川芎嗪对急性出血坏死性胰腺炎大鼠血浆血栓素、 前列环素及氧自由基的影响
上海第二医科大学附属瑞金医院 上海市 200025
王兴鹏，男，28岁，消化内科博士研究生. 主要从事重症胰腺炎病理生理机制的研究工作.
项目负责人： 王兴鹏，200025，上海瑞金2路197号，上海第二医科大学附属瑞金医院.
Tel：0086-21-3286590 Ext.354
收稿日期 1992-09-10 修回日期 1992-11-16
摘 要观察了活血化瘀中药川芎嗪对急性出血坏死性胰腺炎大鼠血浆血栓素(TXA2)、前列环素(PGI2)及血清过氧化脂质(LPO)的影响和治疗作用. 结果表明，急性出血坏死性胰腺炎血浆TXA2，TXA2/PGI2比值以及LPO明显增高；腹腔注入80mg/kg鼠重川芎嗪能显著降低TXA2，稳定TXA2/PGI2比值，降低LPO，减少腹水积聚，提高病鼠存活率，减轻胰组织出血坏死程度和腺泡细胞超微结构的破坏.
, 百拇医药
主题词 胰腺炎/治疗；血栓烷A2/血液；依前列醇/血液；川芎嗪；自由基
Subject headings pancreatitis/therapy; tetramethy/pyrazine;thromboxane/blood; epoprostenol/blood; free radicals
王兴鹏,徐家裕,袁耀宗,翟祖康.川芎嗪对急性出血坏死性胰腺炎大鼠血浆血栓素、前列环素及氧自由基的影响.
新消化病学杂志.1993；1(1)：13-15
0 引言
急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)发病机制尚未完全阐明，近年来研究揭示PGI2，TXA2平衡失调以及氧自由基等，在AHNP发病中起着重要的病理生理作用[1，2]. 它们参与了胰腺血循环紊乱、细胞损伤及其他脏器的损害. 实验研究表明，川芎嗪(TMP)具有拟钙离子拮抗剂样作用[3]，能调节体内PGI2-TXA2，平衡和清除氧自由等作用. 目前关于川芎嗪治疗急性胰腺炎尚未见报道. 鉴于上述，我们在AHNP大鼠模型上观察川芎嗪对AHNP状态下PGI2-TXA2平衡和氧自由基的作用及其与治疗作用的关系. 为中西医结合治疗急性出血坏死性胰腺炎开辟一新途径.
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1 材料和方法
1.1 实验分组 SD大鼠107只，体重160g～250g，雌雄各半(上海计划生育研究所提供). 所有大鼠随机分成正常对照组(n=5)、假手术组(n=30)、生理盐水处理组(n=36)、TMP治疗组(n=36). 在AHNP模型制备后30min腹腔内注射TMP(广东利民制药厂)80mg/kg,容积为0.32mL/100g;假手术组和生理盐水处理组于相应时间内腹腔注入等容积生理盐水.
1.2 AHNP模型的制备 参照Chetty氏法稍改良[4]. 所有大鼠术前禁食12h，不禁水.2.5%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(0.1mL/100g体重). 腹壁正中切口入腹腔，在胆胰管开口的两端结扎十二指肠，使之成2cm长闭袢，然后向闭袢内注入5%牛磺胆酸钠0.3mL(包头生化制药厂)，使闭袢充盈并反流至胆胰管内. 术后限量饮水. 仅行剖腹术并轻翻动胰腺为假手术组.
, 百拇医药
1.3 血液学检查 血清过氧化脂质(LPO)：TBA比色法;血浆TXB2，6-Keto-PGF1α浓度测定，采用放射免疫法试剂盒为苏州医学院血栓止血研究室提供.
1.4 大鼠生存情况、腹水量及病理 假手术组、生理盐水处理组及TMP治疗组各15只，观察其平均存活时间及24h内死亡率；三组分别于术后1，6，12h剖腹观察腹水量(湿棉球重减去干棉球重)，腹腔动脉抽血留取血标本，取胰腺以10%福尔马林固定，HE染色光镜下观察，以2%戊二醛固定、环氧树脂包埋作电镜观察.
