复方中药有效成分对实验性大鼠局灶性脑缺血的保护作用
【摘要】 目的 探讨用中药水蛭、银杏、川芎的有效成分组成的复方制剂对动物局灶脑缺血的保护作用。方法 将水蛭素、银杏叶提取物、川芎嗪按2∶25∶5(mg/ml)的比例制成无菌注射液，应用大鼠大脑中动脉栓塞导致缺血性脑卒中的实验模型，并用生理盐水、尼莫地平和银杏提取物作为对照，观察不同药物对脑缺血面积和由缺血造成的大鼠行为障碍的影响，将实验数据用统计学处理并进行组间的差异性比较。结果 复方制剂中等剂量组、大剂量组和Nim组，神经症状评分与模型组相比差异均有显著性(3h、6h、P<0.01，24h、P<0.05);而切大剂量组在缺血3h和6h与银杏提取物组相比差异有显著性(P<0.05)。结论 用中药水蛭、银杏、川芎的有效成分组成的复方制剂对实验性大鼠局灶性缺血脑组织具有较好的保护作用。
关键词 水蛭 银杏叶 川芎 大鼠 脑梗死
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2004)06-0484-03
, 百拇医药
Protective effect of the active ingredierts from atraditional
Chinese medicine composite hirudo，folium ginkgo，rhizoma chuanxiong on the focal cerebral ischemia of experimental rat Zhang Yongshun，Liu Jianqing，Guo Guoji
Department of Neuromedicine of Guan Cheng Hospital of Dong-guan City，Guangdong523000.
【Abstract】 Objective To study the protective action of compound agent madeup with effective ingredients of Hirudo and Rhizoma chuanxiong and Folium Ginkgo in animal ischemic cerebral infarction.Methods To mix Hirudin extracts of Folium Ginkgo and Ligustrazine according2:25:5(mg/ml)into asepsis injection，rats local cereˉbral ischemia induced by embolism of middle cerebral artery(MCAO)was used as experimental model to study the efˉfects of the compound agent and positive control drug，Nimodipine and extracts of Folium Ginkgo on cerebral infarct size and neurological deficits.Disposing the experimental data with statisticsand comparing their otherness among difˉferent groups.Results It was marked different that the grade of neural symptom in middling dosage group，high dosage group and Nim group compared with model group(3h，6h，P<0.01，24h，P<0.05)，butit was marked differˉent that high dosage group compared with extracts of Folium Ginkgo group after cerebral infarct3hour and6hour(P<0.05).Conclusion This experiment indicates that compound agent composed of effective ingredients of Hrudo，Rhizoma chuanxiong and Folium Ginkgo might have beneficial protective action in ischemic cerebral infarction of exˉperimental rat.
, 百拇医药
