淋巴细胞转化试验对肝炎后肝硬变的临床价值
河北医科大学第二医院内科 河北省石家庄市 050000
冯志杰，男，1963-07-17生，河北省晋州市人，汉族.1984年河北医科大学医学系毕业，主治医师，硕士，发表论文19篇，参篇著作3部
项目负责人:石家庄市和平西路203号
Tel:0311-7046975
收稿日期:1995-12-10
Clinical value of lymphocyte transformation test in patients with post_hepatitic cirrhosis
Zhi-Jie Feng, Xi-Ling Ren, Ran-Ming Niu and Xi-Xian Yao
, http://www.100md.com
Department of Internal Medicine, Second Affiliated Hospital, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China
Abstract
AIM To study the clinical value of lymphocyte transformation test in patients with post_hepatitic cirrhosis.
METHODS Stimulative index (SI) of lymphocyte transformation test was measured with 3H_TdR incorporation technique in 48 patients with post_hepatitic cirrhosis and 22 healthy controls.
, 百拇医药
RESULTS The SI of lymphocyte transformation was significantl y reduced (18.09±13.01) compaired with that in controls (34.85±21.71，P<0.01). The decrease of the SI was closely related to the impaired degree of liver function.
CONCLUSION There are clear cellular immune abnormalties in post_hepatitic cirrhosis, and the examination would be useful for estimating the severity of liver damage and hepatocellular compensation.
, http://www.100md.com
Subject headings Liver cirrhosis/immunology;Hepatitis/p athology;Lymphocyte transformation
Feng ZJ, Ren XL, Niu RM,Yao XX.Clinical value of lymphocyte transformationtest in patients with post_hepatitic cirrhosis.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997；5(2)：88-89
摘要
目的 探讨淋巴细胞转化试验在肝炎后肝硬变患者的临床应用价值。
, 百拇医药
方法 以植物血凝素为有丝分裂原，应用3氚胸腺嘧啶核苷 掺入技术，测定了肝炎后肝硬变患者48例和健康对照者22例外周血淋巴细胞转化能力.
结果 肝炎后肝硬变患者淋巴细胞转化能力较对照组明显下降(18.09±13.01比34.85±21.71，P<0.01).根据Child_Pugh分级、不同病程时的变化以及与凝血酶原活动度的相关性分析，可见肝脏损害越严重，淋巴细胞转化能力越低.
结论 肝炎后肝硬变患者存在细胞免疫功能的缺陷.其测定对了解肝脏的损害程度和储备能力有一定意义.
主题词 肝硬化/免疫学;肝炎/病理学;淋巴细胞转化
冯志杰,任锡玲,牛然明,姚希贤.淋巴细胞转化试验对肝炎后肝硬变的临床价值.新消化病学杂志,1997；5(2)：88-89
, http://www.100md.com
在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染中，肝损害的严重程度可能与细胞免疫应答反应的敏感性有关[1]，细胞免疫应答能力可通过淋巴细胞转化试验加以衡量.在HBsAg阳性的慢性肝脏疾病患者的淋巴细胞转化能力是有缺陷的[2]，而在肝炎后肝硬变(post_hepatitic cirrhosis, PHC)患者淋巴细胞转化能力如何，未见报道.作者应用3氚_ 胸腺嘧啶核苷(3H_TdR)掺入法来测定PHC外周血淋巴细胞对植物血凝素(PHA)刺激下的转化能力，来探讨PHC的细胞免疫状态及其临床价值.
1 对象和方法
1.1 对象 住院的PHC患者48例，均有明确的肝炎病史和/或HBsAg持续阳性1年以上，有肝硬变的临床、X线、B超和实验室表现，部分病例经肝活检证实.男34例，女14例，年龄21岁～68岁，平均48.1岁.临床病程在5年以内者28例，5年～10年7例，10年以上13例，平均3.8年.Child_Pugh A级17例，B级18例，C级13例.血清HBsAg阳性35例，其中HBsAg，HBeAg和抗_HBc均阳性(三阳)18例，HBsAg阴性13例.所有患者6个月内未曾应用糖皮质激素和其它免疫制剂.对照组为22例献血员或健康家属，男16例，女6例，年龄24岁～60岁，平均45.1岁.与PHC组无统计学差异(P>0.05).
