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编号:10694149
用抗人结肠癌单克隆抗体检测血清和粪便中大肠癌相关抗原的研究
http://www.100md.com 1995年3月20日 《世界华人消化杂志》 1995年第1期
     项目负责人:冯福才,男1935-10-24生,辽宁省辽中县人,汉族。1963年大连医学院医疗系本科毕业,现任教授、主任医师,自1989年为研究生导师,主要从事消化系病诊断研究,尤其对消化内镜临床应用研究颇有造诣,共发表论文69篇,《纤维结肠镜临床应用》主要编著者,现任广东省消化内镜学会副主委,中国实用内科杂志和本刊编委

    [广州市第一军医大学南方医院消化中心。电话(020) 7705577转3100或3093(办),转3096(宅)]。(1994-08-09 收稿)

    Study on detection of cancer associated antigen in serum and fecesby monoclonal antibodies against human colorectal cancer

    Fu-Cai Feng, Wen Huang, Dian-Yuan Zhou, Ya-Li Zhang and Zhuo-Sheng Lai
, 百拇医药
    Department of Gastroenterology, Nanfang Hospital, The FirstMilitary Medical University, Guangzhou 510515 China

    Abstract

    AIMS
To study the value of detection of cancer associatedantigens in serum and feces by using monoclonal antibodies against human colorectal cancer.

    METHODS Cancer associated antigen in serum and feces wasdetected by using double-antibody sandwich ELISA method with human colonic cancer spectific monoclonal antibodes SC6 and SC3A. Forty-seven colorectal carcinomas, 33 colorectal adenomas, 15 hyperplastic polyps, 14 inflammatory polyps and 60normal subjects were analysed.
, 百拇医药
    RESULTS The positivity rates of cancer associated antigen in serum and feces in colorectal cancers were 66.0% and 72.3% respectively, and in adenomas, 63.3% and 60.6%, hyperplastic polyps, 35.7% and 57.1%, inflammatory poly ps, 40.0% and 33.3% But in normal group, the positivity rates were only 11.7% and 13.3% The relation of Duke's stages of 45 carcinomas and the positivity rates of cancer associated antigen in serum and feces were further studied The positivity rates for early colorectal cancers were 72.2% in feces and 50.0% in serum.
, 百拇医药
    CONCLUSIONS The detection of cancer associated antigens by ELISA method may be useful for colorectal cancer diagnosis, and fecal detection may be more sensitive.

    Subject headings antibody, monoclonal; antigen, neoplasms, adenoma; colorectal neoplasms

    Feng FC, Huang W, Zhou DY, Zhang YL, Lai ZS. Study on detection of cancer associated antigen in serum and feces by monoclonal antibodiesagainst human colorectal cancer. Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1995;3(1):36-38
, 百拇医药
    摘要目的 研究抗人结肠癌MAb检测血清及粪液中癌相关抗原的价值。

    方法 采用抗人结肠癌单抗SC3A和SC6检测47例结直肠癌、33例结直肠腺瘤、15例增生性息肉、14例炎性息肉及60例正常人群的血清和粪便中癌相关抗原。经ELISA双抗体夹心法检测。

    结果 血清和粪便阳性率在结直肠癌组分别为66.0%和72.3%,腺瘤组为63.6%和60.6%,增生性息肉组为35.7%和57.1%,炎性息肉组为40.0%和33.3%,而正常对照组仅为11.7%和13.3%。45例大肠癌依Dukes分期进行检测,早期癌粪便检测的阳性率为72.2%,而血清为50.0%。

    结论 ELISA法检测不仅对大肠癌及癌前病变具有较好的敏感性,而且对早期癌及癌前期病变检测较血清学检测意义更大。此外,随腺瘤不典型增生程度加重而检测阳性率增高。粪便中检测大肠癌相关抗原,方法简便,取材容易,具较好敏感性,对大规模人群普查大肠癌具有一定的应用价值。
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    主题词 结肠直肠肿瘤,腺癌;抗体,单克隆;抗原,肿瘤;酶联免疫吸附测定

    冯福才,黄文,周殿元,张亚厉,赖卓胜.用抗人结肠癌单克隆抗体检测血清和粪便中大肠癌相关抗原的研究.

