活血化瘀方剂对CCl4诱导大鼠肝纤维化模型中肝星形 细胞活化的影响
作者：江涛 郭顺根 蒙一纯
单位：北京中医药大学组织学胚胎学教研室，北京100029
关键词：肝星状细胞；增殖细胞核抗原；α-平滑肌肌动蛋白；中药
解剖学报00zk30
【摘要】目的 探讨活血化瘀方剂抗肝纤维化的作用机理。 方法 用活血化瘀水煎剂灌胃治疗CCl4所致肝纤维化模型大鼠，免疫组织化学法 检测增殖细胞核抗原、α-平滑肌肌动蛋白的表达，观察活血化瘀方对肝星形细胞活化的影 响。结果 与自然恢复组相比，活血化瘀方剂可抑制肝星形细胞α-平滑 肌肌动蛋白的表达(P<0.01)，而对增殖细胞核抗原的表达无明显作用。 结论 活血化瘀方能够抑制肝星形细胞向肌成纤维细胞的转化过程，对细 胞因子介导的细胞增殖影响较小。
【中图分类号】 R575.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)增-115
, http://www.100md.com
EFFECTS OF MOTIVATING BLOOD CIRCULATION AND REMOVING BLOOD STASIS DECOCTION ON HEPATIC STELLATE CELLS ACTIVATION IN HEPATIC FIBROSIS RAT INDUCED BY CARBON TETRACHLORIDE
JIANG Tao,GUO Shun-gen*，MENG Yi-chun
(Department of Histology and Embrology,Beijing University of Traditiona l Chinese Medcine,Beijing 100029,China)
【Abstract】Objective To investigate the mechanisns of motiva ting blood circulation and removing blood stasis decoction for anti-hepatic fib r osis.Methods The hepatic fibrosis rats were fed with motivating b lood circulation and removing blood stasis decoction,PCNA and α-SMA expression of liver tissue were observed by means of immunohistochemical technique Results Motivating blood circulation and removing blood stasis d ecoction inhibited α-SMA expression of HSC compared with the self-restore gro unp (P<0.01)and had no effect on PCNA.Conclusions Motivating blood circulation and removing blood stasis decoction inhibited the transformation of HSC to MFB and had no effect on cells; proliferatoin media ted by cytokines.
, http://www.100md.com
【Key words】Hepatic stellate cells;Proliferating cell nuclear antigen;α-smooth muscle actin;Chinese herbs 已有研究表明，肝纤维化的中心环节是肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC)在炎症坏死区域向肌成纤维细胞(myofibroblasts,MFB)转型的激活过程[1]。它的活化特征包括：(1)增殖活跃；(2)细胞表型由静止的HSC转变为MFB，表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA);(3)多种细胞外基质(extracellular matix,ECM)基因表达和ECM分泌；(4)获得收缩性，对内皮素-1，血管加压素及血管紧张素Ⅱ产生收缩性应答[2]。我们从HSC增殖和α-SMA表达两方面探讨中药活血化瘀复方对大鼠HSC活化的影响。
材料和方法
, http://www.100md.com 1.动物分组与模型的复制
Wistar雄性大鼠32只，体重180～220g，购自中国医学科学院动物中心。随机分为正常组、模型组、治疗组和自然恢复组，每组8只。参照并改进Hernandez-Munoz法建立肝纤维化动物模型[3]，用橄榄油将CCl4液体稀释6倍后腹腔注射，0.2ml/只，每周3次，共7周。
