人肝细胞癌和癌旁组织中性激素受体的改变
1济南军区总医院普外科 山东省济南市 250031
2青岛医学院附属医院普外科
贺青卿，男，1966-04-08生，山东省东明县人，汉族. 1994年毕业于青岛医学院，获医学硕士学位，普外科主治医师，发表论文10篇.
项目负责人 贺青卿,山东省济南市师范路98号.
Tel: 0531-2187681-66221.
收搞日期 1996-09-05 接受日期 1996-12-28
Alterations of estrogen and androgen receptors in hepatocellular carc inoma and its surrounding tissues
, 百拇医药
Qing-Qing He, Jin-Yong Yang, Li-Qun Wu and Zi-Jie Cui
Chinese PLA Hospital of Jinan Command Area, Jinan 250031, China
Abstract
AIM To study the genuine role of sex hormone receptors in th e development and growth of HCC in humans.
METHODS Androgen receptors (AR) and estrogen receptors (ER) wer e consecutively assayed for hepatocellular carcinoma (HCC) and the surrounding n oncancerous liver tissues. Specimens were obtained surgically from 21 men. AR an d ER were detected in 7 other male patients with cirrhosis. The method of the d extrancoated charcoal (DCC) was used.
, 百拇医药
RESULTS Fifteen of 21 cases (71.4%) with HCC had AR (range 6.29fmol/mg～100fmol/mg cpr). ER existed in 6 (28.6%) tumors (range 3.0fmol/mg～61.43fmol/mg cpr). Among 7 cases of cirrhotic liver tissues, ER and AR were detected in 1 and 2, respectively. The AR titer was higher in the HCC than that either in the surrounding tissues (P<0.01) or in 7 cirrhotic livers (P<0.05). Serum alpha- fetoprotein (AFP) level, HBV markers or histopathologic types of HCC had no correlations with the presence or absence of AR or ER and their titers.
, http://www.100md.com
CONCLUSION The results suggested that the expression of androg en receptor should be augmented in association with malignant transformation of hepatocytes and some of the HCC are androgendependent which respond to antia ndrogen agents.
Subject headings Liver neoplasms; Carcinoma, hepatocellular; Receptors, androgen/analysis; Receptors, estrogen/analysis
He QQ, Yang JY, Wu LQ,Cui ZJ.Alterations of estrogen and androgen receptors in hepatocellular carcinoma and its surrounding tissues.
, 百拇医药
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(7):442-443
摘 要目的 探讨肝细胞癌(HCC)患者癌组织与癌旁组织中雄、雌激素受体的变化.
方法 用葡聚糖包裹活性炭吸附法检测21例HCC患者的癌组织和癌旁组织 中雄激素受体(AR)和雌激素受体(ER)，同时测量7例男性肝硬变患者肝组织中的AR和ER.
结果 癌组织中AR阳性率(71.4%)显著高于癌旁组织(31.3%)(P<0.01)及硬变肝组织(P<0.05)中的AR阳性率(28.6%)，而ER含量均无显著差异(P>0.05).
结论 AR表达的增加与肝细胞的癌变有关，部分HCC具有雄激素依赖性，为HCC可能的内分泌治疗提供分子生物学方面的理论依据.
, 百拇医药
主题词 肝肿瘤 癌，肝细胞 受体，雄激素/分析 受体，雌激素/分析
贺青卿,杨金镛,吴力群,崔自介.人肝细胞癌和癌旁组织中性激素受体的改变.新消化病学杂志,1997;5(7):442-443
应用DCC法检测HCC组织及癌旁组织中AR、ER，旨在对性激素受体与HCC的关系进行探讨.
1 材料和方法1.1 材料 取术前未接受化疗、放疗或内分泌治疗手术切除的新鲜HCC标本21例，癌旁肝组织16例及肝 硬变肝组织7例. 无内分泌系及其他肿瘤，标本均经病理确诊. 两组患者的年龄、肝功能分 级均无统计学差别. 标本离体后即取1g组织用冷盐水冲洗、滤纸吸干，液氮保存待测. 主要试剂与设备：3H-雌二醇、3H-双氢睾酮(均为上海原子能研究所产品) ，双氢睾酮、17-β-雌二醇、氟羟氢化泼尼松(TA)(Sigma)，葡聚糖T70(Pharmacia) 、低温超速离心机(Brinmann)，9800液体闪烁计数仪(Beckman).
