肝细胞癌血清、肝组织中HCV和HBV感染状况的研究
作者：郭荣平 李国辉 李锦清 周元平 彭晓谋
单位：郭荣平 李国辉 李锦清 中山医科大学肿瘤医院肝胆科(广州,510060)；周元平 彭晓谋 中山医科大学附属第三医院传染科(广州，510630)
关键词：肝细胞癌；丙型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；聚合酶链反应
癌症99zk07
【摘要】目的：通过研究肝细胞肝癌患者血清和肝组织中乙型、丙型肝炎病毒感染状况，探讨丙型肝炎病毒与肝细胞癌发生的关系。方法：采用ELISA法检测126例肝细胞癌患者血清中的抗-HCV、乙肝两对半，采用套式PCR检测血清中HCVRNA、HBVDNA以及组织标本中的HCVRNA、HBVDNA。结果：126例HCC患者血清中抗-HCV阳性率为11.1%，HCVRNA阳性率为17.5%，抗-HCV和HCVRNA同时联合检测HCV的阳性率为21.4%，血清HBsAg阳性率为82.5%，HBVDNA的阳性率为75.4%，HBsAg和HBVDNA联合检测同时HBV阳性率为92.9%，HBV、HCV重叠感染率为17.5%，肝癌和癌旁组织HCVRNA和HBVDNA的阳性率分别为7.9%、12.7%和38.1%、74.6%。结论：利用PCR技术直接检测HCVRNA和ELISA法检测抗-HCV更能全面了解和准确评价HCV在HCC患者中的感染情况，肝癌患者的癌旁组织和癌组织中都检测到HCVRNA,提示HCV在肝组织中的存在及复制，支持HCV与HBV一起参与HCC的发生。
, 百拇医药
中图号：R735.7文献标识码：A文章编号：1000-467X(1999)s0-0020-04
The HCV and HBV infection in the patients with hepatocellular
carcinoma ─ A study on sera and hepatic tissue
GUO Rong-ping，LI Guo-hei，LI Jin-qing ,et al.
Department of Liver Cancer Tumor Hospital Sun Yat- sen University of Medical
Science,Guangzhou 510060,P.R.China
, 百拇医药
【Abstract】 Objective： To detemine the infection of HBV and HCV and evaluate the relationship between HCV infection and the development of HCC. Method： Analysis on 126 patients with HCC was done. The technique of ELISA was used to detect the anti-HCV and HBsAg of the sera . And the technique of PCR was used to detect the HBV DNA and HCV RNA of the sera and hepatic tissue. Results： The positive rate of anti-HCV in the patients with HCC in this area was 11.1% (14/126) .The positive rate of HCV RNA was 17.5% (22/126). If HCV infection was defined as anti- HCV and or HCV RNA positive, the infective rate of HCV was 21.4% in this study. The positive rate of HBsAg and HBV DNA were 82.5% (104/126) and 75.4% (95/126). The infective rate of HBV by combining detection of HBV RNA and HBsAg was 92.9% (117/126). The overlapping HCV and HBV infective rate was 17.5% (22/126). We detected the HCV RNA and HBV DNA in hepatic tissue, the positive rate of HCV RNA in cancerous and pericancerous tissue were 7.9% (/126) and 12.7% (16/126) respectively, and the HBV RNA positive rate were 38.1% (48/126) and 74.6% (94/126). Conclusions： HCV infection in the patients with HCC was determined more accurate by combining detection of HCV RNA and anti- HCV. This results suggested the presence and replication of HCV and HBV inside the hepatic tissue, and indicated both HCV and HBV might be the important factors in the development of HCC.