2.活血化瘀方剂制备和给药方法
选取生黄芪、丹参、枳壳、赤芍、川芎、红花6味中药，制成水剪剂并浓缩至每毫升含3g生药。治疗组动物在造模5周后，按1ml/100g体重每天1次灌胃治疗，治疗7周；自然恢复组灌服自来水作为对照。
3.免疫组织化学
取各组动物肝右叶新鲜组织，Bouin液固定，石蜡包埋，常规切片。免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、α-SMA。PCNA染色：切片常规脱蜡至水，微波抗原热修复，1%H2O2封闭10min,PBS洗3次，每次5min，10%羊血清孵育30min,Mouse Anti-PCNA为美国Santa Cruz公司产品，稀释浓度1∶100，滴加一抗后4℃孵育过夜，PBS洗3次，每次5min，生物素化山羊抗鼠IgM(a Mo IgM-Bio)37℃孵育45min，PBS洗3次，每次5min，辣根酶标记链亲合素(streptavidin/HRP)30min,DAB显色，以小牛血清代替一抗作阴性对照，采用美国NT-8502图像分析系统对阳性细胞在参照系中所占相对面积进行分析。α-SMA染色：切片常规脱蜡至水，1%H2O2封闭10min，PBS洗3次，每次5min,10%羊血清孵育30min，Mouse Anti-α-SMA为DAKO公司产品，稀释浓度为1∶25，滴加一抗后4℃孵育过夜，以下步骤同上。
, http://www.100md.com
结 果
1.PCNA免疫组织化学染色
正常大鼠肝组织PCNA免疫组织化学染色基本呈阴性，仅有个别肝细胞核为阳性；模型组除可见较多大而圆的肝细胞核呈阳性外，在纤维隔中或隔旁可见大量较小的梭形细胞核，即处于增殖状态的肝星形细胞核，两种细胞核位置、形状不同，较易鉴别(图1，2)；治疗组阳性肝细胞核、肝星形细胞核明显减少(图3)；自然恢复组与治疗组阳性细胞数无明显差异。显著性检验表明，模型组与其他各组比较P<0.01，有显著性差异；治疗组与自然恢复组相比P>0.05，无显著性差异，见表1。
表1免疫组织化学PCNA阳性细胞核在参照系中所占相对面积x±s
Table 1 The relative surface of positive cell nuclear for PCNA in the measurement frame
±s
, 百拇医药
正常组
control group
模型组
model group
治疗组
treatment group
自然恢复组
self-restore group
肝细胞
HC
0.0704±0.0467
0.4651±0.2613*
, http://www.100md.com
0.0812±0.0201
0.0808±0.0199
肝星形细胞
HSC
0.0054±0.0031
0.1957±0.0792*
0.0072±0.0023
0.0075±0.0037
* 与对照组、治疗组及自然恢复组比较，P<0.01 * Compared with control,treatment and self-restore group,P<0.01
, http://www.100md.com
2.α-SMA免疫组织化学染色
正常大鼠肝组织，α-SMA免疫组织化学染色基本呈阴性，仅有少数门管区小动脉壁平滑肌细胞为阳性；模型组阳性细胞多，主要分布于纤维隔中或隔旁(图4)，在肝细胞间也有少量分布，为活化的肝星形细胞；治疗组活化肝星形细胞明显减少，只偶见于纤维隔中(图5)；自然恢复组活化肝星形细胞分布与治疗组基本相似，但细胞数多于治疗组(图6)。显著性检验表明，模型组与其他各组比较P<0.01，有显著性差异；治疗组与自然恢复组相比P<0.01，有显著性差异，见表2。
表2免疫组织化学α-SMA阳性细胞在参照系中所占相对面积x±s
Table 2 The relative surface of positive cell for α-SMA in the measurement frame±s 对照组
, 百拇医药
control group
模型组
model group
治疗组
treatment group
自然恢复组
self-restore group
0.0001±0.0001
0.0315±0.0013*
0.0037±0.0019#
0.0055±0.0031
, 百拇医药
* 与对照组、治疗组及自然恢复组比较，P<0.01；#与自然恢复组比较，P<0.01
* Compared with control,treatment and self-restore group,P<0.01；#Compared with self-restore group,P<0.01
讨 论