1.5 统计学处理 死亡率用卡方检验，原均生存时间，腹水量及血液生化指标用t检验，数值用x±s表示.
2 结果
2.1 血清LPO含量变化 AHNP制备后各时相，血清中LPO值较假手术组显著增高(P<0.01); TMP治疗组LPO值在各相应时相较生理盐水处理组显著下降(P<0.05)，但较假手术组仍较高(P<0.05).
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2.2 血浆TXB2,6-Keto-PGF1α及比值变化AHNP制成后1h，与假手术组相比. TXB2上升幅度为6.76倍，而b-Keto-PGF1a为3.94倍. 显然TXB2，b-Keto-PGF1α平衡失调而偏于TXB2. AHNP制成后TXB2/b-Keto-PGF1α比值由正常对照的1.56±0.21上升至2.67±0.32，3.50±0.18，8.63±1.72(P<0.01)；而TMP治疗组该比值为1.72±0.26，1.48±0.19，3.28±0.86，较生理盐水处理组下降(P<0.05),而1.6h 与正常对照组无差异(P>0.05).
2.3 大鼠腹水变化 假手术组未见腹水积聚. 其余两组均见不同程度的腹水渗出(见表1).
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表1 不同时期各组大鼠腹水量(g，x-±s)变化
aP<0.05，vs生理盐水处理组.
2. 4 动物生存情况 假手术组术后长期存活. AHNP生理盐水处理组24h内死亡4只，死亡率93.3%. TMP治疗组24h内死亡8只，死亡率53.3%，较生理盐水处理组显著下降(P<0.025)；生理盐水处理组平均存活时间13.21h±7.57h，TMP治疗组为23.77h±15.03h，差异极显著(P<0.001).
, 百拇医药
2.5 病理学检查 假手术组光镜下胰腺组织基本正常.AHNP制成后随着时间的推移病理改变程度加深，其表现为：胰腺间质大量红细胞，炎症细胞浸润，胰内及胰周脂肪组织坏死，胰管、血管损伤；TMP治疗组主要表现为胰腺间质充血水肿，少量炎性细胞浸润及局灶性胰腺小叶内坏死；内镜检查表明AHNP胰腺腺细胞内线粒体嵴模糊、断裂或空泡变，内质网扩大、肿胀，次级溶酶体增多. TMP治疗组仅为线粒体、内质网不同程度的肿胀.
3 讨论
川芎嗪(TetramethyL Pyrazine,TMP)系从乎形科藁本属植物川芎中分离提纯的一种生物碱单体. 由于其较广泛的药理作用而被用于心血管、肺、脑等疾病的防治. 目前研究结果表明，川芎嗪具有类钙拮抗剂样作用，能抑制体内TXA2合成酶使TXA2生成减少，促进动脉壁产生PGI2；能提高组织中超氧歧化酶活性而清除氧自由基.TXA2，PGL2系花生四烯酸代谢产物，前者主要促血管收缩、刺激血小板聚集、降低溶酶体膜稳定性. PGI2则与之相反，正常状态下两者组成一平衡体而维持着体内环境稳态. 本研究结果表明，AHNP大鼠血浆TXA2，PGI2均增高，两者比值增高，TXA2，PGI2平衡失调，与Van Ooijen[1]报道一致. 失平衡之后果与AHNP时胰腺及其他器官血循环障碍有关. 进一步研究发现，单一应用TXA2合成酶抑制剂Dazmerge并不能显著延长AHNP大鼠生存期，而联合应用Iloprost(PGI2类似物)则将死亡率从100%降至10%，说明维持TXA2/PGI2比值对AHNP预后的改善极为重要. 本实验应用TMP治AHNP大鼠，发现血浆TXB2(TXA2稳定产物)显著下降，而b-keto-PGF1α(PGI2稳定产物)轻度增高，TXA2/PGI2比值下降而接近正常.氧自由基及其代谢产物在AHNP发病中作用，已基本肯定. 研究表明，脂质过氧化物(LPO)可使膜结合酶失活，细胞膜损伤及血管通透性增高，AHNP时胰腺病理改变及ARDS发生与之有关[2]. 本研究结果表明随着时间延长，胰腺病理改变程度加重，LPO值增高. TMP显著降低了AHNP大鼠血清LPO值.本研究首次应用TMP治疗AHNP大鼠，结果发现其明显减少腹水生成，减轻大鼠胰腺出血、坏死、炎症反应程度，改善胰腺腺泡细胞超微结构的变化，有效地提高了病鼠生存期及生存率，此与TMP能维持AHNP状态下PG12/TXA2比值的稳定，减少LPO的生成等有关. 此为临床应用TMP治疗AHNP提供理论基础，值得进一步研究.