Key words hirudo folium ginkgo rhizoma chuanxiong rat cerebral infarction
中药在治疗脑血管病(中风)方面具有一定的优势，长期以来有许多单味中药和复方制剂，被用于临床缺血性脑血管病的治疗，并取得一定的疗效。本文总结前人的经验，在众多单味中药中反复筛选出水蛭、银杏叶、川芎，应用他们的有效成分组成一个复方制剂，对其药效学进行了初步研究，现将结果报告如下。
1 实验材料
1.1 动物 Wistar大鼠，240±20g♂，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
1.2 药品与器械 水合氯醛，中国医药上海化学试剂公司;氯化-2，3，5-三苯基四氮唑(2，3，5-Triphenyltetraˉzolium Chloride，TTC)，E.Merck进口分装，上海化学试剂分装厂;用pH7.4磷酸钾缓冲溶液(PBS)配制成2%TTC溶 液，避光低温保存;尼莫地平，德国Bayer公司产品;4%中性甲醛。复方中药制剂，银杏叶提取物(配成200mg/ml无菌液)，手术剪，止血钳，动脉夹，直镊，弯头镊，缝合线，直径3mm的尼龙线等。
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2 实验方法
2.1 脑缺血模型的制备 参照Nagasawa法制作右侧大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，并加以改进，假手术组除了不插尼龙线阻塞血管外，其余步骤与手术组相同;药物组与Nim组均于MCAO后立即腹腔注射给药。
2.2 动物分组及给药方法 采用随机分组法将Wistar大鼠分为:假手术组、模型组、对照组(Nim组)、复方制剂组(低、中、高剂量)、银杏叶提取物组。低剂量组按1ml/kg，其含中水蛭:银杏:川芎为2:25:5(mg/ml);中等剂量组按2ml/kg;高剂量组按4ml/kg;Nim按0.08mg/kg给药;银杏叶提取物按100mg/kg给药;所有药物均在大脑中动脉被阻塞的同时，经颈外静脉注入大鼠体内。
2.3 神经症状缺陷评分方法 [1] 采用Longa5分制评分标准:无神经损伤症状0分;不能完全伸展对侧前爪1分;向左侧转圈2分;向对侧倾倒3分;不能自发行走，意识昏迷4分。实验数据经统计学处理。
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2.4 梗死面积大小的评估 [2] 动物缺血24h，经过神经功能缺损评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，置冰箱(-20℃)内10～15min后，做冠状切面，自前额向后枕均匀切成6片。将脑片置于2%TTC液中在37℃水浴中染色15～20min取出，正常脑组织染成鲜红色，缺血梗死区呈灰白色，境界较清晰。倒掉染色剂，将脑片置生理盐水中冲洗2～3次，以称重法测定梗死面积。留取标本，固定于4%中性甲醛溶液中1～5天供实物摄影。
2.5 统计学处理 实验数据以X±s表示，用F验进行组间差异比较，P<0.05为显著性标准。
3 实验结果
3.1 复方中药制剂对MCAO大鼠神经行为缺陷程度的影响 MCAO术后，Isch组大鼠表现出明显的神经运动功能障碍，提鼠尾悬空时，大鼠左前肢屈曲内收，左侧(非缺血侧)肢体肌张力下降，行走时向左侧旋转，呈追尾征表现。Isch组神经症状评分:3h为2.5±0.54分;6h2.88±0.35分，症 状加重，出现典型的追尾征表现;24h1.75±0.46分，症状有所缓解。复方制剂组、银杏叶提取物组与Nim组均能不同程度地改善MCAO大鼠的神经行为障碍:复方制剂低剂量L组3h、6h、24h的神经缺陷评分分别为2.25±0.46、2.5±0.53、1.5±0.53，与Isch组相同时间点的评分相比差异无显著性;中等剂量M组缺血6h时，与Isch组相比差异有显著性(P<0.05)，但缺血3h和24h的神经症状评分与Isch组差异无显著性;复方制剂大剂量H组和Nim组，在缺血3h、6h和24h的神经症状评分与Isch相比差异均有显著性(3h、6h、P<0.01，24h、P<0.05);而切大剂量组在缺血3h和6h与银杏提取物组相比差异有显著性(P<0.05)。结果见表1，图1。