, http://www.100md.com
1.2 方法 清晨空腹抽取受检者静脉血6ml～8ml，肝素抗凝(20U/ml)，低速离心后将细胞成份加等量的Hanks液稀释，缓慢加入至含淋巴细胞分离液的离心管中，梯度离心(1800r/min，15min)，抽取单个核细胞层，用Hanks液洗涤2次，RPMI640培养液洗 涤1次，然后将淋巴细胞浓度调至1×106/ml，淋巴细胞成活率>95%.将调好的淋巴细胞悬 液01ml加入经紫外线消毒的48孔培养板中，再加入PHA，使其终浓度为20μg/ml，总 体积为0.2ml，作为实验孔.另设不加PHA的淋巴细胞悬液作为对照.实验及对照均设三孔. 放于37，5% CO2培养箱中培养48h，加3H_TdR 18.5kBq/孔，继续培养24h 后，收集于玻璃纤维滤膜上，经用生理盐水、5%三氯醋酸和无水乙醇处理后，80烤箱烤干 ，在液闪仪上测定每孔每分钟的cpm值，求其平均值.结果以刺激指数(SI)表示：SI=cpm(实 验孔)/cpm(对照孔). 统计学处理 各组均数间比较采用 t 检验，淋巴细胞转化指数与凝血酶原 活动度的联系采用直线相关分析.
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2 结果
PHC患者48例，淋巴细胞转化SI为18.09±13.01，而对照组为34.85±21.71，两组间有非常显著性差异(P<0.01).病程越长，SI越低(表1). Child_Pugh分级是反映肝功能代偿的指标，在C级时SI下降最明显，较A、B级均有显著差异(P<0.01)，A和B级间差异不明显(表2，P>0.05).35例HBsAg阳性的PHC患者较HBsAg阴性者SI略低，但无统计学差异.而其中的18例三阳患者较HBsAg阴性组有明显差异(表3，P<0.05).33例同时测定淋巴细胞转化试验和凝血酶原活动度，相关性分析显示两者呈正相关(r=0.3397,t=2.94,P<0.01).
表1 PHC患者病程对淋巴细胞转化的影响
, http://www.100md.com
aP<0.05，与5年以内组比较.
表2 Child_Pugh分级对淋巴细胞转化的影响
bP<0.01，与A，B级分别比较.
表3 乙肝病毒标志物(HBVM)对淋巴细胞转化的影响
aP<0.05，与HBsAg(-)组比较.
3 讨论
在我国慢性乙型肝炎是造成肝硬变的主要原因.近年研究认为，在HBV感染后可通过异常的自身免疫反应，如抗体依赖细胞的细胞毒反应损伤肝细胞，同时免疫活性细胞可释放可溶性物质，如细胞因子，影响胶原代谢，使胶原合成增多，引起肝纤维化.因而认为免疫异常，尤其是细胞免疫异常在PHC的发病机理中起重要作用.淋巴细胞转化试验是反映细胞免疫功能的良好指标，在慢性HBV感染时存在淋巴细胞免疫应答缺陷已通过有丝分裂原刺激下的淋巴细胞转化试验得到证实[2，3].作者以PHA作为刺激原测定了PHC患者外周血淋巴细胞转化能力，其结果较正常人明显降低，且与肝功能代偿程度有关，肝损害越重，则转化能力越低.临床上可通过淋巴细胞转化能力的测定，对判断病情，了解肝储备具有一定意义.肝脏是一个重要的免疫器官，在肝硬变时肝细胞的严重损害，可发生免疫调控障碍，加重免疫肝损害.在PHC患者淋巴细胞转化能力的异常，是原发性还是继发于肝损害，尚不清楚.Lai等[4]报道，肝硬变患者IL_2活性下降，IL_2和IL_2受体的特异结合是淋巴细胞增殖过程的先决步骤[5]，故IL_2活性低下可造成淋巴细胞转化能力下降.但Anastassakos等[2]通过外源性加入纯化IL_2后，并不能使异常的淋巴细胞增殖逆转.另外,Hanson在应用有丝分裂原刺激的同时，加入纯化HBsAg，表现出淋巴细胞转化的抑制.Pontissio认为HBsAg能直接感染单个核细胞而影响淋巴细胞转化.本结果也显示病毒复制明显时，淋巴细胞转化能力低下，提示PHC时病毒可能对淋巴细胞的增殖转化有直接抑制作用.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 Paronetto F. Cell_mediated immunity in liver disease. Hum Pathol,1986;17(2):168-178
2 Anastassakos CH, Alexander GJM, Wolstencroft RA, et al. Failure of exogenous interleukin_1
and interleukin_2 to correct decreased lymphocyte transformation in chronic hepatitis B virus carriers.