, 百拇医药
4 参考文献1 Ooijen BV, Kort WJ, Tinga CJ, et al. Prostanoid imbalance in experimental acute necrotizing pancreatitis in rats.
Scand J Gastroenterology,1988;23:193-198
2 Nonaka A, Manabe T, Kyogoku T, et al. Changes in lipid peroxide and oxygen radical scavengers in cerulein-induced acllte
pancreatitis:Imbalance between the offense and defense systems, Digestion, 1990;47:130-137
3 许顺滨. 川芎嗪对正常及高血压大鼠动脉平滑肌钙离子内流的动力学影响. 中国应用生理学杂志，1989;1：26-31
4 Ooijen BV, Kort WJ, Tinga CJ, et al. Significance of thromboxane A2and prostaglandin I-2 in acllte necrotizing pancreatitis
in rats. Dig-Dis-Sci, 1990;35:1078-1084, 百拇医药
王兴鹏，男，28岁，消化内科博士研究生. 主要从事重症胰腺炎病理生理机制的研究工作.
项目负责人： 王兴鹏，200025，上海瑞金2路197号，上海第二医科大学附属瑞金医院.
Tel：0086-21-3286590 Ext.354
收稿日期 1992-09-10 修回日期 1992-11-16
摘 要观察了活血化瘀中药川芎嗪对急性出血坏死性胰腺炎大鼠血浆血栓素(TXA2)、前列环素(PGI2)及血清过氧化脂质(LPO)的影响和治疗作用. 结果表明，急性出血坏死性胰腺炎血浆TXA2，TXA2/PGI2比值以及LPO明显增高；腹腔注入80mg/kg鼠重川芎嗪能显著降低TXA2，稳定TXA2/PGI2比值，降低LPO，减少腹水积聚，提高病鼠存活率，减轻胰组织出血坏死程度和腺泡细胞超微结构的破坏.
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主题词 胰腺炎/治疗；血栓烷A2/血液；依前列醇/血液；川芎嗪；自由基
Subject headings pancreatitis/therapy; tetramethy/pyrazine;thromboxane/blood; epoprostenol/blood; free radicals
王兴鹏,徐家裕,袁耀宗,翟祖康.川芎嗪对急性出血坏死性胰腺炎大鼠血浆血栓素、前列环素及氧自由基的影响.
新消化病学杂志.1993；1(1)：13-15
0 引言
急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)发病机制尚未完全阐明，近年来研究揭示PGI2，TXA2平衡失调以及氧自由基等，在AHNP发病中起着重要的病理生理作用[1，2]. 它们参与了胰腺血循环紊乱、细胞损伤及其他脏器的损害. 实验研究表明，川芎嗪(TMP)具有拟钙离子拮抗剂样作用[3]，能调节体内PGI2-TXA2，平衡和清除氧自由等作用. 目前关于川芎嗪治疗急性胰腺炎尚未见报道. 鉴于上述，我们在AHNP大鼠模型上观察川芎嗪对AHNP状态下PGI2-TXA2平衡和氧自由基的作用及其与治疗作用的关系. 为中西医结合治疗急性出血坏死性胰腺炎开辟一新途径.
