中药对去卵巢大鼠骨质疏松抑制作用的实验研究
【摘要】 目的 探讨中药对骨质疏松症的疗效。方法 将大鼠随机制成去卵巢组(OVS)和对照组(Sham)。普通固体饲料(CA-1)或分别含有1%九种中药液的CA-1及水自由摄取条件下饲养。4周及12周后称重，测定24h尿中钙、磷、羟脯氨酸及去氧吡啶啉量。股骨称重及股骨干远端组织学观察。结果 OVS组在术后4，12周后的体重均比Sham组显著增加(P<0.05)。1日尿中羟脯氨酸量(μM/日)在4周时OVS组比Sham组明显增高(P<0.05);4，12周后的1日尿中去氧吡啶啉量(μM/日)OVS组均比Sham组明显增高。组织学上4，12周后的OVS组均见股骨干远端海绵骨骨小梁明显减少。在中药组中仅有女神散给药组在12周后的1日尿中去氧吡啶啉量(μM/日)OVS组比Sham组明显降低。结论 女神散给药12周后明显抑制了去卵巢大鼠的骨吸收。开始于用药4周以后，而OVS引起的海绵骨形态学变化非常迅速。提示女神散在卵巢切除、卵巢功能早衰或GnRHa应用患者的骨量维持及闭经后早期的骨质疏松的预防上可能有临床应用价值，应及早用药。
关键词 卵巢去势 骨质疏松症 中药治疗
, http://www.100md.com
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)06-0816-03
An experimental study on the inhibitory
effect of Chinese herbs on osteoporosis of ovariectomy rats
Shi Hong，Zhang Yan，Ye Hong，et al.
The First Affiliated Hosiptal of Dalian Medical University，Dalian116011.
【Abstract】 Objective To investigate the therapeutic effect of several kinds of Chinese herbs on osteoˉporosis.Methods SD rats were randomly divided into ovariectomized group(OVS)and sham-operated group(Sham).Freely fed with CA-1or CA-1contained1%one kind of Chinese herbs liquid respectively and water，Weighted the weight of the rats after4and12weeks，measured the amounts of24hours urinary calcium(Ca)，phosˉphorus(P)，hydroxyproline(HOP)，and deoxypyridinoline(DPD).Weighted the femur and observed the histomorpholgiˉcal changes at the distal end of femurs.Results The rat weights of OVS all significantly increased than those of sham after4and12weeks(P<0.05)，24h urinary amouts of HOP in OVS significantly increased than those of sham at4weeks，24h urinary DPD in OVS significant increased than that of sham after4and12weeks.In morphological examiˉnation the trabecula of spongy bone at the distal end of the femurs were remarkably decreased after4and12weeks.Only in the rats given nushensan herbs，24h urinary DPD of OVS remarkably lowered than that of sham after12weeks.Conclusion Ovariectomy can lead to the obvious increase in bone resorption.The increase in bone resorption was remarkably inhibited after giving nushensan herbs for12weeks.The effect of nushensan herbs on prevention of bone resorption started after4weeks oftreatment.Morphological changes of OVS were occurred rapidly.It suggested that nushensan herbs may be of clinical value in maintenance bone mass of the patientswith ovariectomy，premature oˉvarian failure or using GnRHa and in prevention early osteoporosis of postmenopausal women.Nushensan herbs should be given as early as possible.
