胃幽门螺杆菌分子生物学的 检测
广东省深圳市人民医院 1消化内科 2分子生物技术中心 518001
项目负责人 刘健波,广东省深圳市人民医院消化内科 518001收搞日期 1996-07-13 接收日期 1996-09-10
Subject headings Gastritis/microbiology Stomach ulcer/microbiology Duodenal ulcer/microbiology
主题词 胃炎/微生物学 胃溃疡/微生物学 十二指肠溃疡/微生物学
刘健波, 张业祥, 詹群珊, 曾真, 刘健, 许银屏, 蒋英 胃幽门螺杆菌分子生物学的 检测. 新消化病学杂志, 1997;5(4):244
, 百拇医药
胃幽门螺杆菌(Hp)是一种被认为与慢性活动性胃炎和消化性溃疡(PU)发病有关的细菌.自1983年Marshall和Warren从人体胃粘膜中分离出Hp后，引起了国内外学者的重视并进行了深入的研究，Hp的检测方法也不断的创新和改进.本文旨在探讨聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)技术在Hp检测中的应用及其临床意义.
1 对象和方法
1.1 对象 本组患者共82例，其中男50例，女32例；年龄18岁～76岁，平均42岁.全部病例经内镜诊断和活检，活检部位均在胃窦部.每例取2块胃粘膜组织，一块送病理活检并查Hp；另一块用300uL缓冲液浸没用于PCR检测Hp.
1.2 方法 病理检查系用美蓝染色后显微镜下观察Hp，PCR检测则选用一军大南方医院赠送的标准菌株，首先提取胃粘膜Hp-DNA，之后选用Hp 16S rRNA基因片段互补的引物[1]，设计扩增片603bp.用紫外检测仪观察结果，样品出现的桔红色带与阳性对照扩增带处于同一位置，可判定标本为Hp阳性，否则为阴性.
, 百拇医药
2 结果82例慢性浅表性胃炎(CGS)、胃溃疡(GU)和十二指肠溃疡(DU)患者胃粘膜标本中， 无论是不同疾病还是总的比较，应用PCR检测法其Hp阳性率均明显高于病理染色镜检法，两者之间的差异均有显著性意义(表1).此外，CGS及PU患者应用三联疗法治疗后，其胃粘膜Hp的PCR检测阳性率亦明显高于病理染色镜检法(P<0.01).8例CGS及6例PU患者治疗前两种方法检测Hp均为阳性，经过临床治疗，患者炎症消退、溃疡愈合但PCR检测Hp为阳性，而病理染色镜检为阴性.
表1 不同方法检测Hp结果比较
, 百拇医药
bP<0.01，vs PCR检测.
3 讨论目前用于Hp诊断的方法很多，主要有快速尿素酶试验、Warthin_Starry 银染色以及细菌培养等.以上方法的共同不足是敏感性较低.尤其是经过治疗后疾病形态学上明显好转或治愈的患者，这些方法很难准确确定其胃粘膜Hp是否已根除.而PCR技术是直接检测Hp的基因片段[1，2]，这种方法大大提高了检测Hp的敏感性.本文82例患者胃粘膜Hp检测，PCR的阳性率显著高于病理染色镜检，这表明PCR在敏感性方面明显优于病理染色镜检.尤其是其中8例CGS和6例PU患者Hp在临床治疗前两种方法均为阳性，但经治疗患者炎症消退，溃疡愈合病理染色镜检Hp为阴性时，PCR检测Hp却均为阳性，这进一步说明了PCR技术用于检测胃粘膜Hp较现有的其它Hp检测方法具有极为敏感的特点.实际上，PCR检查Hp灵敏度高达10fg，约10个Hp即可用PCR技术检出.如同其敏感性极高一样，PCR技术在检测Hp时亦具有较其它方法更高的特异性.这主要是因为PCR技术检测的是极具特异性的Hp基因片段.因此，由于交叉反应而造成的假阳性率是极为罕见的.污染可能是造成假阳性的主要原因.为了避免假阳性，实验中应注意吸头、标本处理、扩增用的eppndorf管和手套一次性使用，并注意分区操作.此外，目前临床治疗Hp效果的判断方法仍是有待探讨的问题之一.快速尿素酶试验，Warthin_Starry银染色以及细菌培养均不能判断Hp是否已被根除.本文8例CGS和6例PU患者胃粘膜Hp在治疗前PCR检测和病理染色镜检均为阳性，但经治疗后PCR检测均为阳性而病理染色镜检却为阴性，这就提示CGS和PU在治疗后胃粘膜残存Hp数量较少，一般方法难以检测出Hp时，用PCR技术可以检出.因此，PCR检测法的应用为确定某些消化系疾病治疗后Hp是否已根除提供了较敏感的手段，也为Hp相关疾病的治疗提供了较为可靠的依据.近年来，还有学者应用PCR技术检测出人胃粘膜以外的Hp，如唾液、胃液[3-4]等，而用常规方法在这些体液中是不能检出Hp的.因此，有希望用这些标本作为Hp感染的无创性诊断方法.总之，PCR检测Hp具有敏感性高、特异性强、操作简便等优点，尤其是用于治疗后判断Hp是否已根除有十分重要的临床意义.
