宫颈鳞癌中P53与PCNA的表达状态和相关性
作者：鲍春 谭贲 黄利鸣 石新兰 黎家华
单位：鲍春(湖北三峡学院医学院临床医学系95级02班)；谭贲(临床医学系97级01班3)；黄利鸣 石新兰 黎家华(病理解剖学教研室)
关键词：宫颈肿瘤；P53；PCNA；免疫组织化学
实用医学进修杂志00zj01
摘 要 目的：探讨抑癌基因产物P53和细胞核增殖抗原(PCNA)在宫颈鳞癌和慢性宫颈炎的存在状态，及其在宫颈鳞癌发生中所起的作用，并为该病的检测提供一种分子生物学方法。方法：应用免疫组织化学SP法对46例宫颈鳞癌及31例慢性宫颈炎组织进行 P53、PCNA检测。结果：46例宫颈鳞癌中P53、PCNA阳性率分别为54.3%、82.6%，31例慢性宫颈炎中P53、PCNA阳性率分别为29.0%、45.0%，P53、PCNA在同等级宫颈鳞癌阳性表达有相关性(r=0.55、P<0.05), PCNA染色强度与宫颈鳞癌组织分级之间有显著差异(P<0.05)。结论：P53与PCNA在宫颈鳞癌的发生发展中起重要作用，并且两者之间存在相关性，对于探讨宫颈鳞癌分子病理学机制及检测宫颈鳞癌具有重要意义。
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Expression of protein and PCNA in cervix carcinoma
Bao Chun Tan Ben Huang Liming,et al
speciality of clinical medicine,Hubei Three gorges
University,medical college,YiChang 443003
Abstract Objective:To investigate the expression of P53 protein and PCNA in cervix carcinoma.Method:Immunohistochemistry SP method was used to examine P53、PCNA expression in 46 cases of chronic cervicitis.Result:The presence of P53 was detected in 24 of 46 carcinoma cases and in 9 of 31 cheonic cervicitis .The presence of PCNAwas detected in 38 of 46 caercinoma cases and ivn 14 of 31 chronic cervicitis.The difference between PCNA content and histopathological atypia in cervix carcinoma.Conclusion:The data are suggested to contribute to better under standing of the genesis of cervix carcinoma ,and indicate that the relationship between the expression of P53 protein .PCNA and cervix carcinoma was significant.
, 百拇医药
Key Words cervix neoplasms;P53;PCNA;immunohistochemistry
在宫颈鳞癌的发生发展过程中，许多癌基因及其表达的癌蛋白起着重要作用，其分化、凋亡也随着肿瘤的发展而变化。抑癌基因P53的表达一直是研究的热点，它具有保持基因组稳定的重要作用。细胞核增殖抗原(PCNA)是细胞增殖重要的标志。本实验旨在研究P53、PCNA在宫颈鳞癌中的表达状态，从而分析其在宫颈鳞癌发病中的作用机理及两者相关性。
1 材料和方法
1.1 标本来源
77例宫颈癌组织及慢性宫颈炎组织均取自本院附属医院病理科和妇产科1997～2000年活检及手术标本蜡块，其中浸润性鳞癌I级3例，II级9例，III级34例，慢性宫颈炎31例，每例标本制成5μm切片，分别进行P53,PCNA免疫组化染色.