, 百拇医药
Key words ovariectomy osteoporosis treating by Chinese herbs
骨质疏松是老年人的常见病之一，尤以绝经后妇女发病率最高。长期以来雌激素替代治疗被认为是最适合的治疗方法。但是雌激素长期应用会出现明显的毒副作用，尤其会使乳腺和子宫内膜癌发生的危险性增高，限制了雌激素的应用。因此寻找安全有效且可以长期应用的防治药物是十分必要的。此研究为探讨中药对骨质疏松症的疗效，对九种中药对卵巢去势大鼠的骨代谢的影响进行研究。
1 材料与方法
1.1 实验动物及用药 12周龄SD大鼠(大连医科大学动物实验室)普通饲养3周后，在腹腔内注射戊巴比妥40mg/kg麻醉下摘除两侧卵巢(OVS)为治疗组;仅开腹缝合(假手术)制成对照组(Sham)。普通固体饲料(CA-1)或分别含有1%各种中药液(加味归脾汤、加味逍遥散、牛车肾气丸、桂枝茯苓丸、女神散、人参养营汤、猪苓汤、当归芍药散、补中益气汤)的CA-1及水自由摄取条件下饲养。4周及12周后称重、代谢笼内单独收容，饲养24h，CA-1及水自由摄取条件下收集24h尿，3000rpm离心分离，上清液-30℃保存，测定24h尿中钙、磷、羟脯氨酸及去氧吡啶啉含量。麻醉、屠杀大鼠后摘除两侧股骨，右侧股骨以10%福尔马林固定后制成脱钙标本，进行HE染色。左侧股骨剔除软组织并干燥后测定重量。
, 百拇医药
1.2 分组 OVS和Sham组各8只大鼠以普通CA-1饲养，分别在饲养4周及12周时，各4只进行上述测定并屠杀，探讨卵巢摘除对骨形态和骨代谢的影响。30只OVS大鼠分成九种中药组及普通CA-1的对照组每组各3只，分别以含有1%的各种中药液的CA-1或普通CA-1饲养(自由摄取)，4周及12周后进行上述检查，12周后屠杀，探讨九种中药对去卵巢大鼠骨代谢的影响。
1.3 数据测定 中药液含有饲料中钙、磷浓度以ICP发光分光分析法进行测定，尿中钙浓度用o-CPC法，尿中磷浓度用酶学方法(DE-IP-S)进行测定并根据24h尿量计算出1日量。以比色法测定尿中羟脯氨酸 [1] 、以EIA法测定尿中去氧吡啶啉浓度 [2] ，计算1日量。
1.4 统计学处理 结果以均数±标准差表示，用t检验。
2 结果
2.1 卵巢摘除对骨形态和骨代谢的影响 术后4，12周后体重的变化(g):OVS组分别为361.0±4.4，391.3±10.1，与Sham组的309.8±10.7，336.3±15.9相比，均有显著增加(P<0.05)，(图1)。4，12周后的1日尿中钙、磷浓度在各两组间均无明显差异(图2，3)。1日尿中羟脯氨酸量(μM/日)在4周时OVS组为2.8±0.2，Sham组是1.4±0.2，OVS组明显增加(P<0.05)，但12周后两组间无明显差异(图4)。4，12周后的1日尿中去氧吡啶啉量(μM/日)OVS组分别为7.03±0.61，4.13±0.52，Sham组分别为2.01±0.46，1.73±0.43，均为OVS组明显增加(图5)。股骨重量4，12周后各两组间均未见明显差异(图6)。但组织学上4，12周后的OVS组均见股骨干远端部海绵骨骨小梁明显减少。
, 百拇医药
图1 手术后12周内的体重的变化(略)
图2 1日尿中排钙量(略)
2.2 9种中药液对去卵巢大鼠骨代谢的影响效果 各种1%中药液含有饲料中的钙、磷浓度与对照组(普通CA-1) 均无差异(表1)。体重的变化在OVS的对照组与中药组之间无明显差异，与Sham组比较体重明显增高(图7)。4，12周后的1日尿中去氧吡啶啉量(μM/日)在OVS的对照组与中药组之间的比较，仅有女神散给药组在12周后为1.93±0.16，与对照组(4.19±0.43)相比明显降低(图8，9)。股骨干远端部组织学变化在形态上OVS的对照组与中药组未见明显差异，均见海绵骨骨小梁明显减少。
图3 1日尿中排磷量(略)
图4 1日尿中羟脯氨酸量(略)
图5 1日尿中脱氧吡啶啉量(略)
, 百拇医药
图6 术后12周内股骨重量的变化(略)
表1 1%中药液含有饲料中钙、磷浓度钙浓度(略)
图7 OVS+中药用药大鼠术后12周内体重的变化(略)
图8 OVS+中药服用4周后1日尿中脱氧吡啶啉量 (略)
图9 OVS+中药服用12周后的1日尿中脱氧吡啶啉量(略)
3 讨论
尿中去氧吡啶啉作为骨吸收的重要指标被广为应用。两侧卵巢摘除术后，其值出现明显增加。给予女神散后，尿中去氧吡啶啉在4周后虽与对照组无明显差异，但12周后，明显低于对照组，差异有显著性。其他中药则差异无显著性。提示所探讨的九种方剂中，只有女神散对去卵巢大鼠的骨吸收亢进呈现抑制效果，且这种效果出现在服药4周以后。但是形态学上卵巢摘除术后12周时的股骨远端骨小梁的减少与对照组未见差异，推测这可能是由于卵巢摘除4周后已导致股骨远端骨小梁明显减少。提示去卵巢引起的海绵骨的形态学变化是非常迅速的，在女神散抑制骨吸收作用显效之前，已有骨形态学上的明显改变。
, 百拇医药
关于中药对去卵巢大鼠骨代谢的影响已有诸多报道，如杜仲 [3] 、温经汤 [4] 、八味地黄丸 [4，5] 、十全大补汤 [4] 等对骨量或骨强度的增加效果等等。本研究为寻求骨质疏松症的有效中药，对临床上常用于中老年女性的加味归脾汤、加味逍遥散、牛车肾气丸、桂枝茯苓丸、女神散、人参汤、猪苓汤、当归芍药散、补中益气汤等9种中药方剂进行了探讨，其结果提示，9种中药方中只有女神散给药12周后对去卵巢大鼠的骨吸收亢进具有明显抑制作用。女神散的成份是由香附子，川芎，白术，当归，黄芩，桂枝，人参，槟榔子，黄连，甘草，丁香，木香组成，具有理气，补血，通阳，补气，泻火的功能，常用于围绝经期综合征病人的植物神经紊乱等症状的治疗。本文结果提示女神散在卵巢切除、卵巢功能早衰或GnRHa应用患者的骨量维持及闭经后早期的骨质疏松的预防上可能有临床应用价值，并应及早开始用药。今后，将对女神散在用于绝经期骨质疏松症、早发卵巢功能不全等疾病的骨量维持上的临床应用价值进行进一步的探讨。