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1.2 方法 将组织匀浆，浆液离心800g 20min，按上清液体积的1/10加入DCC液振荡离心105 000g 60 min，取上清液测胞浆受体含量及蛋白含量. 取胞浆0.15 ml加入5个不同浓度3H-雌二醇(20nmol/L～100nmol/L)，在相应的非特异管内加500倍未标记雌二醇，加缓冲液使总体积达到250μl. 取胞浆0.15ml，加入5个不同浓度3H-双氢睾酮(0.4nmol/L～4.0nmol/L)和TA液(0.4μmol/L～2.0μmol/L)，在相应的非特异结合管内加入500倍未标记双氢睾酮，加缓冲液将体积达 到400μl. 之后试管置4℃冰箱中孵育16h，加入总体积1/4的DCC液振荡，离心800g 15min，上清液置闪烁杯中计数. 依据所测结果绘制饱和曲线图及Scatchard图. 求出结合量及各受体的解离常数(KD). 用考马斯亮兰法测定胞浆蛋白含量，用放射免疫法测两组患者血清中睾酮(testosterone， TT)和 雌二醇(estradiol, E2)含量. 本组ER、AR阳性判断标准：取≥3fmol/mg胞浆蛋白.统计学处理 实验所得数据(x-±s)显著性检验用秩和检验、t 检验、相关性分析用相关回归分析、等级相关分析，检验水准α=0.05.
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2 结果AR与ER在HCC组织及癌旁组织胞浆中阳性率分别为AR：71.4%(n=21)，31.3%(n=16 )；ER：28.6%(n=21)，31.3%(n=16). 配对秩和检验癌组织胞浆中AR含量(40.5 ±17.3fmol/mg胞浆蛋白)非常显著高于癌旁组织胞浆中的AR(11.68fmol/mg～37.54fmol/mg胞浆蛋白)(T=13.21，P<0.01)，而两者ER差异不显著(T=74.51，P>0.05). 癌组织胞浆中ER(3.0fmol/mg～61.43fmol/mg胞浆蛋白)和硬变肝组织胞浆中ER含量(3fmol/mg～8.93fmol/mg胞浆蛋白)的差异无显著性(μ=1.061，P>0.05). 而癌组织胞浆中AR含量显著高于硬变肝组织胞浆中AR的含量(10.27fmol/mg～34.9fmol/mg胞浆蛋白(μ=2.281,P<0.05)，癌旁硬变肝组织胞浆中AR，ER含量与肝硬变肝组织胞浆中AR，ER含量无差异(μ=1.21，1.59， P>0.05). 男性HCC患者血清中睾酮含量(377.27ng/dl±165.96ng/dl)非常显著低于正常男性(x=551ng/dl)(t=3.76，P<0.002)，而血清中雌二醇(412.95fmol/ml±233.55fmol/ml)则高于正常男性(183.5fmol/ml±55.1fmol/ml)(t=3.05，P<0.01). AR、ER含量和AFP水平、病理组织分型、HBV、年龄均无明显相关性(P>0.05).
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3 讨论DCC法是经典的较为稳定的受体定量分析技术. 本结果表明，HCC组织中有性激素的结合部位 ，性激素的特异结合部位具有饱和性、高亲和力和一定甾体特异结合等特点，具备了Bauliu所建议的鉴定受体所必须的基本条件. 在21例男性HCC组织中ER阳性率为28.6%，16例癌旁组织中ER阳性率为31.3%，两者组织中ER含量无显著差别(P>0.05)，Nagasue等[1]测定29例男性HCC组织中ER，癌组织和癌旁组织中ER含量差异不显著(P>0.05). 临床病理研究表明，ER的存在与否与肝肿瘤的病理学特征及生物学特征无关[2]. 本组21例男性HCC组织中AR阳性率为71.4%，癌旁组织中AR阳性率为31.3%(n=16)，两组织中AR含量显著差异. Nagasue等[3]测量19例HCC组织和癌旁组织中的AR，其阳性率分别为74%和63%，其含量有显著差异(P<0.01). 体外实验证明HCC细胞能主动摄取TT，其摄取量与AR的浓度呈正相关[4]，Nagkagama等[5]用cDNA-PCR技术在8例HCC的7例癌组织和8例癌旁组织中均测到了AR mRNA，表明AR在HCC的发 展过程中起重要作用. 正常人肝组织中能测到低浓度、高亲和力的AR，癌旁肝硬变组织和硬 变肝组织AR阳性率甚低，本结果提示肝硬变时有AR的丢失，一旦肝细胞恶变，AR可重新获得 . AR的表达随HCC的形成、发展而增加. 本资料表明血清AFP水平、HBV感染、病理学分型、年龄与AR、ER水平无明显相关性(P>0.05)，提示HCC组织中AR值与其他生物学指标无相关的相对独特的性质. 对HCC雄激素依赖性的判定是以癌组织中AR含量明显高于其相应癌旁肝组织为依据. 小肝癌在早期侵犯血管，推测TT通过AR的介导促进HCC的增长，增加HCC的侵袭力[6]. AR过多地结合了血中TT，因此使HCC患者血清中TT含量下降，表明部分HCC有雄激素依赖性. 对HCC术后患者随访，发现AR阳性患者复发率高于阴性患者(P<0.05，n=45)，而ER阳性、阴性HCC患者的复发率、存活率无差异(P>0. 05，n=66)[6]. 临床上可通过减少胞浆内AR或竞争性结合胞浆内的AR，使肝细 胞癌失去依赖激素的生长环境，从而达到抑制其生长速度和增殖能力的目的.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 Nagasue N, I to A, Yukaya H, et al. Estrogen receptors in HCC. Cancer,1986;57(1):87-91
2 Nagasue N, Kohno H, Yucc,et al. Clinicopathologic comparsions between estrogen receptor-positive and negative hepatocellular