Clin Exp Immunol,1987;68(1):15-22
3 石琳，骆抗先.rIL_2对慢性HBV感染者淋巴细胞转化功能的影响.第一军医大学学报，1992；12(1)：17-20
4 Lai KN, Leung JCK, Tam JS, et al. T lymphocyte activation in chronichepatitis B virus infection:
interleukin_2 release and its receptorexpression. Am J Gastroenterol, 1989;84(12):1532-1537
5 Ress CR, Viltrout RH. The biology and clinical applications of IL_2. ImmunolToday, 1990;11(2):36-38, http://www.100md.com
冯志杰，男，1963-07-17生，河北省晋州市人，汉族.1984年河北医科大学医学系毕业，主治医师，硕士，发表论文19篇，参篇著作3部
项目负责人:石家庄市和平西路203号
Tel:0311-7046975
收稿日期:1995-12-10
Clinical value of lymphocyte transformation test in patients with post_hepatitic cirrhosis
Zhi-Jie Feng, Xi-Ling Ren, Ran-Ming Niu and Xi-Xian Yao
, http://www.100md.com
Department of Internal Medicine, Second Affiliated Hospital, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China
Abstract
AIM To study the clinical value of lymphocyte transformation test in patients with post_hepatitic cirrhosis.
METHODS Stimulative index (SI) of lymphocyte transformation test was measured with 3H_TdR incorporation technique in 48 patients with post_hepatitic cirrhosis and 22 healthy controls.
, 百拇医药
RESULTS The SI of lymphocyte transformation was significantl y reduced (18.09±13.01) compaired with that in controls (34.85±21.71，P<0.01). The decrease of the SI was closely related to the impaired degree of liver function.
CONCLUSION There are clear cellular immune abnormalties in post_hepatitic cirrhosis, and the examination would be useful for estimating the severity of liver damage and hepatocellular compensation.
, http://www.100md.com
Subject headings Liver cirrhosis/immunology;Hepatitis/p athology;Lymphocyte transformation
Feng ZJ, Ren XL, Niu RM,Yao XX.Clinical value of lymphocyte transformationtest in patients with post_hepatitic cirrhosis.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997；5(2)：88-89
摘要
目的 探讨淋巴细胞转化试验在肝炎后肝硬变患者的临床应用价值。
, 百拇医药
方法 以植物血凝素为有丝分裂原，应用3氚胸腺嘧啶核苷 掺入技术，测定了肝炎后肝硬变患者48例和健康对照者22例外周血淋巴细胞转化能力.
结果 肝炎后肝硬变患者淋巴细胞转化能力较对照组明显下降(18.09±13.01比34.85±21.71，P<0.01).根据Child_Pugh分级、不同病程时的变化以及与凝血酶原活动度的相关性分析，可见肝脏损害越严重，淋巴细胞转化能力越低.