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3.2 复方制剂对MCAO大鼠脑梗死体积的影响 MCAO后24h，Isch组大鼠出现明显的脑梗死。复方制剂与Nim组均能明显缩小脑梗死范围，与Isch组相比差异有显著性。其中高、中、低剂量组分别使脑梗死范围缩小50.7%、37.7%、14.55%，呈剂量依赖性;Nim组使脑梗死范围缩小45.46%，与低剂量组和中等剂量组差异有显著性(P<0.01)。但与高剂量组差异无显著性。银杏叶提取物组使脑梗死范围缩小29.6%，与高剂量组比差异有显著性(P<0.01)，结果见表2，图2。
Tab1 The effect of compound agent on neurologicaldeficit after middle cerebral artery occlusion(MCAO)in rats(X±s，n=8)Group Dosage Neurological evaluation(score)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01vs Isch Group; # P<0.05， ## P<0.01vs Egb Group
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Tab2 The effect of compound agent and extraction ofFolium Ginkgo on cerebral infarct size after middle cerebral artery occlusion(MCAO)in rats (X±s，n=8)Group Dosage Infarct size(%)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01vs Isch Group; # P<0.05， ## P<0.01vs Egb Group
4 讨论
水蛭素(Hirudin)是从中药水蛭体内提取的，具有抗 凝、溶栓活性的物质。现已知道水蛭素是一种单链环肽化合物，肽连由65个氨基酸残基组成，相对分子量为7000道尔顿 [3] ，是作用最强的凝血酶特异性抑制剂，它可与凝血酶以等摩尔比形成非共价键紧密结合的稳定化合物，从而使凝血酶失去裂解纤维蛋白原的能力，并阻止纤维蛋白的凝固、阻止凝血酶催化的凝血反应和凝血酶诱导的血小板聚集。由于水蛭素能有效地抑制游离的和血凝块上的凝血酶，因此可以防止各类血栓的形成和延伸，具有很强的抗凝、溶栓作用，而且其抗栓效果取决于其血药浓度 [4] 。中药川芎(Chuanxiong Rhizome)主要有效成分为川芎嗪(Ligustrazin，LIG)和阿魏酸(Ferulic acid.FA)。具有扩张血管，抑制血小板聚集、降低血小板活性和改善微循环等作用。研究发现川芎嗪能明显抑制TXA 2 的生成并成量效关系，并推测它可能是TXA 2 合成酶的抑制剂 [5] 。周氏等研究表明:川芎嗪能使紧张的血小板条松弛，又能抑制ADP、AA、TXA 2 受体激动剂SQ 226655 和A 23187 对血小板的兴奋作用，由于上述物质兴奋血小板的效应均与胞浆内游离Ca 2+ 的升高有关，因而认为川芎嗪抑制血小板功能与抑制钙的利用和释放有关 [6] 。廖氏等发现，川芎嗪在体内(25～50mg/kg)能显著抑制剪切力诱导的血小板聚集(SIPA)，亦认为其抗SIPA作用与抑制钙释放有关 [7] 。银杏叶提取物的主要活性成分为黄酮类和萜内脂类;其中银杏黄酮类具有扩张血管、增加脑血流量、抗氧化、抗自由基等对抗谷氨酸神经毒性保护脑细胞的作用。银杏内脂是天然、高效、专一的血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂，可抑制血小板的聚集 [8～10] ，因此具有抗凝、降低血粘度、改善微循环的作用。张玉珍等 [11] 应用大鼠大脑中动脉梗塞和血栓形成导致脑缺血实验模型的研究表明，预防性或治疗性iv大剂量EGb(200mg/kg)均能显著减少脑梗死面积，明显改善大鼠脑缺血造成的行为障碍;预防性iv小剂量EGb(100mg/kg)也能明显减少血栓形成性脑梗死面积，改善脑缺血造成的大鼠行为障碍，与阳性对照药尿激酶和尼莫地平作用相同。
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总之，从目前国内外资料来看，人们对水蛭、银杏、川芎等单味中药的有效成分及其药理作用都有较详细而清楚的认识，水蛭素(Hirudin)是目前发现的抗栓作用最强，出血等副作用最小的抗栓药物 [12] ;川芎嗪具有强烈的扩张血管，抗血小板聚集，改善微循环的作用;银杏黄酮具有清除自由基，抑制脂质过氧化，对抗谷氨酸神经毒性，保护脑细胞等作用。银杏内脂是天然、高效、专一的血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂，可抑制血小板的聚集[8～10] ，具有抗凝、降低血粘度、改善微循环的作用。但是如何应用这三味药物组成一个复方制剂，使之兼而具有溶栓、抗凝、扩张脑血管、改善脑循环，抗自由基、保护脑细胞等作用，目前国内外尚无类似的报道。基于此，本文设计并研究这一复方制剂，目的是为未来我国复方制剂的开发与应用提供理论依据和实验方法。
