79±4.41，FSH(mIU/ml)为0.73±1.79，T(pmol/管)为1.27±0.72，P(pmol/ml)为3.83±1.10，表明NRE中含有多种性激素类物质及肽类物质，以E2、GH、ANP的含量较高。
2.2 NRE对高脂血症大鼠血脂代谢的影响 与正常对照组比较，高脂对照组血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c均显著升高(P<0.05或P<0.001)，而HDL-c则显著下降(P<0.01)，表明高脂模型复制成功。 与高脂对照组比较，NRE2.0、4.0ml/kg组均能明显降低血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c(P<0.05～P<0.01)，并明显升高血清HDL-c(P<0.01)，其作用效果与阳性对照药非诺贝特200mg/kg相当。NRE1.0ml/kg组对上述指标均无明显影响，见表1。
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表1 NRE对高脂血症大鼠血脂代谢的影响(x±s，mmol/L)(略) 注:与正常对照组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01; △△△ P<0.001;与高脂对照组比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001。
2.3 NRE对高脂血症大鼠血清及肝脏MAD及SOD的影响 与正常对照组比较，高脂对照组血清及肝脏MDA含量均明显升高(P<0.01)，而SOD活性明显降低(P<0.05)，表明高脂血症大鼠体内伴有自由基脂质过氧化损伤及抗氧化 酶活性降低。NRE1.0、2.0、4.0ml/kg剂量组均能使高脂血症大鼠血清及肝脏MDA含量明显降低，SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01)，见表2。
表2 NRE对高脂血症大鼠MDA及SOD的影响 (x±s，n=10)(略) 注:与正常对照组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01;与高脂对照组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。
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2.4 NRE对高脂血症大鼠肝组织脂肪沉积的影响 各组织肝脏标本固定切片后行脂肪染色，观察肝组织脂肪沉积情况。结果表明，正常对照组10只大鼠肝细胞均未见脂肪变性(0/10)，高脂对照组10只大鼠肝细胞均可见脂肪变性(10/10)，NRE1.0、2.0、4.0ml/kg组大鼠肝细胞脂肪变性分别为6/10、4/10、3/10，且脂肪空泡明显减少。经χ2检验，NRE2.0、4.0ml/kg组与高脂对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)，表明NRE可抑制高脂血症大鼠肝脏脂肪的沉积。
3 讨论
动脉粥样硬化(AS)是缺血性心、脑血管病的主要病理基础。而脂质代谢异常是AS形成的重要因素。现已知血清TC、TG和LDL水平与AS形成呈正相关;HDL水平与AS形成呈负相关[2，3]。本实验结果表明，NRE能使高脂血症大鼠的TC、TG、HDL-c明显
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降低，并升高HDL-c含量，说明其可能通过增加高脂血症大鼠外周组织细胞中的胆固醇向肝脏转运过程，以减少胆固醇在外周组织细胞中的聚集和对血管内皮细胞的广泛性损害，防治AS形成。
近年来自由基脂质过氧化损伤与AS发病的关系，已引起人们极大关注。实验性AS早期，MDA就明显增加，它可损伤内皮细胞膜，造成膜流动性减弱，减少PGI2的合成。MDA增高，使LDL发生氧化修饰，利用吞噬细胞吞噬，形成泡沫细胞，促进白细胞和血小板在动脉内膜的粘附和聚集，最终导致平滑肌细胞移植和脂质沉着，形成AS病变[4]。本实验结果表明，给高脂血症大鼠灌胃NRE后，血清及肝组织LPO含量均明显下降，而SOD活性明显增高，表明其可通过抑制脂质过氧化物的产生及提高自身的抗氧化酶活性发挥抗AS作用。
NRE中含有雌激素、心钠素及其它激素类物质，是否参与高脂血症损伤的保护作用有待于进一步探讨。
, 百拇医药
参考文献
1 睢大员，吕盅智，于晓风，等.莱葛冲剂对高脂血症模型大鼠血脂代谢的影响.白求恩医科大学学报，1996，22(6):604-605.
2 陈瑷.脂质过氧化和动脉粥样硬化.生物化学与生物物理进展，1989，16:278-283.
3 焦克荣.高脂血症的研究.心血管病学进展，1988，9(2):12-15.4 李艳妍，尹一子，睢大员，等.碟脉灵注射液对高脂血症大鼠血脂代谢的影响.吉林大学学报(医学版)，2002，28(4):357-359.