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1 材料和方法
1.1 实验分组 SD大鼠107只，体重160g～250g，雌雄各半(上海计划生育研究所提供). 所有大鼠随机分成正常对照组(n=5)、假手术组(n=30)、生理盐水处理组(n=36)、TMP治疗组(n=36). 在AHNP模型制备后30min腹腔内注射TMP(广东利民制药厂)80mg/kg,容积为0.32mL/100g;假手术组和生理盐水处理组于相应时间内腹腔注入等容积生理盐水.
1.2 AHNP模型的制备 参照Chetty氏法稍改良[4]. 所有大鼠术前禁食12h，不禁水.2.5%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(0.1mL/100g体重). 腹壁正中切口入腹腔，在胆胰管开口的两端结扎十二指肠，使之成2cm长闭袢，然后向闭袢内注入5%牛磺胆酸钠0.3mL(包头生化制药厂)，使闭袢充盈并反流至胆胰管内. 术后限量饮水. 仅行剖腹术并轻翻动胰腺为假手术组.
, 百拇医药
1.3 血液学检查 血清过氧化脂质(LPO)：TBA比色法;血浆TXB2，6-Keto-PGF1α浓度测定，采用放射免疫法试剂盒为苏州医学院血栓止血研究室提供.
1.4 大鼠生存情况、腹水量及病理 假手术组、生理盐水处理组及TMP治疗组各15只，观察其平均存活时间及24h内死亡率；三组分别于术后1，6，12h剖腹观察腹水量(湿棉球重减去干棉球重)，腹腔动脉抽血留取血标本，取胰腺以10%福尔马林固定，HE染色光镜下观察，以2%戊二醛固定、环氧树脂包埋作电镜观察.
1.5 统计学处理 死亡率用卡方检验，原均生存时间，腹水量及血液生化指标用t检验，数值用x±s表示.
2 结果
2.1 血清LPO含量变化 AHNP制备后各时相，血清中LPO值较假手术组显著增高(P<0.01); TMP治疗组LPO值在各相应时相较生理盐水处理组显著下降(P<0.05)，但较假手术组仍较高(P<0.05).
, 百拇医药
2.2 血浆TXB2,6-Keto-PGF1α及比值变化AHNP制成后1h，与假手术组相比. TXB2上升幅度为6.76倍，而b-Keto-PGF1a为3.94倍. 显然TXB2，b-Keto-PGF1α平衡失调而偏于TXB2. AHNP制成后TXB2/b-Keto-PGF1α比值由正常对照的1.56±0.21上升至2.67±0.32，3.50±0.18，8.63±1.72(P<0.01)；而TMP治疗组该比值为1.72±0.26，1.48±0.19，3.28±0.86，较生理盐水处理组下降(P<0.05),而1.6h 与正常对照组无差异(P>0.05).
2.3 大鼠腹水变化 假手术组未见腹水积聚. 其余两组均见不同程度的腹水渗出(见表1).
, 百拇医药
表1 不同时期各组大鼠腹水量(g，x-±s)变化
组别 | N | 1 | 6 | 12 |
AHNP+生理盐水 | 21 | 3.41±1.12 | , 百拇医药 3.32±2.41 | 4.44±1.56 |
AHNP+TMP | 21 | 2.14±0.80a | 1.30±1.23a | 1.70±1.08a |
aP<0.05，vs生理盐水处理组.
2. 4 动物生存情况 假手术组术后长期存活. AHNP生理盐水处理组24h内死亡4只，死亡率93.3%. TMP治疗组24h内死亡8只，死亡率53.3%，较生理盐水处理组显著下降(P<0.025)；生理盐水处理组平均存活时间13.21h±7.57h，TMP治疗组为23.77h±15.03h，差异极显著(P<0.001).