本研究结果表明，局灶性脑缺血后，动物出现神经功能障碍，模型组以6h最为明显，24h有所恢复并趋于稳定。其原因可能为6h左右，脑损伤达最大程度，之后侧枝循环的形成及部分代偿可使脑功能有所恢复;用药组以3h最明显，6～24h有所恢复并趋于稳定，复方制剂与Nim组均能明显缩小脑梗死范围，与对照组相比差异有显著性。其中 高、中、低剂量组分别使脑梗死范围缩小50.7%、37.7%、14.55%，呈剂量依赖性;Nim组使脑梗死范围缩小45.46%，与高剂量组差异无显著性。单用银杏叶提取物组，可使脑梗死范围缩小，但与复方制剂高剂量组比较差异有显著性(P<0.01)。之所以出现上述结果，其原因可能是:复方制剂通过早期溶栓、抗血小板聚集、抗凝、扩张脑血管，增加脑血流，拮抗Ca 2+ 内流及兴奋性氨基酸的毒性造成神经细胞损伤，从而保护缺血半暗区，防止梗死面积进一步扩大，亦能防止血管活性物质大量释放而引起的脑动脉痉挛，能改善早期症状，并阻止神经症状进一步加重，但不会引起出血并发症。研究结果提示复方中药制剂，可以挽救濒危的急性脑缺血神经元，同时也延缓了它们的死亡过程，因而能改善早期神经缺陷症状，缩小梗死体积，其疗效明显优于王晓明等 [13] 以及张玉珍等 [10] 单用银杏制剂对脑缺血大鼠模型的治疗效果。但是，由于多种原因，本复方制剂尚存在许多问题需要解决，如药品的质量鉴定、各种有效成分之间的协同性研究、稳定性实验以及对脑缺血组织的生化、离子、毒性物质甚至基因、细胞凋亡的调控的研究等。希望随着研究的进一步深入，本复方制剂将会更加完善。
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参考文献
1 Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery:Occlusion without craniectomy in rats.Stroke，1989，20:84.
2 Lundy EF，Solik BS，Frank RS，et al.Morphometric evaluation of brain infarcts in rats and gerbils.J Pharmacol Methods，1986，16:201.
3 Thurieau C，Simonet S，Paladino J，et al.NewN 2 -guanidinobenzoyl derivatives of hirudin54～65containing stabilized carboxyl or phosphoˉryl groups on the side chain of phenylalanine-63，J Med Chem，1994，37(50):625.
, http://www.100md.com
4 Harvey RP，Degryse E，Stefani L，et al.Cloning and expression of a cDNA coding for the anticoagulant hirudin from the blood-sucking leech，Hirudo medicinalis Pro.Natl.Acad.Sci.USA，1986，83:1084.
5 黄丰阳，等.中药有效成分的抗血小板作用研究进展.北京中医药大学学报，1999，22(2):28.
6 周序斌，L.Salganicoff，R.Sevy.川芎对人类血小板的药理作用.药学学报，1985，20(5):334.
7 廖福龙，李斌，彭健，等.川芎嗪抗剪切应力诱导的血小板聚集的实验研究.中国药理学报，1997，13(1):47.
, 百拇医药 8 Chen FY，Lee TJF.Role of nitric oxide in neurogenic vasodilation of porcine cerebral atrery.J Pharmacol Exper Ther，1993，265:339.
9 章剑今，王敏，余逸泼.银杏叶抗血栓及改善微循环作用的实验研究.中国中西医结合杂志，1995，16(5):320.
10 张玉珍，顾德官，茅守玉，等.银杏叶提取物(Egb)对大鼠局部脑缺血及颈动脉血栓形成的保护作用.药学学报，1998，33(12):901.