如前所述，肝纤维化的中心环节是HSC在组织炎症坏死区域向MFB转型的激活过程，HSC数量增加并表达α-SMA则是HSC活化的重要标志。业已明确，损伤的肝实质细胞可释放胰岛素样生长因子(insulin-likg growth factor,IGF)等增殖刺激因子促进HSC增殖，转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)则是促使HSC向MFB转化并产生细胞外基质的关键因子，MFB一旦形成，既使肝实质细胞损伤停止或炎症消退，MFB仍能通过旁分泌和自分泌作用使纤维化过程延续，其中血小板衍生生长因子(platel-derived growth factor,PDGF)和TGF-β是MFB最重要的增殖刺激因子[2]。
, 百拇医药
PCNA是DNA多聚酶δ的辅助蛋白，它协助DNA前导链和后随链的合成，PCNA在静止期细胞中含量很少，于G1晚期开始增加，S期达高峰，G2期和M期又明显下降，它的出现与细胞增殖有关，是反映细胞增殖的重要生物学指标[4]。本实验表明PCNA阳性细胞核在正常大鼠很少表达；模型组阳性细胞明显增多。这一方面是由于CCl4造成肝损伤，肝细胞发生代偿性增生，因而见到大量阳性肝细胞核；另一方面，肝实质细胞损伤使HSC增殖并活化，ECM合成明显增加，形成假小叶，在纤维间隔中或隔旁可见到较多阳性MFB细胞核；治疗组阳性肝细胞核和阳性MFB细胞核明显减少，自然恢复组与治疗组阳性细胞数无明显差异，提示在肝纤维化恢复期机体能够自我调节HC和HSC的数量，活血化瘀方剂对细胞因子介导的细胞增殖干预较少。
α-SMA为7nm的微丝，它是细胞骨架的组成成分，主要存在于平滑肌细胞中，大鼠HSC活化过程中丧失结蛋白(desmin)，转而表达α-SMA,因此α-SMA可作为HSC激活的标志[5]。α-SMA在CCl4诱导的肝纤维化模型中的表达增多，治疗组阳性细胞明显少于自然恢复组，表明活血化瘀方剂能够抑制HSC向MFB的转化过程，此结果与活血化瘀方剂抑制TGF-β1的自分泌和旁分泌的实验依据相吻合[6,7]。新近的研究表明细胞凋亡是机体调节活化HSC数量的重要途径，治疗组α-SMA阳性细胞明显少于自然恢复组，可能提示活血化瘀方剂能够促进活化HSC的凋亡。是否如此，尚需要进一步的实验证实。
, http://www.100md.com
我们教研室长期从事中药抗肝纤维化研究，证明活血化瘀方剂能够通过减少ECM的合成，改善微循环从而起到治疗肝纤维化的作用[8]，本实验结果进一步说明，活血化瘀方能够抑制HSC向MFB的转型过程而对细胞因子介导的细胞增殖作用干预较少，其抗纤维化的机制可能在于抑制TGF-β1的自分泌和旁分泌及促进活化HSC凋亡。
, http://www.100md.com
图1 模型组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示PCNA阳性肝细胞核。×400
图2 模型组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示PCNA阳性肝星形细胞核。×400
图3 治疗组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示PCNA阳性肝细胞核及阳性肝星形细胞核明显减少。×400
图4 模型组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示α-SMA阳性肝星形细胞。×400
图5 治疗组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示α-SMA阳性肝星形细胞明显减少。×400
图6 自然恢复组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示α-SMA阳性肝星形细胞。×400
Fig.1 In rat liver paraffin section of the model group.Immunohistochemical demonstration of PCNA positive cell nuclears of hepatocyte.×400
, 百拇医药
Fig.2 In rat liver paraffin section of the model group.Immunohistochemical demonstration of PCNA positive cell nuclears of hepatic stellate cell.×400
Fig.3 In rat liver paraffin section of the treatment group.PCNA positive immunoreaction decreased clearly in the cell nuclears of hepatocyte and hepatic stellate cell. ×400
Fig.4 In rat liver paraffin section of the model group.Immunohistochemical demonstration of α-SMA positive hepatic stellate cells.