, 百拇医药
Key words： Hepatocelluar carcinoma; Hepatitis virus C; Hepatitis virus B; Nested PCR
丙型肝炎病毒(HCV)是近年来发现的又一种重要的肝病致病因素，文献报道，HCV感染50%以上为慢性过程，其中约20%最终发展为肝硬化，与肝细胞癌(HCC)的发生关系密切〔1〕。我国是原发性肝癌(PLC)的高发区，同时又是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高度流行区，HCV、HBV的感染情况各地报告不一，对我院1992～1996年手术切除的肝细胞癌126例进行研究，现报导如下：
1.材料与方法
1.1材料来源
1992年7月～1996年12月，共收集我院治疗原发性肝癌的血清和新鲜肝癌和肝组织配对标本126例做为本组研究材料，全部为手术切除肝癌病人，经病理证实为肝细胞肝癌，其中男性117例(92.9%)，女性9例(7.1%)，男女之比为13∶1，年龄最小23岁，最大69岁，中位年龄47岁。
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1.2实验方法
抗-HCV的测定，用美国Abbott抗-HCVEIA检测试剂盒(2ndGeneration)按厂家操作和计算Cutoff值，以OD值≥Cutoff值为证实阳性，余为阴性。乙肝二对半的测定用中山医科大学传染病教研室生产的EIA试剂盒(卫生部核准产品)按说明操作进行。
测定HCV RNA按套式PCR试剂盒，在HCVRNA基因组的高度保守区5端设计引物，引物的核苷酸序列为：
外引物SP17～265’-ACTCCACCATAGATCA-CTCC
外引物SP2328～309R5’-TCATGGTGCACG-GTCTACGA(外引物扩增片段长322bp)
内引物SP351～705’-GCAGAAAGCGTC-TAGCCATG
, 百拇医药
内引物SP4248～229R5’-AACACTACTCG-GCTAGCAGT(内引物扩增片段长198bp)
检测HBVDNA按套式PCR HBV DNA试剂盒检测方法进行，在HBVDNAC区及附近设计引物，引物的核甘酸序列为：
外引物C1，5’-CTGGGAGGAGTTGGGGGAGGAGATT
外引物C2R，5’-GGCGAGGGAGTTCTTCTTCTAGGGG(外引物扩增片段长约665bp)
内引物C3，5’-ACTGTTCAAACCTCCAAGCT
内引物C4，5’-AGGAGTGCCAATCCACACTC(内引物扩增片段长429bp)
结果判别见图1、图2。
, 百拇医药
图1HCVSp内引物系统扩增产物
1：阴性对照2：阳性对照3，4：阴性结果
5，6：阳性结果MpBR322/Hinf1(分子量标志)
图2HCV外引物扩增产物的电泳结果
1：阴性对照2：阳性对照3，5：阴性结果
4，6：阳性结果MpBR322/Hinf1(分子量标志)
肝癌和癌旁组织中HCV RNA和HBVDNA的检测，手术切除后，标本用灭菌生理盐水洗去血迹，切为小块，装入液氮管尽快存入液氮中贮存，按文献方法〔2，3〕提取组织中DNA和RNA，组织提取液HCV RNA、HBV DNA的测定方法同血浆进行。
, 百拇医药 统计学处理方法：数据的整理计算均在SPSS6.0软件包上完成。
2结果
2.1血清HCV感染的检出率
126例HCC患者血清中抗-HCV阳性率为11.1%(14/126)，HCVRNA阳性率为17.5%(22/126)，其中抗-HCV和HCVRNA同时阳性者有10例，抗-HCV阳性患者HCVRNA的检出率达71.4%(10/14)，抗HCV阴性患者HCVRNA阳性率达10.7%(12/112)。
2.2血清HBV感染的检出率
126例HCC患者血清HBsAg阳性率为82.5%(104/126)，HBVDNA的阳性率为75.4%，其中HBsAg和HBVDNA同时阳性者有84例，HBsAg阳性患者HBVDNA的检出率达80.8%(84/104)，HBsAg阴性患者HBVDNA阳性率达50.0%(11/22)。
, 百拇医药
2.3HBV和HCV的重叠感染率
以HBsAg或HBVDNA阳性为HBV感染的标记，HBV的感染率为92.9%；以抗-HCV或HCVRNA阳性为HCV感染标志，HCV的感染率为21.4%，126例HCC患者HCV、HBV重叠感染的情况见表1：
表1 126例HCC患者血清学检查HBV、HCV重叠感染情况(%)
项目
n
HBV阳性(%)
HBV阴性(%)
HCV阳性
27
, 百拇医药 22(17.5)
5(4.0)
HCV阴性
99
95(75.4)
4(3.2)
合计
126
117(92.9)
9(7.1)
2.4肝癌和癌旁组织中HCV RNA和HBV DNA
126例肝组织和癌旁组织的检测结果见表2
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血清HCVRNA阳性患者组织中检出HCVRNA的有16例，104例血清中检出HBVDNA的患者，肝组织中检出HBVDNA82例，血清HBVDNA阴性，组织中检出HBVDNA12例，肝组织标本同时检测出HCV和HBV两种病毒感染有8例。