11 马怡，黑爱莲，金有豫，等.银杏叶注射液对实验性大鼠局灶性脑缺血的保护作用.首都医科大学学报，1999，20(1):21.
12 Markwardt F.Development of hirudin as an antithrombotic agent.Sem.Thromb.Haemos，1989，15:269.
13 王晓明，吴岩，李亚珍，等.水蛭注射液对大鼠血小板聚集和血栓形成的影响.中成药，1998，20(4):27.
作者单位:523000广东省东莞市莞城医院神经内科
华中科技大学同济医学院同济医院神经内科
(收稿日期:2004-04-21)
(编辑黄 杰), http://www.100md.com
关键词 水蛭 银杏叶 川芎 大鼠 脑梗死
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2004)06-0484-03
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Protective effect of the active ingredierts from atraditional
Chinese medicine composite hirudo，folium ginkgo，rhizoma chuanxiong on the focal cerebral ischemia of experimental rat Zhang Yongshun，Liu Jianqing，Guo Guoji
Department of Neuromedicine of Guan Cheng Hospital of Dong-guan City，Guangdong523000.
【Abstract】 Objective To study the protective action of compound agent madeup with effective ingredients of Hirudo and Rhizoma chuanxiong and Folium Ginkgo in animal ischemic cerebral infarction.Methods To mix Hirudin extracts of Folium Ginkgo and Ligustrazine according2:25:5(mg/ml)into asepsis injection，rats local cereˉbral ischemia induced by embolism of middle cerebral artery(MCAO)was used as experimental model to study the efˉfects of the compound agent and positive control drug，Nimodipine and extracts of Folium Ginkgo on cerebral infarct size and neurological deficits.Disposing the experimental data with statisticsand comparing their otherness among difˉferent groups.Results It was marked different that the grade of neural symptom in middling dosage group，high dosage group and Nim group compared with model group(3h，6h，P<0.01，24h，P<0.05)，butit was marked differˉent that high dosage group compared with extracts of Folium Ginkgo group after cerebral infarct3hour and6hour(P<0.05).Conclusion This experiment indicates that compound agent composed of effective ingredients of Hrudo，Rhizoma chuanxiong and Folium Ginkgo might have beneficial protective action in ischemic cerebral infarction of exˉperimental rat.
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Key words hirudo folium ginkgo rhizoma chuanxiong rat cerebral infarction