参考文献
, 百拇医药
1 野间昭夫.ハィドロキシブロリン.Med Tech，1987，6:11-28.
2 高桥正哲.尿中ビリヅノリソ，デォキシノリン.福永仁夫.他编骨代谢マカ.东京:メジカルレビコ社，1995，94.
3 Jiu LJ，Morikawa N，Omi N，et al.The effect of tochu bark on bone metabolism in the rat model with ovariectomized osteoporsis.J Natr Sci Vit，1994，40:261.
4 Hidaka S，Okamoto Y，Nakajima K，et al.Preventive effects of traditional chinese(Kampon)medicines on experimental osteoporsis induced by oˉvariectomy in rats.Calcif Tissue Int，1997，61:239.
5 金子均，小山嵩夫，麻生武志，等.Gn RH agonistにすろラツトの骨量减少に对する八味地黄丸の抑制效果.日更年医志，1995，3:225.
(编辑 小川), http://www.100md.com(石红)
关键词 卵巢去势 骨质疏松症 中药治疗
, http://www.100md.com
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)06-0816-03
An experimental study on the inhibitory
effect of Chinese herbs on osteoporosis of ovariectomy rats
Shi Hong，Zhang Yan，Ye Hong，et al.
The First Affiliated Hosiptal of Dalian Medical University，Dalian116011.
【Abstract】 Objective To investigate the therapeutic effect of several kinds of Chinese herbs on osteoˉporosis.Methods SD rats were randomly divided into ovariectomized group(OVS)and sham-operated group(Sham).Freely fed with CA-1or CA-1contained1%one kind of Chinese herbs liquid respectively and water，Weighted the weight of the rats after4and12weeks，measured the amounts of24hours urinary calcium(Ca)，phosˉphorus(P)，hydroxyproline(HOP)，and deoxypyridinoline(DPD).Weighted the femur and observed the histomorpholgiˉcal changes at the distal end of femurs.Results The rat weights of OVS all significantly increased than those of sham after4and12weeks(P<0.05)，24h urinary amouts of HOP in OVS significantly increased than those of sham at4weeks，24h urinary DPD in OVS significant increased than that of sham after4and12weeks.In morphological examiˉnation the trabecula of spongy bone at the distal end of the femurs were remarkably decreased after4and12weeks.Only in the rats given nushensan herbs，24h urinary DPD of OVS remarkably lowered than that of sham after12weeks.Conclusion Ovariectomy can lead to the obvious increase in bone resorption.The increase in bone resorption was remarkably inhibited after giving nushensan herbs for12weeks.The effect of nushensan herbs on prevention of bone resorption started after4weeks oftreatment.Morphological changes of OVS were occurred rapidly.It suggested that nushensan herbs may be of clinical value in maintenance bone mass of the patientswith ovariectomy，premature oˉvarian failure or using GnRHa and in prevention early osteoporosis of postmenopausal women.Nushensan herbs should be given as early as possible.