结论 肝炎后肝硬变患者存在细胞免疫功能的缺陷.其测定对了解肝脏的损害程度和储备能力有一定意义.
主题词 肝硬化/免疫学;肝炎/病理学;淋巴细胞转化
冯志杰,任锡玲,牛然明,姚希贤.淋巴细胞转化试验对肝炎后肝硬变的临床价值.新消化病学杂志,1997；5(2)：88-89
, http://www.100md.com
在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染中，肝损害的严重程度可能与细胞免疫应答反应的敏感性有关[1]，细胞免疫应答能力可通过淋巴细胞转化试验加以衡量.在HBsAg阳性的慢性肝脏疾病患者的淋巴细胞转化能力是有缺陷的[2]，而在肝炎后肝硬变(post_hepatitic cirrhosis, PHC)患者淋巴细胞转化能力如何，未见报道.作者应用3氚_ 胸腺嘧啶核苷(3H_TdR)掺入法来测定PHC外周血淋巴细胞对植物血凝素(PHA)刺激下的转化能力，来探讨PHC的细胞免疫状态及其临床价值.
1 对象和方法
1.1 对象 住院的PHC患者48例，均有明确的肝炎病史和/或HBsAg持续阳性1年以上，有肝硬变的临床、X线、B超和实验室表现，部分病例经肝活检证实.男34例，女14例，年龄21岁～68岁，平均48.1岁.临床病程在5年以内者28例，5年～10年7例，10年以上13例，平均3.8年.Child_Pugh A级17例，B级18例，C级13例.血清HBsAg阳性35例，其中HBsAg，HBeAg和抗_HBc均阳性(三阳)18例，HBsAg阴性13例.所有患者6个月内未曾应用糖皮质激素和其它免疫制剂.对照组为22例献血员或健康家属，男16例，女6例，年龄24岁～60岁，平均45.1岁.与PHC组无统计学差异(P>0.05).
, http://www.100md.com
1.2 方法 清晨空腹抽取受检者静脉血6ml～8ml，肝素抗凝(20U/ml)，低速离心后将细胞成份加等量的Hanks液稀释，缓慢加入至含淋巴细胞分离液的离心管中，梯度离心(1800r/min，15min)，抽取单个核细胞层，用Hanks液洗涤2次，RPMI640培养液洗 涤1次，然后将淋巴细胞浓度调至1×106/ml，淋巴细胞成活率>95%.将调好的淋巴细胞悬 液01ml加入经紫外线消毒的48孔培养板中，再加入PHA，使其终浓度为20μg/ml，总 体积为0.2ml，作为实验孔.另设不加PHA的淋巴细胞悬液作为对照.实验及对照均设三孔. 放于37，5% CO2培养箱中培养48h，加3H_TdR 18.5kBq/孔，继续培养24h 后，收集于玻璃纤维滤膜上，经用生理盐水、5%三氯醋酸和无水乙醇处理后，80烤箱烤干 ，在液闪仪上测定每孔每分钟的cpm值，求其平均值.结果以刺激指数(SI)表示：SI=cpm(实 验孔)/cpm(对照孔). 统计学处理 各组均数间比较采用 t 检验，淋巴细胞转化指数与凝血酶原 活动度的联系采用直线相关分析.
, http://www.100md.com
2 结果
PHC患者48例，淋巴细胞转化SI为18.09±13.01，而对照组为34.85±21.71，两组间有非常显著性差异(P<0.01).病程越长，SI越低(表1). Child_Pugh分级是反映肝功能代偿的指标，在C级时SI下降最明显，较A、B级均有显著差异(P<0.01)，A和B级间差异不明显(表2，P>0.05).35例HBsAg阳性的PHC患者较HBsAg阴性者SI略低，但无统计学差异.而其中的18例三阳患者较HBsAg阴性组有明显差异(表3，P<0.05).33例同时测定淋巴细胞转化试验和凝血酶原活动度，相关性分析显示两者呈正相关(r=0.3397,t=2.94,P<0.01).