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1.2 免疫组化染色
①试剂:SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司，P53单抗和PCNA单抗及Sp kit均为美国ZYMED公司产品；②方法:采用微波炉抗原修复技术和SP法；③结果判定:P53和PCNA阳性反映是指棕黄色产物定位于肿瘤细胞核，染色强度按照颜色深浅可分为：浅黄色为弱阳性(+)，棕黄色为中阳性(++)，棕褐色为强阳性(+++)。无染色为阴性 (-)。
1.3 统计学方法
采用卡方检验和相关分析。
2 结果
2.1 P53阳性表达
46例宫颈癌中P53表达的阳性率为54.3%(24/46).在31例正常组织中P53阳性率为29.0%，在鳞癌I级、II级、III级中阳性率分别为33.3%,55.6%,52.9%。经卡方检验，P53阳性率与宫颈鳞癌组织学分级之间有显著相关性(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2 PCNA阳性表达
46例宫颈鳞癌中PCNA阳性率为82.6%(38/46)随宫颈癌恶性程度加深，染色强度相应发生改变。正常组织中以阴性表达者居多而在鳞癌III级中，以强阳性(+++)表达居多。经卡方检验。PCNA染色强度与宫颈鳞癌组织学分级之间有显著性差异(P<0.05)。
2.3 PCNA和P53之间的关系
经相关分析显示，P53和PCNA在同等级宫颈鳞癌阳性表达中存在正相关性(r=0.55、 P<0.05)。
附表 P53、PCNA表达状态与宫颈鳞癌组织学分级的关系
例数
P53
阳性率(%)
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PCNA
阳性率(%)
阳性
阴性
()
()
(+)
(-)
慢性宫颈炎
宫颈鳞癌Ⅰ级
宫颈鳞癌Ⅱ级
宫颈鳞癌Ⅲ级
31
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3
19
34
9
1
5
18
22
2
4
16
29.0
33.3
55.6
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52.9
5
3
2
11
4
0
1
9
4
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2
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18
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0
4
4
45.0
100
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88.2
3 讨论
P53癌基因是目前人们公认的与人类肿瘤关系最为密切的抑癌基因，共有野生型(wtP53)和突变型(mtP53)[1]。wtP53能对负载的DNA损伤应答系统进行调控起转录因子作用，启动ras的表达，其编码的P21蛋白能抑制细胞周期蛋白依赖性激酶的活性，从而使细胞停滞于G1期，便于DNA修复，如果修复失败，则启动细胞程序性死亡，防止癌肿的发生。而mtP53不仅失去了wtP53的功能，而且还能直接转化细胞，并能与wtP53结合成寡聚复合物，从而阻止wtP53的抑制肿瘤发生的作用。在本组的样本中，在I级宫颈鳞癌中P53阳性率33.3%,II级为55.6%,III级为53%,II,III级中阳性率明显高于I期。P53的检出率随肿瘤恶性度增加而增加。在肿瘤细胞中一旦检测到P53存在就意味着肿瘤可能已到中晚期。临床上可以根据对P53蛋白的检测对肿瘤的发生及其恶性程度作出评价与判断。
, 百拇医药
细胞核增殖抗原(PCNA)是一种酸性蛋白[2]，是DNA多聚酶的辅助因子，在细胞的分裂增殖中必不可少，PCNA在G1期出现，S期达高峰，G2期下降，而在G0期无PCNA表达。PCNA可以作为组织细胞增殖水平的指针之一。在本组的慢性宫颈炎标本中，强阳性(+++)为5例，中阳性(++)为4例，弱阳性(+)为4例，阴性(-)为18例。说明宫颈上皮细胞多处于G0期，上皮细胞增殖正常，而在宫颈鳞癌中，PCNA阳性率明显高于慢性宫机颈炎，而且染色强度也以强阳性(+++)居多，说明癌细胞多处于S期，增殖迅速，II级与III级宫颈癌组中的PCNA明显高于正常组织。
wtP53在正常细胞基因组监控中可以诱导产生P21蛋白和GAPD45蛋白[3]，这两者能与PCNA结合，使PCNA失活和降解。当wtP53结果发生变化时，该功能消失，所以P53与PCNA之间存在相关性。我们实验中的结果也说明了这一点(P<0.05)。