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Key words ovariectomy osteoporosis treating by Chinese herbs
骨质疏松是老年人的常见病之一，尤以绝经后妇女发病率最高。长期以来雌激素替代治疗被认为是最适合的治疗方法。但是雌激素长期应用会出现明显的毒副作用，尤其会使乳腺和子宫内膜癌发生的危险性增高，限制了雌激素的应用。因此寻找安全有效且可以长期应用的防治药物是十分必要的。此研究为探讨中药对骨质疏松症的疗效，对九种中药对卵巢去势大鼠的骨代谢的影响进行研究。
1 材料与方法
1.1 实验动物及用药 12周龄SD大鼠(大连医科大学动物实验室)普通饲养3周后，在腹腔内注射戊巴比妥40mg/kg麻醉下摘除两侧卵巢(OVS)为治疗组;仅开腹缝合(假手术)制成对照组(Sham)。普通固体饲料(CA-1)或分别含有1%各种中药液(加味归脾汤、加味逍遥散、牛车肾气丸、桂枝茯苓丸、女神散、人参养营汤、猪苓汤、当归芍药散、补中益气汤)的CA-1及水自由摄取条件下饲养。4周及12周后称重、代谢笼内单独收容，饲养24h，CA-1及水自由摄取条件下收集24h尿，3000rpm离心分离，上清液-30℃保存，测定24h尿中钙、磷、羟脯氨酸及去氧吡啶啉含量。麻醉、屠杀大鼠后摘除两侧股骨，右侧股骨以10%福尔马林固定后制成脱钙标本，进行HE染色。左侧股骨剔除软组织并干燥后测定重量。
, 百拇医药
1.2 分组 OVS和Sham组各8只大鼠以普通CA-1饲养，分别在饲养4周及12周时，各4只进行上述测定并屠杀，探讨卵巢摘除对骨形态和骨代谢的影响。30只OVS大鼠分成九种中药组及普通CA-1的对照组每组各3只，分别以含有1%的各种中药液的CA-1或普通CA-1饲养(自由摄取)，4周及12周后进行上述检查，12周后屠杀，探讨九种中药对去卵巢大鼠骨代谢的影响。
1.3 数据测定 中药液含有饲料中钙、磷浓度以ICP发光分光分析法进行测定，尿中钙浓度用o-CPC法，尿中磷浓度用酶学方法(DE-IP-S)进行测定并根据24h尿量计算出1日量。以比色法测定尿中羟脯氨酸 [1] 、以EIA法测定尿中去氧吡啶啉浓度 [2] ，计算1日量。
1.4 统计学处理 结果以均数±标准差表示，用t检验。
2 结果
2.1 卵巢摘除对骨形态和骨代谢的影响 术后4，12周后体重的变化(g):OVS组分别为361.0±4.4，391.3±10.1，与Sham组的309.8±10.7，336.3±15.9相比，均有显著增加(P<0.05)，(图1)。4，12周后的1日尿中钙、磷浓度在各两组间均无明显差异(图2，3)。1日尿中羟脯氨酸量(μM/日)在4周时OVS组为2.8±0.2，Sham组是1.4±0.2，OVS组明显增加(P<0.05)，但12周后两组间无明显差异(图4)。4，12周后的1日尿中去氧吡啶啉量(μM/日)OVS组分别为7.03±0.61，4.13±0.52，Sham组分别为2.01±0.46，1.73±0.43，均为OVS组明显增加(图5)。股骨重量4，12周后各两组间均未见明显差异(图6)。但组织学上4，12周后的OVS组均见股骨干远端部海绵骨骨小梁明显减少。
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图1 手术后12周内的体重的变化(略)
图2 1日尿中排钙量(略)
2.2 9种中药液对去卵巢大鼠骨代谢的影响效果 各种1%中药液含有饲料中的钙、磷浓度与对照组(普通CA-1) 均无差异(表1)。体重的变化在OVS的对照组与中药组之间无明显差异，与Sham组比较体重明显增高(图7)。4，12周后的1日尿中去氧吡啶啉量(μM/日)在OVS的对照组与中药组之间的比较，仅有女神散给药组在12周后为1.93±0.16，与对照组(4.19±0.43)相比明显降低(图8，9)。股骨干远端部组织学变化在形态上OVS的对照组与中药组未见明显差异，均见海绵骨骨小梁明显减少。