表2 126例HCC组织中HCVRNA和HBVDNA检出率(%)
项目
n
HCV RNA阳性(%)
HBV DNA阴性(%)
癌旁组织
126
16(12.7)
, 百拇医药
94(74.6)
癌组织
126
10(7.9)
48(38.1)
3讨论
原发性肝癌(PLC)有明显的地区性分布，以东南亚和南非一带国家为高发区，而欧美等国家为低发区，文献报告HCV感染是HCC发生的重要因素，HCC患者血清中抗-HCV检出率高达50%～75%〔4〕。日本的报道显示HCC与HBV的相关性在不断下降而与HCV感染的相关性越来越密切〔5〕。Kiyosama在109例HCC患者中发现HCV感染占56.9%，而HBV感染仅占22.9%〔6〕。我国是HBV高度流行地区，既往的研究表明大多数的HCC与HBV感染有关。随着大量血清制品的临床应用和世界范围吸毒者的增加，HCV的危害越来越受到人们的关注，有人对血清制品的白蛋白、丙种球蛋白、血浆等进行检查，发现这些制品有严重的HCV污染〔7〕。近来研究表明HCV可能也在HCC的发生中起一定的作用，北京地区HCC患者的抗-HCV检出率达38.5%〔8〕,上海的报告为10.4%〔9〕，西南地区为20.5%〔10〕，华南地区是HCC的高发区和HBV的高度流行地区，我们的研究显示126例HCC患者(在一定程度上代表广东地区)血清中抗-HCV检出率高达111%，低于北京地区的抗-HCV阳性率，而与西南地区，上海地区相近。
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HCV的免疫源性远不如HBV强，感染者血中病毒颗粒的含量很低，抗-HCV多在感染该病毒后2～6月才出现，其出现的时间因不同个体，和不同的检测方法而异，抗-HCV阴性不能排除HCV感染的可能，而抗-HCV阳性不表示体内一定有HCV病毒颗粒存在，因而抗-HCV检测对判断HCV的感染状况及指导临床治疗存在一定的局限性。日益简化的套式PCR技术，常在一些抗-HCV阴性的病人血中检出HCVRNA。我们的研究证实这一点，126例HCC患者抗-HCV检出14例，而HCV RNA检出22例，抗-HCV阳性患者HCV RNA的检出率达71.4%(10/14)，抗HCV阴性患者HCV RNA阳性率达10.7%(12/112)。如果以抗-HCV阳性或HCVRNA阳性做为HCV感染的指标，则HCV感染率为21.7%(27/126)，因而抗-HCV和HCVRNA联合检测，能较全面的反映HCV在HCC患者中的感染情况。
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高度流行区，本组126例HCC患者血清中HBsAg阳性率为82.5%(104/126)，与姚集鲁〔11〕1985年调查的广州地区原发性肝癌HBsAg阳性率87.7%相似。HBV DNA的阳性率为75.4%其中HBsAg和HBV DNA同时阳性者有84例，HBsAg阳性患者HBVDNA的检出率达80.8%(84/104)，HBsAg阴性患者HBV DNA阳性率达50.0%(11/22)。如果以HBsAg阳性或HBV DNA阳性为HBV的感染指标，则本研究的乙肝感染率高达92.9%。
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HBV和HCV有着共同的血清传播途径，患者常出现双重感染的情况，本研究中HBV与HCV叠重感染率高达17.5%(22/126)高于Okuda〔12〕的9份资料中HBsAg和抗-HCV双阳性率为11.63%(144/1238)。Alter〔13〕根据HCV感染50%以上为慢性过程，易发展为肝硬化的特点提出HBV与HCV双重感染增加肝细胞恶变的可能性。这资料显示出，HCV与HBV都是HCC发生的重要因素，两者可单独起作用，两者同时感染可能起协同的致癌作用，但HBV高度流行的本地区，HCC与HBV的关系似乎更密切些，这也提示在本地区预防控制HBVHCV感染对可降低HCC的发病率具有十分重要的意义。
目前研究丙型肝炎多通过血清学的检测进行，从组织学的角度探讨HCV感染的研究，仍处于起步阶段。Yoneyama等〔14〕在NS3区和C/E区设计引物检测血清抗-HCV阳性，而无HBV血清学标志的HCC患者癌组织和癌旁组织中的HCV RNA，结果8例中4例阳性。国内杨建民〔10〕等检测10例肝癌组织中检出5例。我们对126例肝癌组织进行检测，结果16(12.7%)例癌旁组织和10例癌组织中(7.9%)中检出HCV RNA，同时检测HBVDNA发现癌旁组织中HBV DNA阳性94(74.6%)，癌组织中HBVDNA阳性48例(38.1%)，同时检出HCV和HBV两种病毒有8例。这些证明肝组织中存在HCV与HBV的复制，提示HCV与HBV一起可能参予HCC的发生过程。
, 百拇医药
基金项目：美国中华医学基金(CMB)部分资助(GrantNo93528)
〔参考文献〕
1 Ruix J,Sangro B,Beloqui O, et al. Hepatitis B and C viral infections in the patient with hepatocellalar carcinoma〔J〕 . Hepatolgy,1992, 16(3):637.