    新消化病学杂志,1995;3(1):36-38

    大肠癌在我国居消化道恶性肿瘤的第3位。早期缺乏特异性临床表现,就诊时50%-60%已属晚期,5年生存率低。因此,早期诊断已成为大肠癌综合防治的重点。开展对无症状人群普查是发现早期大肠癌的有效途径。作者利用抗人结肠癌相关抗原单克隆抗体对血清和粪液进行检测,并对两种方法进行对比研究,以探讨单抗用于大肠癌筛检的可行性,报道如下。

    1 对象和方法

    
1.1 抗体 单克隆抗体SC3A和SC6由刘民培等[1]研制提供,属IgG1,识别的抗原为与CEA无关的糖蛋白。本实验所选用抗体为杂交瘤细胞诱生的腹水,按文献[2]以正辛酸法纯化,并按文献[3]以过碘酸钠氧化法用辣根过氧化物酶标记SC6。
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    1.2 病例 手术病理证实的结直肠癌患者47例,其中右半结肠癌7例,左半结肠癌3例,直肠癌37例。Dukes A期18例,B期10例,C期10例,D期7例,3例分期不明。纤维结肠镜摘除的结直肠腺瘤33例,其中右半结肠2例,左半结肠20例,直肠11例,按不典型增生程度分为轻度21例,中度12例。另有纤维结肠镜活检的增生性息肉15例和炎性息肉14例,60例正常对照为纤维结肠镜检查无明显结直肠病变的人群。

    1.3 标本 血清为空腹静脉血-20保存,新鲜粪便200mg,溶于1ml生理盐水中,混匀后低温离心,4000r/min及1000r/min各1次,取上清液-20保存。

    1.4 检测方法 ELISA双抗体夹心法检测,0.01mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6);稀释MAbSC3A至80μg/ml,加入40孔酶联板包被,4过夜;10%小牛血清37封闭30min,0.01mol/L PBS (pH 9.6)冲洗3次;加入待测标本100μl,孵育2h,PBS洗3次;加入辣根过氧化物酶标记的MAbSC6,37作用2h,洗涤后加OPD显色,2mol/L硫酸终止反应,酶联检测仪测定(OD值492nm)。结果判定:以正常对照组平均OD值加1.96倍标准差为阳性阈值,大于此值为阳性病例。
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    2 结果

    
MAb同两个标本组的血清、粪液均有不同程度的结合,两种检测中结直肠癌组、结直肠腺瘤组、增生性息肉组、炎性息肉组与正常对照组间有显著差异(P<0.01)。其中结直肠癌组阳性率最高,结直肠腺瘤组次之(表1)。

    表1 血清和粪液中大肠癌相关抗原ELISA法检测结果
分组n血清粪液
OD值(x-±S)阳性数阳性率(%)OD值(x-±S)阳性数阳性率(%)
正常对照600.33±0.14711.70.27±0.13313.3
大 肠 癌470.59±0.233166.00.55±0.253472.3
大肠腺瘤330.60±0.202163.60.54±0.242060.6
增生息肉140.43±0.26535.70.47±0.28857.1
炎性息肉150.46±0.20640.00.45±0.22533.3

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    比较两种方法检测结果,粪液检测阳性率稍高于血清学检测,但无显著差异(P>0.05)。对45例结直肠癌的Dukes分期与肿瘤相关抗原检出率进行分析,结果表明血清学检测,A期癌检出率较低,而粪液检测则可以提高A期癌的检出率,提示粪液检测对早期癌诊断价值较血清学检测意义更大(表2)。对腺瘤不典型增生程度与大肠癌相关抗原检测进行比较,结果表明不典型增生程度与大肠癌相关抗原检出率明显相关,中度不典型增生的检出率较轻度不典型增生的阳性率高,血清和粪液两种方法检出率无明显差异P<0.05(表3)。

    表2 大肠癌Dukes分期与肿瘤相关抗原检出率的关系
Dukes分期n血清粪液
阳性数阳性率(%)阳性数阳性率(%)
A期18950.01372.2
B期10880.0770.0
C期10880.0880.0
D期7685.7685.7