本实验表明宫颈癌的发生发展与P53、PCNA异常表达密切相关。有关宫颈癌分子病理学机理有待继续深入研究。
参考文献
1，王慧.宫颈癌中c-erbB-2、c-myc、P53 基因变化及临床意义[J].国外医学妇产科分册，1996；23(5)：277
2，薛月珍，朱关珍.子宫上皮内瘤及子宫颈鳞癌中增殖细胞核抗原和C-myc基因的过度表达及其临床意义[J].现代妇产科进展,1997；6(3):204
3，Hartwell LH,Kastan MB. Cell cycle control and cancer[J]. Science,1994;266(16):1821, http://www.100md.com
单位：鲍春(湖北三峡学院医学院临床医学系95级02班)；谭贲(临床医学系97级01班3)；黄利鸣 石新兰 黎家华(病理解剖学教研室)
关键词：宫颈肿瘤；P53；PCNA；免疫组织化学
实用医学进修杂志00zj01
摘 要 目的：探讨抑癌基因产物P53和细胞核增殖抗原(PCNA)在宫颈鳞癌和慢性宫颈炎的存在状态，及其在宫颈鳞癌发生中所起的作用，并为该病的检测提供一种分子生物学方法。方法：应用免疫组织化学SP法对46例宫颈鳞癌及31例慢性宫颈炎组织进行 P53、PCNA检测。结果：46例宫颈鳞癌中P53、PCNA阳性率分别为54.3%、82.6%，31例慢性宫颈炎中P53、PCNA阳性率分别为29.0%、45.0%，P53、PCNA在同等级宫颈鳞癌阳性表达有相关性(r=0.55、P<0.05), PCNA染色强度与宫颈鳞癌组织分级之间有显著差异(P<0.05)。结论：P53与PCNA在宫颈鳞癌的发生发展中起重要作用，并且两者之间存在相关性，对于探讨宫颈鳞癌分子病理学机制及检测宫颈鳞癌具有重要意义。
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Expression of protein and PCNA in cervix carcinoma
Bao Chun Tan Ben Huang Liming,et al
speciality of clinical medicine,Hubei Three gorges
University,medical college,YiChang 443003
Abstract Objective:To investigate the expression of P53 protein and PCNA in cervix carcinoma.Method:Immunohistochemistry SP method was used to examine P53、PCNA expression in 46 cases of chronic cervicitis.Result:The presence of P53 was detected in 24 of 46 carcinoma cases and in 9 of 31 cheonic cervicitis .The presence of PCNAwas detected in 38 of 46 caercinoma cases and ivn 14 of 31 chronic cervicitis.The difference between PCNA content and histopathological atypia in cervix carcinoma.Conclusion:The data are suggested to contribute to better under standing of the genesis of cervix carcinoma ,and indicate that the relationship between the expression of P53 protein .PCNA and cervix carcinoma was significant.
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Key Words cervix neoplasms;P53;PCNA;immunohistochemistry
在宫颈鳞癌的发生发展过程中，许多癌基因及其表达的癌蛋白起着重要作用，其分化、凋亡也随着肿瘤的发展而变化。抑癌基因P53的表达一直是研究的热点，它具有保持基因组稳定的重要作用。细胞核增殖抗原(PCNA)是细胞增殖重要的标志。本实验旨在研究P53、PCNA在宫颈鳞癌中的表达状态，从而分析其在宫颈鳞癌发病中的作用机理及两者相关性。
1 材料和方法
1.1 标本来源
77例宫颈癌组织及慢性宫颈炎组织均取自本院附属医院病理科和妇产科1997～2000年活检及手术标本蜡块，其中浸润性鳞癌I级3例，II级9例，III级34例，慢性宫颈炎31例，每例标本制成5μm切片，分别进行P53,PCNA免疫组化染色.