图3 1日尿中排磷量(略)
图4 1日尿中羟脯氨酸量(略)
图5 1日尿中脱氧吡啶啉量(略)
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图6 术后12周内股骨重量的变化(略)
表1 1%中药液含有饲料中钙、磷浓度钙浓度(略)
图7 OVS+中药用药大鼠术后12周内体重的变化(略)
图8 OVS+中药服用4周后1日尿中脱氧吡啶啉量 (略)
图9 OVS+中药服用12周后的1日尿中脱氧吡啶啉量(略)
3 讨论
尿中去氧吡啶啉作为骨吸收的重要指标被广为应用。两侧卵巢摘除术后，其值出现明显增加。给予女神散后，尿中去氧吡啶啉在4周后虽与对照组无明显差异，但12周后，明显低于对照组，差异有显著性。其他中药则差异无显著性。提示所探讨的九种方剂中，只有女神散对去卵巢大鼠的骨吸收亢进呈现抑制效果，且这种效果出现在服药4周以后。但是形态学上卵巢摘除术后12周时的股骨远端骨小梁的减少与对照组未见差异，推测这可能是由于卵巢摘除4周后已导致股骨远端骨小梁明显减少。提示去卵巢引起的海绵骨的形态学变化是非常迅速的，在女神散抑制骨吸收作用显效之前，已有骨形态学上的明显改变。
, 百拇医药
关于中药对去卵巢大鼠骨代谢的影响已有诸多报道，如杜仲 [3] 、温经汤 [4] 、八味地黄丸 [4，5] 、十全大补汤 [4] 等对骨量或骨强度的增加效果等等。本研究为寻求骨质疏松症的有效中药，对临床上常用于中老年女性的加味归脾汤、加味逍遥散、牛车肾气丸、桂枝茯苓丸、女神散、人参汤、猪苓汤、当归芍药散、补中益气汤等9种中药方剂进行了探讨，其结果提示，9种中药方中只有女神散给药12周后对去卵巢大鼠的骨吸收亢进具有明显抑制作用。女神散的成份是由香附子，川芎，白术，当归，黄芩，桂枝，人参，槟榔子，黄连，甘草，丁香，木香组成，具有理气，补血，通阳，补气，泻火的功能，常用于围绝经期综合征病人的植物神经紊乱等症状的治疗。本文结果提示女神散在卵巢切除、卵巢功能早衰或GnRHa应用患者的骨量维持及闭经后早期的骨质疏松的预防上可能有临床应用价值，并应及早开始用药。今后，将对女神散在用于绝经期骨质疏松症、早发卵巢功能不全等疾病的骨量维持上的临床应用价值进行进一步的探讨。
参考文献
, 百拇医药
1 野间昭夫.ハィドロキシブロリン.Med Tech，1987，6:11-28.
2 高桥正哲.尿中ビリヅノリソ，デォキシノリン.福永仁夫.他编骨代谢マカ.东京:メジカルレビコ社，1995，94.
3 Jiu LJ，Morikawa N，Omi N，et al.The effect of tochu bark on bone metabolism in the rat model with ovariectomized osteoporsis.J Natr Sci Vit，1994，40:261.
4 Hidaka S，Okamoto Y，Nakajima K，et al.Preventive effects of traditional chinese(Kampon)medicines on experimental osteoporsis induced by oˉvariectomy in rats.Calcif Tissue Int，1997，61:239.
5 金子均，小山嵩夫，麻生武志，等.Gn RH agonistにすろラツトの骨量减少に对する八味地黄丸の抑制效果.日更年医志，1995，3:225.
(编辑 小川), http://www.100md.com(石红)