中药在治疗脑血管病(中风)方面具有一定的优势，长期以来有许多单味中药和复方制剂，被用于临床缺血性脑血管病的治疗，并取得一定的疗效。本文总结前人的经验，在众多单味中药中反复筛选出水蛭、银杏叶、川芎，应用他们的有效成分组成一个复方制剂，对其药效学进行了初步研究，现将结果报告如下。
1 实验材料
1.1 动物 Wistar大鼠，240±20g♂，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
1.2 药品与器械 水合氯醛，中国医药上海化学试剂公司;氯化-2，3，5-三苯基四氮唑(2，3，5-Triphenyltetraˉzolium Chloride，TTC)，E.Merck进口分装，上海化学试剂分装厂;用pH7.4磷酸钾缓冲溶液(PBS)配制成2%TTC溶 液，避光低温保存;尼莫地平，德国Bayer公司产品;4%中性甲醛。复方中药制剂，银杏叶提取物(配成200mg/ml无菌液)，手术剪，止血钳，动脉夹，直镊，弯头镊，缝合线，直径3mm的尼龙线等。
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2 实验方法
2.1 脑缺血模型的制备 参照Nagasawa法制作右侧大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，并加以改进，假手术组除了不插尼龙线阻塞血管外，其余步骤与手术组相同;药物组与Nim组均于MCAO后立即腹腔注射给药。
2.2 动物分组及给药方法 采用随机分组法将Wistar大鼠分为:假手术组、模型组、对照组(Nim组)、复方制剂组(低、中、高剂量)、银杏叶提取物组。低剂量组按1ml/kg，其含中水蛭:银杏:川芎为2:25:5(mg/ml);中等剂量组按2ml/kg;高剂量组按4ml/kg;Nim按0.08mg/kg给药;银杏叶提取物按100mg/kg给药;所有药物均在大脑中动脉被阻塞的同时，经颈外静脉注入大鼠体内。
2.3 神经症状缺陷评分方法 [1] 采用Longa5分制评分标准:无神经损伤症状0分;不能完全伸展对侧前爪1分;向左侧转圈2分;向对侧倾倒3分;不能自发行走，意识昏迷4分。实验数据经统计学处理。
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2.4 梗死面积大小的评估 [2] 动物缺血24h，经过神经功能缺损评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，置冰箱(-20℃)内10～15min后，做冠状切面，自前额向后枕均匀切成6片。将脑片置于2%TTC液中在37℃水浴中染色15～20min取出，正常脑组织染成鲜红色，缺血梗死区呈灰白色，境界较清晰。倒掉染色剂，将脑片置生理盐水中冲洗2～3次，以称重法测定梗死面积。留取标本，固定于4%中性甲醛溶液中1～5天供实物摄影。
2.5 统计学处理 实验数据以X±s表示，用F验进行组间差异比较，P<0.05为显著性标准。
3 实验结果
3.1 复方中药制剂对MCAO大鼠神经行为缺陷程度的影响 MCAO术后，Isch组大鼠表现出明显的神经运动功能障碍，提鼠尾悬空时，大鼠左前肢屈曲内收，左侧(非缺血侧)肢体肌张力下降，行走时向左侧旋转，呈追尾征表现。Isch组神经症状评分:3h为2.5±0.54分;6h2.88±0.35分，症 状加重，出现典型的追尾征表现;24h1.75±0.46分，症状有所缓解。复方制剂组、银杏叶提取物组与Nim组均能不同程度地改善MCAO大鼠的神经行为障碍:复方制剂低剂量L组3h、6h、24h的神经缺陷评分分别为2.25±0.46、2.5±0.53、1.5±0.53，与Isch组相同时间点的评分相比差异无显著性;中等剂量M组缺血6h时，与Isch组相比差异有显著性(P<0.05)，但缺血3h和24h的神经症状评分与Isch组差异无显著性;复方制剂大剂量H组和Nim组，在缺血3h、6h和24h的神经症状评分与Isch相比差异均有显著性(3h、6h、P<0.01，24h、P<0.05);而切大剂量组在缺血3h和6h与银杏提取物组相比差异有显著性(P<0.05)。结果见表1，图1。
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3.2 复方制剂对MCAO大鼠脑梗死体积的影响 MCAO后24h，Isch组大鼠出现明显的脑梗死。复方制剂与Nim组均能明显缩小脑梗死范围，与Isch组相比差异有显著性。其中高、中、低剂量组分别使脑梗死范围缩小50.7%、37.7%、14.55%，呈剂量依赖性;Nim组使脑梗死范围缩小45.46%，与低剂量组和中等剂量组差异有显著性(P<0.01)。但与高剂量组差异无显著性。银杏叶提取物组使脑梗死范围缩小29.6%，与高剂量组比差异有显著性(P<0.01)，结果见表2，图2。