, 百拇医药
4 参考文献1 Hoshina S, Kahn SM, Jiang W, et al. Direct detection and amplification of Helicobacter pylori ribosomal 16S genesegments
from gastric endoscopic biopsies. Diagn Microbiol Infect Dis, 1990;13(4):473-477
2 宋敏，李进，李仕英，等.用聚合酶链反应扩增16SrRNA基因检测幽门螺旋杆菌.中华医学检验杂志，1993；16(5)：268-270
3 Hammar M, Tyszkiewicz T, Wadstrom T, et al. Rapid detection of Helicobacter pylori in gastricbiopsy materiai by polymerase
chain reaction. J Clin Microbiol, 1992;30(1):54-57
4 Valentine JL, Arthur RR, Mobley HL, et al. Detection of Helicobacter pylori by using the polymerase chain reaction.
J Clin Microbiol, 1991;29(5):689-692, http://www.100md.com(刘健波 张业祥 詹群珊 曾真 刘健 许银屏 蒋英)
项目负责人 刘健波,广东省深圳市人民医院消化内科 518001收搞日期 1996-07-13 接收日期 1996-09-10
Subject headings Gastritis/microbiology Stomach ulcer/microbiology Duodenal ulcer/microbiology
主题词 胃炎/微生物学 胃溃疡/微生物学 十二指肠溃疡/微生物学
刘健波, 张业祥, 詹群珊, 曾真, 刘健, 许银屏, 蒋英 胃幽门螺杆菌分子生物学的 检测. 新消化病学杂志, 1997;5(4):244
, 百拇医药
胃幽门螺杆菌(Hp)是一种被认为与慢性活动性胃炎和消化性溃疡(PU)发病有关的细菌.自1983年Marshall和Warren从人体胃粘膜中分离出Hp后，引起了国内外学者的重视并进行了深入的研究，Hp的检测方法也不断的创新和改进.本文旨在探讨聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)技术在Hp检测中的应用及其临床意义.
1 对象和方法
1.1 对象 本组患者共82例，其中男50例，女32例；年龄18岁～76岁，平均42岁.全部病例经内镜诊断和活检，活检部位均在胃窦部.每例取2块胃粘膜组织，一块送病理活检并查Hp；另一块用300uL缓冲液浸没用于PCR检测Hp.
1.2 方法 病理检查系用美蓝染色后显微镜下观察Hp，PCR检测则选用一军大南方医院赠送的标准菌株，首先提取胃粘膜Hp-DNA，之后选用Hp 16S rRNA基因片段互补的引物[1]，设计扩增片603bp.用紫外检测仪观察结果，样品出现的桔红色带与阳性对照扩增带处于同一位置，可判定标本为Hp阳性，否则为阴性.
, 百拇医药
2 结果82例慢性浅表性胃炎(CGS)、胃溃疡(GU)和十二指肠溃疡(DU)患者胃粘膜标本中， 无论是不同疾病还是总的比较，应用PCR检测法其Hp阳性率均明显高于病理染色镜检法，两者之间的差异均有显著性意义(表1).此外，CGS及PU患者应用三联疗法治疗后，其胃粘膜Hp的PCR检测阳性率亦明显高于病理染色镜检法(P<0.01).8例CGS及6例PU患者治疗前两种方法检测Hp均为阳性，经过临床治疗，患者炎症消退、溃疡愈合但PCR检测Hp为阳性，而病理染色镜检为阴性.