carcinoma. Ann Surg, 1990;212(2):150-154
3 Nagasue N, I to A, Yukaya H, et al. Androgen receptors in hepatocellularcarcinoma and surrounding parenchyma.
, 百拇医药
Gastroenterology, 1985;89(3):643-647
4 Nagasue N, Yukaya H, Chang YC, et al. Active uptake of testosterone by androgen receptors of HCCs in humans.
Cancer, 1986;57(11):2162-2167
5 Nagkagama H, Gun Ji T, Ohnishi S, et al. Expression of androgen receptors mRNA in human HCCs and hepatoma cell lines.
Hepatology, 1991;14(1):99-102
6 Nagasue N, Chang YC, Hayashi T, et al. Androgen receptor in HCC as a prognostic factor after hepatic resection.
Ann Surg, 1989;209(4):424-427, http://www.100md.com
2青岛医学院附属医院普外科
贺青卿，男，1966-04-08生，山东省东明县人，汉族. 1994年毕业于青岛医学院，获医学硕士学位，普外科主治医师，发表论文10篇.
项目负责人 贺青卿,山东省济南市师范路98号.
Tel: 0531-2187681-66221.
收搞日期 1996-09-05 接受日期 1996-12-28
Alterations of estrogen and androgen receptors in hepatocellular carc inoma and its surrounding tissues
, 百拇医药
Qing-Qing He, Jin-Yong Yang, Li-Qun Wu and Zi-Jie Cui
Chinese PLA Hospital of Jinan Command Area, Jinan 250031, China
Abstract
AIM To study the genuine role of sex hormone receptors in th e development and growth of HCC in humans.
METHODS Androgen receptors (AR) and estrogen receptors (ER) wer e consecutively assayed for hepatocellular carcinoma (HCC) and the surrounding n oncancerous liver tissues. Specimens were obtained surgically from 21 men. AR an d ER were detected in 7 other male patients with cirrhosis. The method of the d extrancoated charcoal (DCC) was used.
, 百拇医药
RESULTS Fifteen of 21 cases (71.4%) with HCC had AR (range 6.29fmol/mg～100fmol/mg cpr). ER existed in 6 (28.6%) tumors (range 3.0fmol/mg～61.43fmol/mg cpr). Among 7 cases of cirrhotic liver tissues, ER and AR were detected in 1 and 2, respectively. The AR titer was higher in the HCC than that either in the surrounding tissues (P<0.01) or in 7 cirrhotic livers (P<0.05). Serum alpha- fetoprotein (AFP) level, HBV markers or histopathologic types of HCC had no correlations with the presence or absence of AR or ER and their titers.
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CONCLUSION The results suggested that the expression of androg en receptor should be augmented in association with malignant transformation of hepatocytes and some of the HCC are androgendependent which respond to antia ndrogen agents.
Subject headings Liver neoplasms; Carcinoma, hepatocellular; Receptors, androgen/analysis; Receptors, estrogen/analysis
He QQ, Yang JY, Wu LQ,Cui ZJ.Alterations of estrogen and androgen receptors in hepatocellular carcinoma and its surrounding tissues.