Tab1 The effect of compound agent on neurologicaldeficit after middle cerebral artery occlusion(MCAO)in rats(X±s，n=8)Group Dosage Neurological evaluation(score)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01vs Isch Group; # P<0.05， ## P<0.01vs Egb Group
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Tab2 The effect of compound agent and extraction ofFolium Ginkgo on cerebral infarct size after middle cerebral artery occlusion(MCAO)in rats (X±s，n=8)Group Dosage Infarct size(%)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01vs Isch Group; # P<0.05， ## P<0.01vs Egb Group
4 讨论
水蛭素(Hirudin)是从中药水蛭体内提取的，具有抗 凝、溶栓活性的物质。现已知道水蛭素是一种单链环肽化合物，肽连由65个氨基酸残基组成，相对分子量为7000道尔顿 [3] ，是作用最强的凝血酶特异性抑制剂，它可与凝血酶以等摩尔比形成非共价键紧密结合的稳定化合物，从而使凝血酶失去裂解纤维蛋白原的能力，并阻止纤维蛋白的凝固、阻止凝血酶催化的凝血反应和凝血酶诱导的血小板聚集。由于水蛭素能有效地抑制游离的和血凝块上的凝血酶，因此可以防止各类血栓的形成和延伸，具有很强的抗凝、溶栓作用，而且其抗栓效果取决于其血药浓度 [4] 。中药川芎(Chuanxiong Rhizome)主要有效成分为川芎嗪(Ligustrazin，LIG)和阿魏酸(Ferulic acid.FA)。具有扩张血管，抑制血小板聚集、降低血小板活性和改善微循环等作用。研究发现川芎嗪能明显抑制TXA 2 的生成并成量效关系，并推测它可能是TXA 2 合成酶的抑制剂 [5] 。周氏等研究表明:川芎嗪能使紧张的血小板条松弛，又能抑制ADP、AA、TXA 2 受体激动剂SQ 226655 和A 23187 对血小板的兴奋作用，由于上述物质兴奋血小板的效应均与胞浆内游离Ca 2+ 的升高有关，因而认为川芎嗪抑制血小板功能与抑制钙的利用和释放有关 [6] 。廖氏等发现，川芎嗪在体内(25～50mg/kg)能显著抑制剪切力诱导的血小板聚集(SIPA)，亦认为其抗SIPA作用与抑制钙释放有关 [7] 。银杏叶提取物的主要活性成分为黄酮类和萜内脂类;其中银杏黄酮类具有扩张血管、增加脑血流量、抗氧化、抗自由基等对抗谷氨酸神经毒性保护脑细胞的作用。银杏内脂是天然、高效、专一的血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂，可抑制血小板的聚集 [8～10] ，因此具有抗凝、降低血粘度、改善微循环的作用。张玉珍等 [11] 应用大鼠大脑中动脉梗塞和血栓形成导致脑缺血实验模型的研究表明，预防性或治疗性iv大剂量EGb(200mg/kg)均能显著减少脑梗死面积，明显改善大鼠脑缺血造成的行为障碍;预防性iv小剂量EGb(100mg/kg)也能明显减少血栓形成性脑梗死面积，改善脑缺血造成的大鼠行为障碍，与阳性对照药尿激酶和尼莫地平作用相同。
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总之，从目前国内外资料来看，人们对水蛭、银杏、川芎等单味中药的有效成分及其药理作用都有较详细而清楚的认识，水蛭素(Hirudin)是目前发现的抗栓作用最强，出血等副作用最小的抗栓药物 [12] ;川芎嗪具有强烈的扩张血管，抗血小板聚集，改善微循环的作用;银杏黄酮具有清除自由基，抑制脂质过氧化，对抗谷氨酸神经毒性，保护脑细胞等作用。银杏内脂是天然、高效、专一的血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂，可抑制血小板的聚集[8～10] ，具有抗凝、降低血粘度、改善微循环的作用。但是如何应用这三味药物组成一个复方制剂，使之兼而具有溶栓、抗凝、扩张脑血管、改善脑循环，抗自由基、保护脑细胞等作用，目前国内外尚无类似的报道。基于此，本文设计并研究这一复方制剂，目的是为未来我国复方制剂的开发与应用提供理论依据和实验方法。