作者单位: 1 130021 吉林大学第一医院内科
2 130021 吉林大学药学院药理教研室
(收稿日期:2004-02-11) (编辑 阳光), http://www.100md.com
关键词 新生鼠提取液 高脂血症大鼠 血脂代谢 脂肪沉积
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2004)07-0577-03
Effect of NRE on blood lipid metabolism and anti-oxidation in hyperlipidemia rats
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Chen Manqiu，Dong Junshu，Yang Jingwen，et al.
Dept.of Medicine，the First Clinical College，Jilin University，Changchun130021.
【Abstract】 Objective To observe effect of NRE on total cholesterol，lipoprotein cholesterol metabolism and anti-oxidation in experimental hyperlipidemia rats. Methods Hyperlipidemia rats were respectively given NRE 1.0、2.0、4.0ml/(kg·d)ig for twelve days. Blood lipid and malonydialdehyde(MDA)contents and superoxide dismutase(SOD)activitywere measured. At the same time，fat accumulation in liver was observed. Results Triglyceride(TG)、total cholesterol(TC)、low density lipoprotein cholesterol(LDL-c)and LPO contents were significantly decreased，and high density lipoprotein cholesterol(HDL-c)and SOD activity were significantly increased by NRE(2.0、4.0ml/kg)in experimental hyperlipidemia rats. In addition，NRE could decrease TC/HDL-c，LDL-c/HDL-c ratio and inhibit fat accumulation in liver. Conclusion NRE could have anti-arteriosclerosis effect by improving cholesterol and lipoprotein-cholesterol metabolism，suppressing lipid peroxidation，increasing anti-oxidase activity.
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Key words NRE hyperlipidemia rats blood lipidmetabolism fat accumulation
随着生物化学的发展，生化药物已经成为临床治疗上不可缺少的药物之一。由新生大鼠提取物、山楂及荷叶等组成的降脂抗栓丸，作为治疗高血脂及动脉硬化的院内制剂，在临床上取得良好的疗效。为进一步开发利用院内制剂，本文对降脂抗栓丸的主要成分—新生大鼠提取液(Newborn rat extract，NRE)进行了活性成分测定，并通过实验性高脂血症模型，观察其对血脂代谢的影响，现报道如下。
1 材料和方法
1.1 动物及试剂 Wistar大鼠，雄性，体重208±13g，合格证号:医动字第10-5112，由白求恩医科大学实验动物部提供。甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
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1.2 NRE制备 将正常分娩后1天内的新生Wistar大鼠剪碎，按1:1(w/v)比例加生理盐水制成匀浆，电动搅拌将细胞打碎，以3000rpm离心20min，取上清液部分，置低温(-40℃)保存。
1.3 NRE活性物质测定 按照放免药盒的测定方法，测定NRE中雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、促滤泡成熟素(FSH)、垂体泌乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)、生长激素(GH)及心钠素(ANP)含量。
1.4 高脂模型制备[1] 高脂饮食组在给药前一天开始，每晚6:00～7:00给予高脂饲料(配方:2%胆固醇、0.2%甲基硫氧嘧啶、0.3%胆酸钠、7.5%猪油、90%普通饲料)，每只鼠平均20g，白天补充普通饲料，共12天。
1.5 方法 取Wistar大鼠72只，随机分为6组，每组12只。正常对照组:喂普通饲料，给生理盐水2ml/kg;模型对照组:喂高脂饲料，给生理盐水2ml/kg;阳性对照组:喂高脂饲料，给非诺贝特200mg/kg;NRE小、中、大剂量组:喂高脂饲料，分别给NRE1.0、2.0、4.0ml/kg。各组均于上午9:00～10:00灌胃给药1次，连续12天。于给药最后1天晚间禁食，不禁水，次日上午，将动物用3%戊巴比妥钠30mg/kg ip麻醉，自腹主动脉采血，分离血清，按试剂盒说明书方法测定TG、TC、LDL-c、HDL-c、MDA及SOD。取1/2肝脏置10%甲醛液中固定以行脂肪染色，观察脂肪沉积情况。另1/2肝脏待测MAD及SOD。