表1 不同方法检测Hp结果比较
| PCR(n) | 病理染色镜检(n) | |||||
| + | - | 阳性率(%) | + | - | 阳性率(%) | |
| CGS | 31 | 12 | 72.1 | 16 | 27 | 37.2b |
| GU | 9 | 2 | 81.9 | 7 | 4 | 63.6b |
| DU | 18 | 10 | 64.3 | 15 | 13 | 53.9b |
| 合计 | 58 | 24 | 70.7 | 38 | 44 | 46.2b |
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bP<0.01，vs PCR检测.
3 讨论目前用于Hp诊断的方法很多，主要有快速尿素酶试验、Warthin_Starry 银染色以及细菌培养等.以上方法的共同不足是敏感性较低.尤其是经过治疗后疾病形态学上明显好转或治愈的患者，这些方法很难准确确定其胃粘膜Hp是否已根除.而PCR技术是直接检测Hp的基因片段[1，2]，这种方法大大提高了检测Hp的敏感性.本文82例患者胃粘膜Hp检测，PCR的阳性率显著高于病理染色镜检，这表明PCR在敏感性方面明显优于病理染色镜检.尤其是其中8例CGS和6例PU患者Hp在临床治疗前两种方法均为阳性，但经治疗患者炎症消退，溃疡愈合病理染色镜检Hp为阴性时，PCR检测Hp却均为阳性，这进一步说明了PCR技术用于检测胃粘膜Hp较现有的其它Hp检测方法具有极为敏感的特点.实际上，PCR检查Hp灵敏度高达10fg，约10个Hp即可用PCR技术检出.如同其敏感性极高一样，PCR技术在检测Hp时亦具有较其它方法更高的特异性.这主要是因为PCR技术检测的是极具特异性的Hp基因片段.因此，由于交叉反应而造成的假阳性率是极为罕见的.污染可能是造成假阳性的主要原因.为了避免假阳性，实验中应注意吸头、标本处理、扩增用的eppndorf管和手套一次性使用，并注意分区操作.此外，目前临床治疗Hp效果的判断方法仍是有待探讨的问题之一.快速尿素酶试验，Warthin_Starry银染色以及细菌培养均不能判断Hp是否已被根除.本文8例CGS和6例PU患者胃粘膜Hp在治疗前PCR检测和病理染色镜检均为阳性，但经治疗后PCR检测均为阳性而病理染色镜检却为阴性，这就提示CGS和PU在治疗后胃粘膜残存Hp数量较少，一般方法难以检测出Hp时，用PCR技术可以检出.因此，PCR检测法的应用为确定某些消化系疾病治疗后Hp是否已根除提供了较敏感的手段，也为Hp相关疾病的治疗提供了较为可靠的依据.近年来，还有学者应用PCR技术检测出人胃粘膜以外的Hp，如唾液、胃液[3-4]等，而用常规方法在这些体液中是不能检出Hp的.因此，有希望用这些标本作为Hp感染的无创性诊断方法.总之，PCR检测Hp具有敏感性高、特异性强、操作简便等优点，尤其是用于治疗后判断Hp是否已根除有十分重要的临床意义.
, 百拇医药
4 参考文献1 Hoshina S, Kahn SM, Jiang W, et al. Direct detection and amplification of Helicobacter pylori ribosomal 16S genesegments
from gastric endoscopic biopsies. Diagn Microbiol Infect Dis, 1990;13(4):473-477
2 宋敏，李进，李仕英，等.用聚合酶链反应扩增16SrRNA基因检测幽门螺旋杆菌.中华医学检验杂志，1993；16(5)：268-270
3 Hammar M, Tyszkiewicz T, Wadstrom T, et al. Rapid detection of Helicobacter pylori in gastricbiopsy materiai by polymerase
chain reaction. J Clin Microbiol, 1992;30(1):54-57
4 Valentine JL, Arthur RR, Mobley HL, et al. Detection of Helicobacter pylori by using the polymerase chain reaction.
J Clin Microbiol, 1991;29(5):689-692, http://www.100md.com(刘健波 张业祥 詹群珊 曾真 刘健 许银屏 蒋英)