2 Chomczynski P, Sacchi N. Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate- phendol chlotoform extraction〔J〕 . Anal Biochem, 1987, 162(1):156.
3 Inchauspe G,Abe K,Zebedee S, et al. Use of conserved sequences from hepatit is C virus for the detection of viral RNA in infected sera by polymerase chain reaction〔J〕 . Hepatology,1991, 14(4): 595.
, http://www.100md.com
4 Yu Mc, Tong MJ,Coursaget P,et al .prevalence of hepatitis B and C viral markers in black and white patients with hepatocellular carcinoma in the United States〔J〕 . Natl cancer Inst,1990, 82(12):1038～ 1041.
5 Tabor E, Kobayashi K. Hepatitis c virus a causative infections agent of non- A non- B hepatitis: prevalence and structure summary of a conference on hepatitis c virus as a cause of hepatocellular carcinoma〔J〕 . Natl cancer Inst,1992, 84(1):86～ 88.
, 百拇医药
6 Kiyosawa K, Furuta S. Review of hepatitis c in Japan〔J〕. Gastroenterol Hepatol,1991,6(3):383～ 391.
7 郝连杰,唐振亚，杨东亮，等.血液制品中丙型肝炎病毒状况的初步研究〔J〕.肝脏病杂志,1994,2(3):167～169.
8 北京医科大学肝病研究所.北京地区不同人群血清抗-HCV研究〔J〕.中华医学杂志,1992,72(1):18～20.
9 余竹元,汤剑猷.肝癌病人血清中丙型肝炎抗体的检出率〔J〕.中华肿瘤杂志,1993,15(1):44～45.
10 杨建民、刘为纹.丙肝炎病感染与原发性肝癌关系研究〔J〕.肝脏病杂志,1994,2(1):11～15.
, http://www.100md.com
11 姚集鲁.广州地区原发性肝癌与HBV感染关系的血清学调查〔J〕.中华传染病杂志,1985,3(2):130～131.
13 Okuda K. Hepatocellular carcinoma : recent progress〔 J〕 . Heppatology,1992, 15(5):948～ 963.
14 Alter HJ. The hepatitis e virus and its relationship to the clinical spectum of NANB hepatitis〔 J〕 . Gastroenterol Hepatol,1990, 5(suppl):78.
15 Yoneyama T,Takeuchi K,Watanabe Y, et al. Detection of hepatitis C virus cDNA Sequence by the polymerase chain reaction in hepatocellalar carcinoma tissues〔 J〕 . Jpn Med Sci Biol,1990, 43(3):89～ 94.