, 百拇医药
2.5 病理学检查 假手术组光镜下胰腺组织基本正常.AHNP制成后随着时间的推移病理改变程度加深，其表现为：胰腺间质大量红细胞，炎症细胞浸润，胰内及胰周脂肪组织坏死，胰管、血管损伤；TMP治疗组主要表现为胰腺间质充血水肿，少量炎性细胞浸润及局灶性胰腺小叶内坏死；内镜检查表明AHNP胰腺腺细胞内线粒体嵴模糊、断裂或空泡变，内质网扩大、肿胀，次级溶酶体增多. TMP治疗组仅为线粒体、内质网不同程度的肿胀.
3 讨论
川芎嗪(TetramethyL Pyrazine,TMP)系从乎形科藁本属植物川芎中分离提纯的一种生物碱单体. 由于其较广泛的药理作用而被用于心血管、肺、脑等疾病的防治. 目前研究结果表明，川芎嗪具有类钙拮抗剂样作用，能抑制体内TXA2合成酶使TXA2生成减少，促进动脉壁产生PGI2；能提高组织中超氧歧化酶活性而清除氧自由基.TXA2，PGL2系花生四烯酸代谢产物，前者主要促血管收缩、刺激血小板聚集、降低溶酶体膜稳定性. PGI2则与之相反，正常状态下两者组成一平衡体而维持着体内环境稳态. 本研究结果表明，AHNP大鼠血浆TXA2，PGI2均增高，两者比值增高，TXA2，PGI2平衡失调，与Van Ooijen[1]报道一致. 失平衡之后果与AHNP时胰腺及其他器官血循环障碍有关. 进一步研究发现，单一应用TXA2合成酶抑制剂Dazmerge并不能显著延长AHNP大鼠生存期，而联合应用Iloprost(PGI2类似物)则将死亡率从100%降至10%，说明维持TXA2/PGI2比值对AHNP预后的改善极为重要. 本实验应用TMP治AHNP大鼠，发现血浆TXB2(TXA2稳定产物)显著下降，而b-keto-PGF1α(PGI2稳定产物)轻度增高，TXA2/PGI2比值下降而接近正常.氧自由基及其代谢产物在AHNP发病中作用，已基本肯定. 研究表明，脂质过氧化物(LPO)可使膜结合酶失活，细胞膜损伤及血管通透性增高，AHNP时胰腺病理改变及ARDS发生与之有关[2]. 本研究结果表明随着时间延长，胰腺病理改变程度加重，LPO值增高. TMP显著降低了AHNP大鼠血清LPO值.本研究首次应用TMP治疗AHNP大鼠，结果发现其明显减少腹水生成，减轻大鼠胰腺出血、坏死、炎症反应程度，改善胰腺腺泡细胞超微结构的变化，有效地提高了病鼠生存期及生存率，此与TMP能维持AHNP状态下PG12/TXA2比值的稳定，减少LPO的生成等有关. 此为临床应用TMP治疗AHNP提供理论基础，值得进一步研究.
, 百拇医药
4 参考文献1 Ooijen BV, Kort WJ, Tinga CJ, et al. Prostanoid imbalance in experimental acute necrotizing pancreatitis in rats.
Scand J Gastroenterology,1988;23:193-198
2 Nonaka A, Manabe T, Kyogoku T, et al. Changes in lipid peroxide and oxygen radical scavengers in cerulein-induced acllte
pancreatitis:Imbalance between the offense and defense systems, Digestion, 1990;47:130-137
3 许顺滨. 川芎嗪对正常及高血压大鼠动脉平滑肌钙离子内流的动力学影响. 中国应用生理学杂志，1989;1：26-31
4 Ooijen BV, Kort WJ, Tinga CJ, et al. Significance of thromboxane A2and prostaglandin I-2 in acllte necrotizing pancreatitis
in rats. Dig-Dis-Sci, 1990;35:1078-1084, 百拇医药