, 百拇医药
×400
Fig.5 In rat liver paraffin section of the treatment group.α-SMA positive immunoreaction decreased clearly in hepatic stellate cells.×400
Fig.6 In rat liver paraffin section of the self-restore group.Immunohistochemical demonstration of α-SMA positive hepatic stellate cells.×400
【作者简介】江涛(1972—)，男(汉族)，安徽省人，在 读硕士研究生，助教
参考文献
, http://www.100md.com [1]Hautekeete ML.Geerts A.The hepatic stellate(Ito)cell:its role in hum an liver disease[J].Virchows Arch B Cell Pathol,1997,430(2):195-207.
[2]Gressner AM.The cell biology of live fibrogensis-animbalance of pr oliferation,growth arrest and apoptosis of myofiblasts[J].Cell Tissue Res,1998 ,292(3):447-452.
[3]程明亮，刘三都.肝纤维化的基础研究及临床[M].北京：人民卫生出版社199 6：292～293.
[4]Celis JE,Celis A.Cell cycle-dependent variations in the distributio n of the nuclear protein cyclin proliferating cell nuclear ant igen in cultured cells;subdivision of S phase[J].Proc Natl Acad Sci USA,1985,8 2(10):3262-3266
, 百拇医药
[5]Remadori G,Veigt T,Schwoger S.Expression of the gene of alpha smooth muscle-actin isoform in rat liver and in rat fat-storing cells[J].Virchows Arch B Cell Pathol,1990,59(6):349-357.
[6]贾继东，王宝恩，董忠，等.中药861合剂对免疫损伤性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ 、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF-mRNA的影响[J].中华肝脏病杂志，1996，4(4)：214～216.
[7]蒙一纯，丁霞，贲长恩，等.肝纤维化启动期血清对肝星形细胞TGF-β1表 达的影响[J].解剖学报，2000，31(3)：265～268.
[8]于世瀛，贲长恩，王德福.活血化瘀方药抗大鼠肝纤维化的形态学和血清定量 研究[J].中西医结合杂志，1996，6(2):21～23.
【收稿日期】2000-06-25 【修回日期】2000-09-0 1, 百拇医药
单位：北京中医药大学组织学胚胎学教研室，北京100029
关键词：肝星状细胞；增殖细胞核抗原；α-平滑肌肌动蛋白；中药
解剖学报00zk30
【摘要】目的 探讨活血化瘀方剂抗肝纤维化的作用机理。 方法 用活血化瘀水煎剂灌胃治疗CCl4所致肝纤维化模型大鼠，免疫组织化学法 检测增殖细胞核抗原、α-平滑肌肌动蛋白的表达，观察活血化瘀方对肝星形细胞活化的影 响。结果 与自然恢复组相比，活血化瘀方剂可抑制肝星形细胞α-平滑 肌肌动蛋白的表达(P<0.01)，而对增殖细胞核抗原的表达无明显作用。 结论 活血化瘀方能够抑制肝星形细胞向肌成纤维细胞的转化过程，对细 胞因子介导的细胞增殖影响较小。
【中图分类号】 R575.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)增-115
, http://www.100md.com
EFFECTS OF MOTIVATING BLOOD CIRCULATION AND REMOVING BLOOD STASIS DECOCTION ON HEPATIC STELLATE CELLS ACTIVATION IN HEPATIC FIBROSIS RAT INDUCED BY CARBON TETRACHLORIDE
JIANG Tao,GUO Shun-gen*，MENG Yi-chun
(Department of Histology and Embrology,Beijing University of Traditiona l Chinese Medcine,Beijing 100029,China)
【Abstract】Objective To investigate the mechanisns of motiva ting blood circulation and removing blood stasis decoction for anti-hepatic fib r osis.Methods The hepatic fibrosis rats were fed with motivating b lood circulation and removing blood stasis decoction,PCNA and α-SMA expression of liver tissue were observed by means of immunohistochemical technique Results Motivating blood circulation and removing blood stasis d ecoction inhibited α-SMA expression of HSC compared with the self-restore gro unp (P<0.01)and had no effect on PCNA.Conclusions Motivating blood circulation and removing blood stasis decoction inhibited the transformation of HSC to MFB and had no effect on cells; proliferatoin media ted by cytokines.