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    表3 腺瘤不典型增生程度与肿瘤相关抗原检出率的比较
不典型增生程度n血清粪液
阳性数阳性率(%)阳性数阳性率(%)
轻度211257.11152.4
中度12975.0975.0


    3 讨论

    在大肠癌研究中,国内外已研制出多种抗结肠癌单抗(MAb)[4],正试图通过方法改进将其应用于临床。本研究显示,应用ELISA法检测大肠肿瘤相关抗原对大肠癌及癌前病变有一定的敏感性,其中血清学检出率达63.6%-66.0%,粪液检出率达60.6%-72.3%,而正常对照组仅分别为11.7%和13.3%,与袁玖等[5]报道的结果相近,提示将ELISA法用于大肠癌普查筛检具有一定的应用前景。由于大肠癌筛检主要是在无症状高危人群中进行,工作量大。作为癌筛检试验必须尽可能简单,取材方便,敏感性高,为此我们对血清和粪液检测方法进行比较,结果表明粪液检测对大肠癌的敏感性不比血清学差,对于早期癌的检出率比血清还高。究其原因,我们认为血清学检测可能受到下列诸多因素的影响:]结直肠肿瘤相关抗原进入血循环后,经门静脉入肝脏,被分解代谢,因而少量抗原在血液中不易被检出。单抗所识别的抗原均为癌相关抗原而非特异性抗原,这些抗原可出现在不同器官癌组织,甚至正常组织中,在消化系统中见之更多,如CEA,CA-125,CA19-9等[7]。它们分泌入血液后,使正常人血清中含量增高,作为判定的阈值增高,检测的敏感性下降。血清中存在其他干扰因素,如机体自身产生的抗原抗体复合物可干扰检测系统中抗原抗体的结合。大肠癌相关抗原为膜表面抗原,受肠内容物摩擦易分泌脱落进入肠腔,因此粪便中肿瘤相关抗原检出率较高。另外,粪便检测取材方便,受试者乐于接受,可望在大肠癌高危人群普查中作为筛选指标。本研究还显示对大肠癌和癌前病变腺瘤,两种检测方法均有一定的意义,并且不典型增生的分级程度与抗原检出的阳性率有显著相关。该结论与已有的单克隆抗体对早期大肠癌和癌前病变的免疫组化研究所得结论一致。腺瘤伴有不典型增生常具有癌变的高危性,一般轻度不典型增生癌变可能性较小,重度不典型增生则有1/3病例有癌浸润,上皮异型性越高,其癌变率越高。大肠癌普查的目的之一就是发现早期癌和癌前期病变并及早进行治疗,诚然,ELISA法用于大规模人群普查受到仪器、时间、费用的限制难以实施,但抗人结肠癌单克隆抗体SC3A和SC6作为特异性的MAb对结直肠癌及癌前病变的早期诊断的确有相当高的价值。
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    4 参考文献1 刘民培,马世英,邹燕玲,等. 一组识别人大肠癌相关抗原MAbs的特性及反应 性. 中华肿瘤杂志,1992;14(2):91-93

    2 Ball SS, Guaranta V, Shadravan F, et al. An ELISA for detection of DNA-bound carcinogen using a

    monoclonal antibody to N-acetoxy-2-acetylaminofluorene-modified DNA.

    J Immunol Methods,1987;98(2):195-200

    3 Knaap W. Elsevier-North Holand Biomedica Press, 1979:203-206
, 百拇医药
    4 樊代明,牟震先,张学庸,等. 结肠癌单克隆MG3. 5. 7. 10的制备及其相应抗原免疫组化定位研究.

    单克隆抗体通讯,1986;2(3):19-23

    5 袁枚,刘成贵,李力,等. 抗结肠癌单克隆抗体CL-3,CL-4血清学诊断的应用. 中国肛肠病杂志,1988;8(4):3-6

    6 袁枚,费丽华,张小平,等. 用单克隆抗体检测患者粪便中癌相关抗原诊断大肠癌的价值. 中华外科杂志,1990;28(8):497-500

    7 Hanisch FG, Uhlenbruck G, Dienst C, et al. Ca 125 and Ca 19-9: two cancer-associated sialylsaccharide

    antigens on a mucus glycoprotein from human milk. Eur J Biochem, 1985;149(2):323-330, 百拇医药