刘宇欣 郑杰 吴秉铨 2004-8-2 17:03:09 中华病理学杂志1999年第28卷第6期

    mRNA差异显示技术(mRNA differential display)是一种快速而有效的克隆差异性表达基因的方法。1992年Liang 和Pardee[1]首次应用差异显示技术对比人类乳腺癌细胞与正常乳腺上皮细胞所表达的mRNA，以此来克隆癌细胞所特有的基因。差异显示技术为寻找新基因开辟了捷径，是该领域的重大突破,已应用于各个领域，如农业、植物、动物、医学；就医学而言，涉及了胚胎发育器官形成、遗传性疾病、药物作用原理、基因治疗和免疫反应等研究领域，特别是在人类与肿瘤的战斗中有着极为广泛的用途。

    差异显示的理论基础是基因的选择性表达。哺乳动物基因组约含100000个不同的基因，对于某一细胞而言，仅一小部分(约15%)表达。在正常细胞的生长分化过程中，基因的选择性表达决定着生命的进程；在病理过程中，作为疾病的原因或结果，也存在着表达的基因异常。因此克隆这些差异表达的基因是当前生物医学领域的研究热点，该领域的不断深入将为从分子水平了解疾病的发生和发展规律奠定基础，并为临床合理的治疗提供依据。

    差异显示的关键在于选择具有高度可比性，表型特性差异显著的对比对象。可比性即严格控制遗传背景，摒除无关差异，仅使所关注的表型(如肿瘤细胞的转移潜能)具有显著差异。差异显示从表型差异入手，通过展示mRNA的差异深入到基因差异，克隆与表型差异高度相关的新基因。

    就技术而言，差异显示巧妙地结合了两个基本的分子生物技术：逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及电泳。经过不断的改良，差异显示已成为标准化的cDNA克隆方法，有多个公司的试剂盒及设备使研究者可在短时间内启动差异显示，几天内获得结果。较其他克隆新基因的方法而言，差异显示具有简便易行的优势，因此在基础和临床研究中有着推广和普及的可能性。

    一、技术路线

    差异显示技术实质是RT-PCR,其独特之处在于2种PCR引物的设计:锚定引物T12MN,含12个T可以结合于mRNA3'端poly(A)，M为AGC 3种碱基之一，N为AGCT之一，如T12CA可结合于在poly(A)上游为GT的mRNA；随机引物可以在与poly(A)末端不同距离的多个位置上结合，因此差异显示的产物是不同长度的cDNA片段混合物。通过随机引物和锚定引物的多种组合,差异显示有展示约10 000至15 000种mRNA的潜力，在DNA测序胶上对比细胞或组织中所表达的mRNA，从而寻找在不同细胞，不同发育和分化阶段 ......