, http://www.100md.com
【Key words】Hepatic stellate cells;Proliferating cell nuclear antigen;α-smooth muscle actin;Chinese herbs 已有研究表明，肝纤维化的中心环节是肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC)在炎症坏死区域向肌成纤维细胞(myofibroblasts,MFB)转型的激活过程[1]。它的活化特征包括：(1)增殖活跃；(2)细胞表型由静止的HSC转变为MFB，表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA);(3)多种细胞外基质(extracellular matix,ECM)基因表达和ECM分泌；(4)获得收缩性，对内皮素-1，血管加压素及血管紧张素Ⅱ产生收缩性应答[2]。我们从HSC增殖和α-SMA表达两方面探讨中药活血化瘀复方对大鼠HSC活化的影响。
材料和方法
, http://www.100md.com 1.动物分组与模型的复制
Wistar雄性大鼠32只，体重180～220g，购自中国医学科学院动物中心。随机分为正常组、模型组、治疗组和自然恢复组，每组8只。参照并改进Hernandez-Munoz法建立肝纤维化动物模型[3]，用橄榄油将CCl4液体稀释6倍后腹腔注射，0.2ml/只，每周3次，共7周。
2.活血化瘀方剂制备和给药方法
选取生黄芪、丹参、枳壳、赤芍、川芎、红花6味中药，制成水剪剂并浓缩至每毫升含3g生药。治疗组动物在造模5周后，按1ml/100g体重每天1次灌胃治疗，治疗7周；自然恢复组灌服自来水作为对照。
3.免疫组织化学
取各组动物肝右叶新鲜组织，Bouin液固定，石蜡包埋，常规切片。免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、α-SMA。PCNA染色：切片常规脱蜡至水，微波抗原热修复，1%H2O2封闭10min,PBS洗3次，每次5min，10%羊血清孵育30min,Mouse Anti-PCNA为美国Santa Cruz公司产品，稀释浓度1∶100，滴加一抗后4℃孵育过夜，PBS洗3次，每次5min，生物素化山羊抗鼠IgM(a Mo IgM-Bio)37℃孵育45min，PBS洗3次，每次5min，辣根酶标记链亲合素(streptavidin/HRP)30min,DAB显色，以小牛血清代替一抗作阴性对照，采用美国NT-8502图像分析系统对阳性细胞在参照系中所占相对面积进行分析。α-SMA染色：切片常规脱蜡至水，1%H2O2封闭10min，PBS洗3次，每次5min,10%羊血清孵育30min，Mouse Anti-α-SMA为DAKO公司产品，稀释浓度为1∶25，滴加一抗后4℃孵育过夜，以下步骤同上。
, http://www.100md.com
结 果
1.PCNA免疫组织化学染色
正常大鼠肝组织PCNA免疫组织化学染色基本呈阴性，仅有个别肝细胞核为阳性；模型组除可见较多大而圆的肝细胞核呈阳性外，在纤维隔中或隔旁可见大量较小的梭形细胞核，即处于增殖状态的肝星形细胞核，两种细胞核位置、形状不同，较易鉴别(图1，2)；治疗组阳性肝细胞核、肝星形细胞核明显减少(图3)；自然恢复组与治疗组阳性细胞数无明显差异。显著性检验表明，模型组与其他各组比较P<0.01，有显著性差异；治疗组与自然恢复组相比P>0.05，无显著性差异，见表1。
表1免疫组织化学PCNA阳性细胞核在参照系中所占相对面积x±s
Table 1 The relative surface of positive cell nuclear for PCNA in the measurement frame
±s, 百拇医药
正常组
control group
模型组
model group
治疗组
treatment group
自然恢复组
self-restore group
肝细胞
HC
0.0704±0.0467
0.4651±0.2613*
, http://www.100md.com
0.0812±0.0201
0.0808±0.0199
肝星形细胞
HSC
0.0054±0.0031
0.1957±0.0792*
0.0072±0.0023
0.0075±0.0037
* 与对照组、治疗组及自然恢复组比较，P<0.01 * Compared with control,treatment and self-restore group,P<0.01
, http://www.100md.com
2.α-SMA免疫组织化学染色
正常大鼠肝组织，α-SMA免疫组织化学染色基本呈阴性，仅有少数门管区小动脉壁平滑肌细胞为阳性；模型组阳性细胞多，主要分布于纤维隔中或隔旁(图4)，在肝细胞间也有少量分布，为活化的肝星形细胞；治疗组活化肝星形细胞明显减少，只偶见于纤维隔中(图5)；自然恢复组活化肝星形细胞分布与治疗组基本相似，但细胞数多于治疗组(图6)。显著性检验表明，模型组与其他各组比较P<0.01，有显著性差异；治疗组与自然恢复组相比P<0.01，有显著性差异，见表2。