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2 结果
2.1 NRE活性物质测定 以8种放免药盒测定NRE中活性物质含量，结果E2(ng/ml)为35.10±31.22，ANP(ng/ml)为0.37±0.35，GH(ng/ml)为6.804.11，LH(mIU/ml)为0.49±0.05，h-PRL(mU/ml)为5.79±4.41，FSH(mIU/ml)为0.73±1.79，T(pmol/管)为1.27±0.72，P(pmol/ml)为3.83±1.10，表明NRE中含有多种性激素类物质及肽类物质，以E2、GH、ANP的含量较高。
2.2 NRE对高脂血症大鼠血脂代谢的影响 与正常对照组比较，高脂对照组血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c均显著升高(P<0.05或P<0.001)，而HDL-c则显著下降(P<0.01)，表明高脂模型复制成功。 与高脂对照组比较，NRE2.0、4.0ml/kg组均能明显降低血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c(P<0.05～P<0.01)，并明显升高血清HDL-c(P<0.01)，其作用效果与阳性对照药非诺贝特200mg/kg相当。NRE1.0ml/kg组对上述指标均无明显影响，见表1。
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表1 NRE对高脂血症大鼠血脂代谢的影响(x±s，mmol/L)(略) 注:与正常对照组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01; △△△ P<0.001;与高脂对照组比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001。
2.3 NRE对高脂血症大鼠血清及肝脏MAD及SOD的影响 与正常对照组比较，高脂对照组血清及肝脏MDA含量均明显升高(P<0.01)，而SOD活性明显降低(P<0.05)，表明高脂血症大鼠体内伴有自由基脂质过氧化损伤及抗氧化 酶活性降低。NRE1.0、2.0、4.0ml/kg剂量组均能使高脂血症大鼠血清及肝脏MDA含量明显降低，SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01)，见表2。
表2 NRE对高脂血症大鼠MDA及SOD的影响 (x±s，n=10)(略) 注:与正常对照组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01;与高脂对照组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。
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2.4 NRE对高脂血症大鼠肝组织脂肪沉积的影响 各组织肝脏标本固定切片后行脂肪染色，观察肝组织脂肪沉积情况。结果表明，正常对照组10只大鼠肝细胞均未见脂肪变性(0/10)，高脂对照组10只大鼠肝细胞均可见脂肪变性(10/10)，NRE1.0、2.0、4.0ml/kg组大鼠肝细胞脂肪变性分别为6/10、4/10、3/10，且脂肪空泡明显减少。经χ2检验，NRE2.0、4.0ml/kg组与高脂对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)，表明NRE可抑制高脂血症大鼠肝脏脂肪的沉积。
3 讨论
动脉粥样硬化(AS)是缺血性心、脑血管病的主要病理基础。而脂质代谢异常是AS形成的重要因素。现已知血清TC、TG和LDL水平与AS形成呈正相关;HDL水平与AS形成呈负相关[2，3]。本实验结果表明，NRE能使高脂血症大鼠的TC、TG、HDL-c明显
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降低，并升高HDL-c含量，说明其可能通过增加高脂血症大鼠外周组织细胞中的胆固醇向肝脏转运过程，以减少胆固醇在外周组织细胞中的聚集和对血管内皮细胞的广泛性损害，防治AS形成。
近年来自由基脂质过氧化损伤与AS发病的关系，已引起人们极大关注。实验性AS早期，MDA就明显增加，它可损伤内皮细胞膜，造成膜流动性减弱，减少PGI2的合成。MDA增高，使LDL发生氧化修饰，利用吞噬细胞吞噬，形成泡沫细胞，促进白细胞和血小板在动脉内膜的粘附和聚集，最终导致平滑肌细胞移植和脂质沉着，形成AS病变[4]。本实验结果表明，给高脂血症大鼠灌胃NRE后，血清及肝组织LPO含量均明显下降，而SOD活性明显增高，表明其可通过抑制脂质过氧化物的产生及提高自身的抗氧化酶活性发挥抗AS作用。
NRE中含有雌激素、心钠素及其它激素类物质，是否参与高脂血症损伤的保护作用有待于进一步探讨。
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参考文献
1 睢大员，吕盅智，于晓风，等.莱葛冲剂对高脂血症模型大鼠血脂代谢的影响.白求恩医科大学学报，1996，22(6):604-605.
2 陈瑷.脂质过氧化和动脉粥样硬化.生物化学与生物物理进展，1989，16:278-283.
3 焦克荣.高脂血症的研究.心血管病学进展，1988，9(2):12-15.4 李艳妍，尹一子，睢大员，等.碟脉灵注射液对高脂血症大鼠血脂代谢的影响.吉林大学学报(医学版)，2002，28(4):357-359.
作者单位: 1 130021 吉林大学第一医院内科
2 130021 吉林大学药学院药理教研室
(收稿日期:2004-02-11) (编辑 阳光), http://www.100md.com