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1.2 免疫组化染色
①试剂:SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司，P53单抗和PCNA单抗及Sp kit均为美国ZYMED公司产品；②方法:采用微波炉抗原修复技术和SP法；③结果判定:P53和PCNA阳性反映是指棕黄色产物定位于肿瘤细胞核，染色强度按照颜色深浅可分为：浅黄色为弱阳性(+)，棕黄色为中阳性(++)，棕褐色为强阳性(+++)。无染色为阴性 (-)。
1.3 统计学方法
采用卡方检验和相关分析。
2 结果
2.1 P53阳性表达
46例宫颈癌中P53表达的阳性率为54.3%(24/46).在31例正常组织中P53阳性率为29.0%，在鳞癌I级、II级、III级中阳性率分别为33.3%,55.6%,52.9%。经卡方检验，P53阳性率与宫颈鳞癌组织学分级之间有显著相关性(P<0.05)。
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2.2 PCNA阳性表达
46例宫颈鳞癌中PCNA阳性率为82.6%(38/46)随宫颈癌恶性程度加深，染色强度相应发生改变。正常组织中以阴性表达者居多而在鳞癌III级中，以强阳性(+++)表达居多。经卡方检验。PCNA染色强度与宫颈鳞癌组织学分级之间有显著性差异(P<0.05)。
2.3 PCNA和P53之间的关系
经相关分析显示，P53和PCNA在同等级宫颈鳞癌阳性表达中存在正相关性(r=0.55、 P<0.05)。
附表 P53、PCNA表达状态与宫颈鳞癌组织学分级的关系
例数
P53
阳性率(%)
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PCNA
阳性率(%)
阳性
阴性
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慢性宫颈炎
宫颈鳞癌Ⅰ级
宫颈鳞癌Ⅱ级
宫颈鳞癌Ⅲ级
31
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3 讨论
P53癌基因是目前人们公认的与人类肿瘤关系最为密切的抑癌基因，共有野生型(wtP53)和突变型(mtP53)[1]。wtP53能对负载的DNA损伤应答系统进行调控起转录因子作用，启动ras的表达，其编码的P21蛋白能抑制细胞周期蛋白依赖性激酶的活性，从而使细胞停滞于G1期，便于DNA修复，如果修复失败，则启动细胞程序性死亡，防止癌肿的发生。而mtP53不仅失去了wtP53的功能，而且还能直接转化细胞，并能与wtP53结合成寡聚复合物，从而阻止wtP53的抑制肿瘤发生的作用。在本组的样本中，在I级宫颈鳞癌中P53阳性率33.3%,II级为55.6%,III级为53%,II,III级中阳性率明显高于I期。P53的检出率随肿瘤恶性度增加而增加。在肿瘤细胞中一旦检测到P53存在就意味着肿瘤可能已到中晚期。临床上可以根据对P53蛋白的检测对肿瘤的发生及其恶性程度作出评价与判断。
, 百拇医药
细胞核增殖抗原(PCNA)是一种酸性蛋白[2]，是DNA多聚酶的辅助因子，在细胞的分裂增殖中必不可少，PCNA在G1期出现，S期达高峰，G2期下降，而在G0期无PCNA表达。PCNA可以作为组织细胞增殖水平的指针之一。在本组的慢性宫颈炎标本中，强阳性(+++)为5例，中阳性(++)为4例，弱阳性(+)为4例，阴性(-)为18例。说明宫颈上皮细胞多处于G0期，上皮细胞增殖正常，而在宫颈鳞癌中，PCNA阳性率明显高于慢性宫机颈炎，而且染色强度也以强阳性(+++)居多，说明癌细胞多处于S期，增殖迅速，II级与III级宫颈癌组中的PCNA明显高于正常组织。
wtP53在正常细胞基因组监控中可以诱导产生P21蛋白和GAPD45蛋白[3]，这两者能与PCNA结合，使PCNA失活和降解。当wtP53结果发生变化时，该功能消失，所以P53与PCNA之间存在相关性。我们实验中的结果也说明了这一点(P<0.05)。
本实验表明宫颈癌的发生发展与P53、PCNA异常表达密切相关。有关宫颈癌分子病理学机理有待继续深入研究。
参考文献
1，王慧.宫颈癌中c-erbB-2、c-myc、P53 基因变化及临床意义[J].国外医学妇产科分册，1996；23(5)：277
2，薛月珍，朱关珍.子宫上皮内瘤及子宫颈鳞癌中增殖细胞核抗原和C-myc基因的过度表达及其临床意义[J].现代妇产科进展,1997；6(3):204
3，Hartwell LH,Kastan MB. Cell cycle control and cancer[J]. Science,1994;266(16):1821, http://www.100md.com