表2免疫组织化学α-SMA阳性细胞在参照系中所占相对面积x±s
Table 2 The relative surface of positive cell for α-SMA in the measurement frame
±s 对照组, 百拇医药
control group
模型组
model group
治疗组
treatment group
自然恢复组
self-restore group
0.0001±0.0001
0.0315±0.0013*
0.0037±0.0019#
0.0055±0.0031
, 百拇医药
* 与对照组、治疗组及自然恢复组比较，P<0.01；#与自然恢复组比较，P<0.01
* Compared with control,treatment and self-restore group,P<0.01；#Compared with self-restore group,P<0.01
讨 论
如前所述，肝纤维化的中心环节是HSC在组织炎症坏死区域向MFB转型的激活过程，HSC数量增加并表达α-SMA则是HSC活化的重要标志。业已明确，损伤的肝实质细胞可释放胰岛素样生长因子(insulin-likg growth factor,IGF)等增殖刺激因子促进HSC增殖，转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)则是促使HSC向MFB转化并产生细胞外基质的关键因子，MFB一旦形成，既使肝实质细胞损伤停止或炎症消退，MFB仍能通过旁分泌和自分泌作用使纤维化过程延续，其中血小板衍生生长因子(platel-derived growth factor,PDGF)和TGF-β是MFB最重要的增殖刺激因子[2]。
, 百拇医药
PCNA是DNA多聚酶δ的辅助蛋白，它协助DNA前导链和后随链的合成，PCNA在静止期细胞中含量很少，于G1晚期开始增加，S期达高峰，G2期和M期又明显下降，它的出现与细胞增殖有关，是反映细胞增殖的重要生物学指标[4]。本实验表明PCNA阳性细胞核在正常大鼠很少表达；模型组阳性细胞明显增多。这一方面是由于CCl4造成肝损伤，肝细胞发生代偿性增生，因而见到大量阳性肝细胞核；另一方面，肝实质细胞损伤使HSC增殖并活化，ECM合成明显增加，形成假小叶，在纤维间隔中或隔旁可见到较多阳性MFB细胞核；治疗组阳性肝细胞核和阳性MFB细胞核明显减少，自然恢复组与治疗组阳性细胞数无明显差异，提示在肝纤维化恢复期机体能够自我调节HC和HSC的数量，活血化瘀方剂对细胞因子介导的细胞增殖干预较少。
α-SMA为7nm的微丝，它是细胞骨架的组成成分，主要存在于平滑肌细胞中，大鼠HSC活化过程中丧失结蛋白(desmin)，转而表达α-SMA,因此α-SMA可作为HSC激活的标志[5]。α-SMA在CCl4诱导的肝纤维化模型中的表达增多，治疗组阳性细胞明显少于自然恢复组，表明活血化瘀方剂能够抑制HSC向MFB的转化过程，此结果与活血化瘀方剂抑制TGF-β1的自分泌和旁分泌的实验依据相吻合[6,7]。新近的研究表明细胞凋亡是机体调节活化HSC数量的重要途径，治疗组α-SMA阳性细胞明显少于自然恢复组，可能提示活血化瘀方剂能够促进活化HSC的凋亡。是否如此，尚需要进一步的实验证实。
, http://www.100md.com
我们教研室长期从事中药抗肝纤维化研究，证明活血化瘀方剂能够通过减少ECM的合成，改善微循环从而起到治疗肝纤维化的作用[8]，本实验结果进一步说明，活血化瘀方能够抑制HSC向MFB的转型过程而对细胞因子介导的细胞增殖作用干预较少，其抗纤维化的机制可能在于抑制TGF-β1的自分泌和旁分泌及促进活化HSC凋亡。
, http://www.100md.com
图1 模型组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示PCNA阳性肝细胞核。×400
图2 模型组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示PCNA阳性肝星形细胞核。×400
图3 治疗组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示PCNA阳性肝细胞核及阳性肝星形细胞核明显减少。×400
图4 模型组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示α-SMA阳性肝星形细胞。×400
图5 治疗组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示α-SMA阳性肝星形细胞明显减少。×400