收稿日期：1998-08-11；收回日期：1999-03-22, 百拇医药
单位：郭荣平 李国辉 李锦清 中山医科大学肿瘤医院肝胆科(广州,510060)；周元平 彭晓谋 中山医科大学附属第三医院传染科(广州，510630)
关键词：肝细胞癌；丙型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；聚合酶链反应
癌症99zk07
【摘要】目的：通过研究肝细胞肝癌患者血清和肝组织中乙型、丙型肝炎病毒感染状况，探讨丙型肝炎病毒与肝细胞癌发生的关系。方法：采用ELISA法检测126例肝细胞癌患者血清中的抗-HCV、乙肝两对半，采用套式PCR检测血清中HCVRNA、HBVDNA以及组织标本中的HCVRNA、HBVDNA。结果：126例HCC患者血清中抗-HCV阳性率为11.1%，HCVRNA阳性率为17.5%，抗-HCV和HCVRNA同时联合检测HCV的阳性率为21.4%，血清HBsAg阳性率为82.5%，HBVDNA的阳性率为75.4%，HBsAg和HBVDNA联合检测同时HBV阳性率为92.9%，HBV、HCV重叠感染率为17.5%，肝癌和癌旁组织HCVRNA和HBVDNA的阳性率分别为7.9%、12.7%和38.1%、74.6%。结论：利用PCR技术直接检测HCVRNA和ELISA法检测抗-HCV更能全面了解和准确评价HCV在HCC患者中的感染情况，肝癌患者的癌旁组织和癌组织中都检测到HCVRNA,提示HCV在肝组织中的存在及复制，支持HCV与HBV一起参与HCC的发生。
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中图号：R735.7文献标识码：A文章编号：1000-467X(1999)s0-0020-04
The HCV and HBV infection in the patients with hepatocellular
carcinoma ─ A study on sera and hepatic tissue
GUO Rong-ping，LI Guo-hei，LI Jin-qing ,et al.
Department of Liver Cancer Tumor Hospital Sun Yat- sen University of Medical
Science,Guangzhou 510060,P.R.China
, 百拇医药
【Abstract】 Objective： To detemine the infection of HBV and HCV and evaluate the relationship between HCV infection and the development of HCC. Method： Analysis on 126 patients with HCC was done. The technique of ELISA was used to detect the anti-HCV and HBsAg of the sera . And the technique of PCR was used to detect the HBV DNA and HCV RNA of the sera and hepatic tissue. Results： The positive rate of anti-HCV in the patients with HCC in this area was 11.1% (14/126) .The positive rate of HCV RNA was 17.5% (22/126). If HCV infection was defined as anti- HCV and or HCV RNA positive, the infective rate of HCV was 21.4% in this study. The positive rate of HBsAg and HBV DNA were 82.5% (104/126) and 75.4% (95/126). The infective rate of HBV by combining detection of HBV RNA and HBsAg was 92.9% (117/126). The overlapping HCV and HBV infective rate was 17.5% (22/126). We detected the HCV RNA and HBV DNA in hepatic tissue, the positive rate of HCV RNA in cancerous and pericancerous tissue were 7.9% (/126) and 12.7% (16/126) respectively, and the HBV RNA positive rate were 38.1% (48/126) and 74.6% (94/126). Conclusions： HCV infection in the patients with HCC was determined more accurate by combining detection of HCV RNA and anti- HCV. This results suggested the presence and replication of HCV and HBV inside the hepatic tissue, and indicated both HCV and HBV might be the important factors in the development of HCC.