, 百拇医药
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(7):442-443
摘 要目的 探讨肝细胞癌(HCC)患者癌组织与癌旁组织中雄、雌激素受体的变化.
方法 用葡聚糖包裹活性炭吸附法检测21例HCC患者的癌组织和癌旁组织 中雄激素受体(AR)和雌激素受体(ER)，同时测量7例男性肝硬变患者肝组织中的AR和ER.
结果 癌组织中AR阳性率(71.4%)显著高于癌旁组织(31.3%)(P<0.01)及硬变肝组织(P<0.05)中的AR阳性率(28.6%)，而ER含量均无显著差异(P>0.05).
结论 AR表达的增加与肝细胞的癌变有关，部分HCC具有雄激素依赖性，为HCC可能的内分泌治疗提供分子生物学方面的理论依据.
, 百拇医药
主题词 肝肿瘤 癌，肝细胞 受体，雄激素/分析 受体，雌激素/分析
贺青卿,杨金镛,吴力群,崔自介.人肝细胞癌和癌旁组织中性激素受体的改变.新消化病学杂志,1997;5(7):442-443
应用DCC法检测HCC组织及癌旁组织中AR、ER，旨在对性激素受体与HCC的关系进行探讨.
1 材料和方法1.1 材料 取术前未接受化疗、放疗或内分泌治疗手术切除的新鲜HCC标本21例，癌旁肝组织16例及肝 硬变肝组织7例. 无内分泌系及其他肿瘤，标本均经病理确诊. 两组患者的年龄、肝功能分 级均无统计学差别. 标本离体后即取1g组织用冷盐水冲洗、滤纸吸干，液氮保存待测. 主要试剂与设备：3H-雌二醇、3H-双氢睾酮(均为上海原子能研究所产品) ，双氢睾酮、17-β-雌二醇、氟羟氢化泼尼松(TA)(Sigma)，葡聚糖T70(Pharmacia) 、低温超速离心机(Brinmann)，9800液体闪烁计数仪(Beckman).
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1.2 方法 将组织匀浆，浆液离心800g 20min，按上清液体积的1/10加入DCC液振荡离心105 000g 60 min，取上清液测胞浆受体含量及蛋白含量. 取胞浆0.15 ml加入5个不同浓度3H-雌二醇(20nmol/L～100nmol/L)，在相应的非特异管内加500倍未标记雌二醇，加缓冲液使总体积达到250μl. 取胞浆0.15ml，加入5个不同浓度3H-双氢睾酮(0.4nmol/L～4.0nmol/L)和TA液(0.4μmol/L～2.0μmol/L)，在相应的非特异结合管内加入500倍未标记双氢睾酮，加缓冲液将体积达 到400μl. 之后试管置4℃冰箱中孵育16h，加入总体积1/4的DCC液振荡，离心800g 15min，上清液置闪烁杯中计数. 依据所测结果绘制饱和曲线图及Scatchard图. 求出结合量及各受体的解离常数(KD). 用考马斯亮兰法测定胞浆蛋白含量，用放射免疫法测两组患者血清中睾酮(testosterone， TT)和 雌二醇(estradiol, E2)含量. 本组ER、AR阳性判断标准：取≥3fmol/mg胞浆蛋白.统计学处理 实验所得数据(x-±s)显著性检验用秩和检验、t 检验、相关性分析用相关回归分析、等级相关分析，检验水准α=0.05.
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2 结果AR与ER在HCC组织及癌旁组织胞浆中阳性率分别为AR：71.4%(n=21)，31.3%(n=16 )；ER：28.6%(n=21)，31.3%(n=16). 配对秩和检验癌组织胞浆中AR含量(40.5 ±17.3fmol/mg胞浆蛋白)非常显著高于癌旁组织胞浆中的AR(11.68fmol/mg～37.54fmol/mg胞浆蛋白)(T=13.21，P<0.01)，而两者ER差异不显著(T=74.51，P>0.05). 癌组织胞浆中ER(3.0fmol/mg～61.43fmol/mg胞浆蛋白)和硬变肝组织胞浆中ER含量(3fmol/mg～8.93fmol/mg胞浆蛋白)的差异无显著性(μ=1.061，P>0.05). 而癌组织胞浆中AR含量显著高于硬变肝组织胞浆中AR的含量(10.27fmol/mg～34.9fmol/mg胞浆蛋白(μ=2.281,P<0.05)，癌旁硬变肝组织胞浆中AR，ER含量与肝硬变肝组织胞浆中AR，ER含量无差异(μ=1.21，1.59， P>0.05). 男性HCC患者血清中睾酮含量(377.27ng/dl±165.96ng/dl)非常显著低于正常男性(x=551ng/dl)(t=3.76，P<0.002)，而血清中雌二醇(412.95fmol/ml±233.55fmol/ml)则高于正常男性(183.5fmol/ml±55.1fmol/ml)(t=3.05，P<0.01). AR、ER含量和AFP水平、病理组织分型、HBV、年龄均无明显相关性(P>0.05).