图6 自然恢复组大鼠肝组织石蜡切片，免疫组织化学法显示α-SMA阳性肝星形细胞。×400
Fig.1 In rat liver paraffin section of the model group.Immunohistochemical demonstration of PCNA positive cell nuclears of hepatocyte.×400
, 百拇医药
Fig.2 In rat liver paraffin section of the model group.Immunohistochemical demonstration of PCNA positive cell nuclears of hepatic stellate cell.×400
Fig.3 In rat liver paraffin section of the treatment group.PCNA positive immunoreaction decreased clearly in the cell nuclears of hepatocyte and hepatic stellate cell. ×400
Fig.4 In rat liver paraffin section of the model group.Immunohistochemical demonstration of α-SMA positive hepatic stellate cells.
, 百拇医药
×400
Fig.5 In rat liver paraffin section of the treatment group.α-SMA positive immunoreaction decreased clearly in hepatic stellate cells.×400
Fig.6 In rat liver paraffin section of the self-restore group.Immunohistochemical demonstration of α-SMA positive hepatic stellate cells.×400
【作者简介】江涛(1972—)，男(汉族)，安徽省人，在 读硕士研究生，助教
参考文献
, http://www.100md.com [1]Hautekeete ML.Geerts A.The hepatic stellate(Ito)cell:its role in hum an liver disease[J].Virchows Arch B Cell Pathol,1997,430(2):195-207.
[2]Gressner AM.The cell biology of live fibrogensis-animbalance of pr oliferation,growth arrest and apoptosis of myofiblasts[J].Cell Tissue Res,1998 ,292(3):447-452.
[3]程明亮，刘三都.肝纤维化的基础研究及临床[M].北京：人民卫生出版社199 6：292～293.
[4]Celis JE,Celis A.Cell cycle-dependent variations in the distributio n of the nuclear protein cyclin proliferating cell nuclear ant igen in cultured cells;subdivision of S phase[J].Proc Natl Acad Sci USA,1985,8 2(10):3262-3266
, 百拇医药
[5]Remadori G,Veigt T,Schwoger S.Expression of the gene of alpha smooth muscle-actin isoform in rat liver and in rat fat-storing cells[J].Virchows Arch B Cell Pathol,1990,59(6):349-357.
[6]贾继东，王宝恩，董忠，等.中药861合剂对免疫损伤性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ 、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF-mRNA的影响[J].中华肝脏病杂志，1996，4(4)：214～216.
[7]蒙一纯，丁霞，贲长恩，等.肝纤维化启动期血清对肝星形细胞TGF-β1表 达的影响[J].解剖学报，2000，31(3)：265～268.
[8]于世瀛，贲长恩，王德福.活血化瘀方药抗大鼠肝纤维化的形态学和血清定量 研究[J].中西医结合杂志，1996，6(2):21～23.
【收稿日期】2000-06-25 【修回日期】2000-09-0 1, 百拇医药