张树民 陈英碚 2004-8-2 16:33:37 国外医学遗传学分册1999年第22卷第5期

    摘要 酵母双杂交系统是研究蛋白质相互作用的一种有效方法。本文简要介绍了双杂交体系的原理、应用和自身存在的问题，并对其最新发展做了重点阐述。

    关键词 酵母双杂交系统，蛋白质一蛋白质间相互作用

    自从Fields和Song[1]首先描述了酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)，这一研究蛋白质间相互作用的新技术已经得到了广泛的应用。它的可行性、有效性在验证已知蛋白质之间的相互作用或筛选与靶蛋白特异作用的候选蛋白的研究中已被证实并被推广到了诸如细胞周期调控、信号传导、肿瘤基因表达等多个研究领域，受到越来越多的重视。随着日益广泛的应用，人们也不断地对这一技术进行了完善和发展。

    一、酵母双杂交体系的原理及应用

    真核细胞基因转录激活因子的转录激活作用是由功能相对独立的DNA结合结构域(binding domain,BD)和转录活化结构域(activation domain,AD)共同完成的[2]，这两个结构域通过共价或厞共介连接建立的空间联系是导致结合和激活发生的关键[3，4]。根据这一特点，如果使可能存在相互作用的两种蛋白X和Y分别以和BD/AD形成杂合蛋白的形式的酵母中表达分布于细胞核中，X与Y之间的相互作用就可以将BD和AD在空间结构上重新联结为一个整体而与报告基因的上游激活序列(upstream activation sequence)结合，进而发挥激活转录的功能，使受调控的报告基因得到表达。根据这一原理，双杂交系统通过简便的酵母遗传分析对报告基因表型进行检测即可实现对于蛋白质间相互作用的研究。

    迄今为止，应用于筛选基因的双杂交体系已发展出很多版本。以较早发展起来的Y190为例，它采用了GAL1-HIS3，GAL1-LacZ双重报告基因，其中启动子GAL1由包含转录因子Ga14的BD特异识别位点的上游激活序列UAS和基础启动子(minimai promoter)组成。营养筛选适于作为初筛处理大理筛查对象；颜色筛选则是对杂合蛋白复合体转录激活功能的再验证，易于排除部分假阳性。在酵母Y190中 ......