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Key words： Hepatocelluar carcinoma; Hepatitis virus C; Hepatitis virus B; Nested PCR
丙型肝炎病毒(HCV)是近年来发现的又一种重要的肝病致病因素，文献报道，HCV感染50%以上为慢性过程，其中约20%最终发展为肝硬化，与肝细胞癌(HCC)的发生关系密切〔1〕。我国是原发性肝癌(PLC)的高发区，同时又是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高度流行区，HCV、HBV的感染情况各地报告不一，对我院1992～1996年手术切除的肝细胞癌126例进行研究，现报导如下：
1.材料与方法
1.1材料来源
1992年7月～1996年12月，共收集我院治疗原发性肝癌的血清和新鲜肝癌和肝组织配对标本126例做为本组研究材料，全部为手术切除肝癌病人，经病理证实为肝细胞肝癌，其中男性117例(92.9%)，女性9例(7.1%)，男女之比为13∶1，年龄最小23岁，最大69岁，中位年龄47岁。
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1.2实验方法
抗-HCV的测定，用美国Abbott抗-HCVEIA检测试剂盒(2ndGeneration)按厂家操作和计算Cutoff值，以OD值≥Cutoff值为证实阳性，余为阴性。乙肝二对半的测定用中山医科大学传染病教研室生产的EIA试剂盒(卫生部核准产品)按说明操作进行。
测定HCV RNA按套式PCR试剂盒，在HCVRNA基因组的高度保守区5端设计引物，引物的核苷酸序列为：
外引物SP17～265’-ACTCCACCATAGATCA-CTCC
外引物SP2328～309R5’-TCATGGTGCACG-GTCTACGA(外引物扩增片段长322bp)
内引物SP351～705’-GCAGAAAGCGTC-TAGCCATG
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内引物SP4248～229R5’-AACACTACTCG-GCTAGCAGT(内引物扩增片段长198bp)
检测HBVDNA按套式PCR HBV DNA试剂盒检测方法进行，在HBVDNAC区及附近设计引物，引物的核甘酸序列为：
外引物C1，5’-CTGGGAGGAGTTGGGGGAGGAGATT
外引物C2R，5’-GGCGAGGGAGTTCTTCTTCTAGGGG(外引物扩增片段长约665bp)
内引物C3，5’-ACTGTTCAAACCTCCAAGCT
内引物C4，5’-AGGAGTGCCAATCCACACTC(内引物扩增片段长429bp)
结果判别见图1、图2。
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图1HCVSp内引物系统扩增产物
1：阴性对照2：阳性对照3，4：阴性结果
5，6：阳性结果MpBR322/Hinf1(分子量标志)
图2HCV外引物扩增产物的电泳结果
1：阴性对照2：阳性对照3，5：阴性结果
4，6：阳性结果MpBR322/Hinf1(分子量标志)
肝癌和癌旁组织中HCV RNA和HBVDNA的检测，手术切除后，标本用灭菌生理盐水洗去血迹，切为小块，装入液氮管尽快存入液氮中贮存，按文献方法〔2，3〕提取组织中DNA和RNA，组织提取液HCV RNA、HBV DNA的测定方法同血浆进行。
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2结果
2.1血清HCV感染的检出率
126例HCC患者血清中抗-HCV阳性率为11.1%(14/126)，HCVRNA阳性率为17.5%(22/126)，其中抗-HCV和HCVRNA同时阳性者有10例，抗-HCV阳性患者HCVRNA的检出率达71.4%(10/14)，抗HCV阴性患者HCVRNA阳性率达10.7%(12/112)。
2.2血清HBV感染的检出率
126例HCC患者血清HBsAg阳性率为82.5%(104/126)，HBVDNA的阳性率为75.4%，其中HBsAg和HBVDNA同时阳性者有84例，HBsAg阳性患者HBVDNA的检出率达80.8%(84/104)，HBsAg阴性患者HBVDNA阳性率达50.0%(11/22)。
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2.3HBV和HCV的重叠感染率
以HBsAg或HBVDNA阳性为HBV感染的标记，HBV的感染率为92.9%；以抗-HCV或HCVRNA阳性为HCV感染标志，HCV的感染率为21.4%，126例HCC患者HCV、HBV重叠感染的情况见表1：
表1 126例HCC患者血清学检查HBV、HCV重叠感染情况(%)
项目
n
HBV阳性(%)
HBV阴性(%)
HCV阳性
27
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5(4.0)
HCV阴性
99
95(75.4)
4(3.2)
合计
126
117(92.9)
9(7.1)
2.4肝癌和癌旁组织中HCV RNA和HBV DNA
126例肝组织和癌旁组织的检测结果见表2