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3 讨论DCC法是经典的较为稳定的受体定量分析技术. 本结果表明，HCC组织中有性激素的结合部位 ，性激素的特异结合部位具有饱和性、高亲和力和一定甾体特异结合等特点，具备了Bauliu所建议的鉴定受体所必须的基本条件. 在21例男性HCC组织中ER阳性率为28.6%，16例癌旁组织中ER阳性率为31.3%，两者组织中ER含量无显著差别(P>0.05)，Nagasue等[1]测定29例男性HCC组织中ER，癌组织和癌旁组织中ER含量差异不显著(P>0.05). 临床病理研究表明，ER的存在与否与肝肿瘤的病理学特征及生物学特征无关[2]. 本组21例男性HCC组织中AR阳性率为71.4%，癌旁组织中AR阳性率为31.3%(n=16)，两组织中AR含量显著差异. Nagasue等[3]测量19例HCC组织和癌旁组织中的AR，其阳性率分别为74%和63%，其含量有显著差异(P<0.01). 体外实验证明HCC细胞能主动摄取TT，其摄取量与AR的浓度呈正相关[4]，Nagkagama等[5]用cDNA-PCR技术在8例HCC的7例癌组织和8例癌旁组织中均测到了AR mRNA，表明AR在HCC的发 展过程中起重要作用. 正常人肝组织中能测到低浓度、高亲和力的AR，癌旁肝硬变组织和硬 变肝组织AR阳性率甚低，本结果提示肝硬变时有AR的丢失，一旦肝细胞恶变，AR可重新获得 . AR的表达随HCC的形成、发展而增加. 本资料表明血清AFP水平、HBV感染、病理学分型、年龄与AR、ER水平无明显相关性(P>0.05)，提示HCC组织中AR值与其他生物学指标无相关的相对独特的性质. 对HCC雄激素依赖性的判定是以癌组织中AR含量明显高于其相应癌旁肝组织为依据. 小肝癌在早期侵犯血管，推测TT通过AR的介导促进HCC的增长，增加HCC的侵袭力[6]. AR过多地结合了血中TT，因此使HCC患者血清中TT含量下降，表明部分HCC有雄激素依赖性. 对HCC术后患者随访，发现AR阳性患者复发率高于阴性患者(P<0.05，n=45)，而ER阳性、阴性HCC患者的复发率、存活率无差异(P>0. 05，n=66)[6]. 临床上可通过减少胞浆内AR或竞争性结合胞浆内的AR，使肝细 胞癌失去依赖激素的生长环境，从而达到抑制其生长速度和增殖能力的目的.
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4 参考文献1 Nagasue N, I to A, Yukaya H, et al. Estrogen receptors in HCC. Cancer,1986;57(1):87-91
2 Nagasue N, Kohno H, Yucc,et al. Clinicopathologic comparsions between estrogen receptor-positive and negative hepatocellular
carcinoma. Ann Surg, 1990;212(2):150-154
3 Nagasue N, I to A, Yukaya H, et al. Androgen receptors in hepatocellularcarcinoma and surrounding parenchyma.
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Gastroenterology, 1985;89(3):643-647
4 Nagasue N, Yukaya H, Chang YC, et al. Active uptake of testosterone by androgen receptors of HCCs in humans.
Cancer, 1986;57(11):2162-2167
5 Nagkagama H, Gun Ji T, Ohnishi S, et al. Expression of androgen receptors mRNA in human HCCs and hepatoma cell lines.
Hepatology, 1991;14(1):99-102
6 Nagasue N, Chang YC, Hayashi T, et al. Androgen receptor in HCC as a prognostic factor after hepatic resection.
Ann Surg, 1989;209(4):424-427, http://www.100md.com