崔大祥 闫小君 苏成芝 2004-8-2 16:34:54 国外医学遗传学分册1999年第22卷第5期

    提要 分离并克隆差异表达基因是目前功能性基因研究的热点。mRNA差异展示是筛选差异表达基因最有效的技术之一，它的主要不足是有一定假阳性。RDA、SSH、DSD、LSH技术能够克服假阳性，但也具有一定的不足，应根据需要选择运用。随着能扩增长片段及具有自动校正功能的Taq酶出现及应用，这些技术将会不断完善与发展，具有广阔的应用前景。

    关键词 差异表达基因；克隆

    现代分子生物学研究表明，人类基因组约由10万左右的不同基因组成，这些基因选择性的表达决定了机体整个生命过程，基因表达的变化处于控制生物学调节机制的中心位置。因此，分离并克隆差异表达基因不仅有助于阐明生命的粤秘，而且还能为基因诊断与治疗提供重要的理论依据。近几年来，差异表达基因克隆技术不断完善与发展，已成为研究肿瘤和疾病等相关基因的重要手段。

    一、mRNA差异展示

    mRNA差异展示(mRNA differential display,DDRT-PCR)是目前筛选差异表达基因最有效的方法之一，其基本原理是：3´端采用锚定引物，与mRNA3´poly a结合，进行反转录，形成mRNA：cDNA杂交分子，5´端采用20条随机引物，与锚定引物一起进行PCR扩增，其产物经测序胶显示出来，再回收鉴定克隆差异条带。1992年Liang和Pardee[1]建立此技术时，5´端采用20条随机引物 ......