本研究结果表明，局灶性脑缺血后，动物出现神经功能障碍，模型组以6h最为明显，24h有所恢复并趋于稳定。其原因可能为6h左右，脑损伤达最大程度，之后侧枝循环的形成及部分代偿可使脑功能有所恢复;用药组以3h最明显，6～24h有所恢复并趋于稳定，复方制剂与Nim组均能明显缩小脑梗死范围，与对照组相比差异有显著性。其中 高、中、低剂量组分别使脑梗死范围缩小50.7%、37.7%、14.55%，呈剂量依赖性;Nim组使脑梗死范围缩小45.46%，与高剂量组差异无显著性。单用银杏叶提取物组，可使脑梗死范围缩小，但与复方制剂高剂量组比较差异有显著性(P<0.01)。之所以出现上述结果，其原因可能是:复方制剂通过早期溶栓、抗血小板聚集、抗凝、扩张脑血管，增加脑血流，拮抗Ca 2+ 内流及兴奋性氨基酸的毒性造成神经细胞损伤，从而保护缺血半暗区，防止梗死面积进一步扩大，亦能防止血管活性物质大量释放而引起的脑动脉痉挛，能改善早期症状，并阻止神经症状进一步加重，但不会引起出血并发症。研究结果提示复方中药制剂，可以挽救濒危的急性脑缺血神经元，同时也延缓了它们的死亡过程，因而能改善早期神经缺陷症状，缩小梗死体积，其疗效明显优于王晓明等 [13] 以及张玉珍等 [10] 单用银杏制剂对脑缺血大鼠模型的治疗效果。但是，由于多种原因，本复方制剂尚存在许多问题需要解决，如药品的质量鉴定、各种有效成分之间的协同性研究、稳定性实验以及对脑缺血组织的生化、离子、毒性物质甚至基因、细胞凋亡的调控的研究等。希望随着研究的进一步深入，本复方制剂将会更加完善。
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参考文献
1 Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery:Occlusion without craniectomy in rats.Stroke，1989，20:84.
2 Lundy EF，Solik BS，Frank RS，et al.Morphometric evaluation of brain infarcts in rats and gerbils.J Pharmacol Methods，1986，16:201.
3 Thurieau C，Simonet S，Paladino J，et al.NewN 2 -guanidinobenzoyl derivatives of hirudin54～65containing stabilized carboxyl or phosphoˉryl groups on the side chain of phenylalanine-63，J Med Chem，1994，37(50):625.
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4 Harvey RP，Degryse E，Stefani L，et al.Cloning and expression of a cDNA coding for the anticoagulant hirudin from the blood-sucking leech，Hirudo medicinalis Pro.Natl.Acad.Sci.USA，1986，83:1084.
5 黄丰阳，等.中药有效成分的抗血小板作用研究进展.北京中医药大学学报，1999，22(2):28.
6 周序斌，L.Salganicoff，R.Sevy.川芎对人类血小板的药理作用.药学学报，1985，20(5):334.
7 廖福龙，李斌，彭健，等.川芎嗪抗剪切应力诱导的血小板聚集的实验研究.中国药理学报，1997，13(1):47.
, 百拇医药 8 Chen FY，Lee TJF.Role of nitric oxide in neurogenic vasodilation of porcine cerebral atrery.J Pharmacol Exper Ther，1993，265:339.
9 章剑今，王敏，余逸泼.银杏叶抗血栓及改善微循环作用的实验研究.中国中西医结合杂志，1995，16(5):320.
10 张玉珍，顾德官，茅守玉，等.银杏叶提取物(Egb)对大鼠局部脑缺血及颈动脉血栓形成的保护作用.药学学报，1998，33(12):901.
11 马怡，黑爱莲，金有豫，等.银杏叶注射液对实验性大鼠局灶性脑缺血的保护作用.首都医科大学学报，1999，20(1):21.
12 Markwardt F.Development of hirudin as an antithrombotic agent.Sem.Thromb.Haemos，1989，15:269.
13 王晓明，吴岩，李亚珍，等.水蛭注射液对大鼠血小板聚集和血栓形成的影响.中成药，1998，20(4):27.
作者单位:523000广东省东莞市莞城医院神经内科
华中科技大学同济医学院同济医院神经内科
(收稿日期:2004-04-21)
(编辑黄 杰), http://www.100md.com