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血清HCVRNA阳性患者组织中检出HCVRNA的有16例，104例血清中检出HBVDNA的患者，肝组织中检出HBVDNA82例，血清HBVDNA阴性，组织中检出HBVDNA12例，肝组织标本同时检测出HCV和HBV两种病毒感染有8例。
表2 126例HCC组织中HCVRNA和HBVDNA检出率(%)
项目
n
HCV RNA阳性(%)
HBV DNA阴性(%)
癌旁组织
126
16(12.7)
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94(74.6)
癌组织
126
10(7.9)
48(38.1)
3讨论
原发性肝癌(PLC)有明显的地区性分布，以东南亚和南非一带国家为高发区，而欧美等国家为低发区，文献报告HCV感染是HCC发生的重要因素，HCC患者血清中抗-HCV检出率高达50%～75%〔4〕。日本的报道显示HCC与HBV的相关性在不断下降而与HCV感染的相关性越来越密切〔5〕。Kiyosama在109例HCC患者中发现HCV感染占56.9%，而HBV感染仅占22.9%〔6〕。我国是HBV高度流行地区，既往的研究表明大多数的HCC与HBV感染有关。随着大量血清制品的临床应用和世界范围吸毒者的增加，HCV的危害越来越受到人们的关注，有人对血清制品的白蛋白、丙种球蛋白、血浆等进行检查，发现这些制品有严重的HCV污染〔7〕。近来研究表明HCV可能也在HCC的发生中起一定的作用，北京地区HCC患者的抗-HCV检出率达38.5%〔8〕,上海的报告为10.4%〔9〕，西南地区为20.5%〔10〕，华南地区是HCC的高发区和HBV的高度流行地区，我们的研究显示126例HCC患者(在一定程度上代表广东地区)血清中抗-HCV检出率高达111%，低于北京地区的抗-HCV阳性率，而与西南地区，上海地区相近。
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HCV的免疫源性远不如HBV强，感染者血中病毒颗粒的含量很低，抗-HCV多在感染该病毒后2～6月才出现，其出现的时间因不同个体，和不同的检测方法而异，抗-HCV阴性不能排除HCV感染的可能，而抗-HCV阳性不表示体内一定有HCV病毒颗粒存在，因而抗-HCV检测对判断HCV的感染状况及指导临床治疗存在一定的局限性。日益简化的套式PCR技术，常在一些抗-HCV阴性的病人血中检出HCVRNA。我们的研究证实这一点，126例HCC患者抗-HCV检出14例，而HCV RNA检出22例，抗-HCV阳性患者HCV RNA的检出率达71.4%(10/14)，抗HCV阴性患者HCV RNA阳性率达10.7%(12/112)。如果以抗-HCV阳性或HCVRNA阳性做为HCV感染的指标，则HCV感染率为21.7%(27/126)，因而抗-HCV和HCVRNA联合检测，能较全面的反映HCV在HCC患者中的感染情况。
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高度流行区，本组126例HCC患者血清中HBsAg阳性率为82.5%(104/126)，与姚集鲁〔11〕1985年调查的广州地区原发性肝癌HBsAg阳性率87.7%相似。HBV DNA的阳性率为75.4%其中HBsAg和HBV DNA同时阳性者有84例，HBsAg阳性患者HBVDNA的检出率达80.8%(84/104)，HBsAg阴性患者HBV DNA阳性率达50.0%(11/22)。如果以HBsAg阳性或HBV DNA阳性为HBV的感染指标，则本研究的乙肝感染率高达92.9%。
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HBV和HCV有着共同的血清传播途径，患者常出现双重感染的情况，本研究中HBV与HCV叠重感染率高达17.5%(22/126)高于Okuda〔12〕的9份资料中HBsAg和抗-HCV双阳性率为11.63%(144/1238)。Alter〔13〕根据HCV感染50%以上为慢性过程，易发展为肝硬化的特点提出HBV与HCV双重感染增加肝细胞恶变的可能性。这资料显示出，HCV与HBV都是HCC发生的重要因素，两者可单独起作用，两者同时感染可能起协同的致癌作用，但HBV高度流行的本地区，HCC与HBV的关系似乎更密切些，这也提示在本地区预防控制HBVHCV感染对可降低HCC的发病率具有十分重要的意义。
目前研究丙型肝炎多通过血清学的检测进行，从组织学的角度探讨HCV感染的研究，仍处于起步阶段。Yoneyama等〔14〕在NS3区和C/E区设计引物检测血清抗-HCV阳性，而无HBV血清学标志的HCC患者癌组织和癌旁组织中的HCV RNA，结果8例中4例阳性。国内杨建民〔10〕等检测10例肝癌组织中检出5例。我们对126例肝癌组织进行检测，结果16(12.7%)例癌旁组织和10例癌组织中(7.9%)中检出HCV RNA，同时检测HBVDNA发现癌旁组织中HBV DNA阳性94(74.6%)，癌组织中HBVDNA阳性48例(38.1%)，同时检出HCV和HBV两种病毒有8例。这些证明肝组织中存在HCV与HBV的复制，提示HCV与HBV一起可能参予HCC的发生过程。
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基金项目：美国中华医学基金(CMB)部分资助(GrantNo93528)
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收稿日期：1998-08-11；收回日期：1999-03-22, 百拇医药