表1 PHC患者病程对淋巴细胞转化的影响
| 病程 | n | 刺激指数(SI) |
| 5年以内 | 28 | 20.75±14.95 |
| 5_10年 | 7 | 15.01±11.21a |
| 10年以上 | 13 | 12.91±6.15a |
, http://www.100md.com
aP<0.05，与5年以内组比较.
表2 Child_Pugh分级对淋巴细胞转化的影响
| Child_Pugh分级 | n | 刺激指数(SI) |
| A | 17 | 21.86±16.74 |
| B | 18 | 19.90±11.09 |
| C | 13 | 10.65±5.42b |
bP<0.01，与A，B级分别比较.
表3 乙肝病毒标志物(HBVM)对淋巴细胞转化的影响
| HBVM | n | 刺激指数(SI) |
| HBsAg(+) | 35 | 17.72±13.65 |
| HBsAg(+) , 百拇医药 HBeAg(+) 抗_HBc(+) | 18 | 13.21±7.61a |
| HBsAg(-) | 13 | 23.10±16.40 |
aP<0.05，与HBsAg(-)组比较.
3 讨论
在我国慢性乙型肝炎是造成肝硬变的主要原因.近年研究认为，在HBV感染后可通过异常的自身免疫反应，如抗体依赖细胞的细胞毒反应损伤肝细胞，同时免疫活性细胞可释放可溶性物质，如细胞因子，影响胶原代谢，使胶原合成增多，引起肝纤维化.因而认为免疫异常，尤其是细胞免疫异常在PHC的发病机理中起重要作用.淋巴细胞转化试验是反映细胞免疫功能的良好指标，在慢性HBV感染时存在淋巴细胞免疫应答缺陷已通过有丝分裂原刺激下的淋巴细胞转化试验得到证实[2，3].作者以PHA作为刺激原测定了PHC患者外周血淋巴细胞转化能力，其结果较正常人明显降低，且与肝功能代偿程度有关，肝损害越重，则转化能力越低.临床上可通过淋巴细胞转化能力的测定，对判断病情，了解肝储备具有一定意义.肝脏是一个重要的免疫器官，在肝硬变时肝细胞的严重损害，可发生免疫调控障碍，加重免疫肝损害.在PHC患者淋巴细胞转化能力的异常，是原发性还是继发于肝损害，尚不清楚.Lai等[4]报道，肝硬变患者IL_2活性下降，IL_2和IL_2受体的特异结合是淋巴细胞增殖过程的先决步骤[5]，故IL_2活性低下可造成淋巴细胞转化能力下降.但Anastassakos等[2]通过外源性加入纯化IL_2后，并不能使异常的淋巴细胞增殖逆转.另外,Hanson在应用有丝分裂原刺激的同时，加入纯化HBsAg，表现出淋巴细胞转化的抑制.Pontissio认为HBsAg能直接感染单个核细胞而影响淋巴细胞转化.本结果也显示病毒复制明显时，淋巴细胞转化能力低下，提示PHC时病毒可能对淋巴细胞的增殖转化有直接抑制作用.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 Paronetto F. Cell_mediated immunity in liver disease. Hum Pathol,1986;17(2):168-178
2 Anastassakos CH, Alexander GJM, Wolstencroft RA, et al. Failure of exogenous interleukin_1
and interleukin_2 to correct decreased lymphocyte transformation in chronic hepatitis B virus carriers.
Clin Exp Immunol,1987;68(1):15-22
3 石琳，骆抗先.rIL_2对慢性HBV感染者淋巴细胞转化功能的影响.第一军医大学学报，1992；12(1)：17-20
4 Lai KN, Leung JCK, Tam JS, et al. T lymphocyte activation in chronichepatitis B virus infection:
interleukin_2 release and its receptorexpression. Am J Gastroenterol, 1989;84(12):1532-1537
5 Ress CR, Viltrout RH. The biology and clinical applications of IL_2. ImmunolToday, 1990;11(2):36-38, http://www.100md.com