叶酸对ENNG致犬胃癌的干预作用
1蚌埠医学院附属医院消化 内科 安徽省蚌埠市 233004
2上海市消化疾病研究所 上海市 200001
燕善军，男，1963-03-15生，安徽省长丰县人，汉族. 1992年上海第二医科大学消化专业硕士研究生毕业，主治医师、讲师.
项目负责人 燕善军, 安徽省蚌埠市长淮路16号.
Tel: 0552-3064590-2223.收搞日期 1996-08-31 接受日期 1996-10-11
Intervention of folate on ENNGinduced canine gastric cancer
, 百拇医药
Shan-Jun Yan1， Shun-Shi Zhu2, Rong-Rong Li2, Wei-Qi Gu2, Yun-Biao Hu2, Yao Shi2, Shao-JI Jiang2 and Shu-ong Xiao21Department of Digestive Diseases, Affiliated Hospital, Bengbu Medical College, Bengbu 233004, Anhui Province, China
2Shanghai Institute of Digestive Diseases, Shanghai 200001
Abstract
, http://www.100md.com
AIM To study the intervention of folate on gastric precancerous lesion and cancer growth induced by N-ethyl-N′-nitroN-nitrosoguanidine (ENNG).
METHODS Six dogs fed with ENNG were divided into folate-group and non-folate group. In folate group, the dogs were fed with folic acid (20mg/d), and the gastric mucosal changes and cancer growth were observed under gastroscopy bimonthly, while histological examination of gastric mucosa was performed and compared with nonfolate group.
, http://www.100md.com
RESULTS The gastric mucosal inflammation, atrophy and dysplasia in folate-group were significantly milder than that in nonfolate group, and gastric cancer was developed in one dog in folate group, but in all three dogs i n the non-folate group.
CONCLUSION The folate may protect gastric mucosa against infla mmation, atrophy, dysplasia and gastric cancer.
Subject headings Folic acid/pharmacology; Stomach neoplasms/prevention & control
, 百拇医药
Yan SJ， Zhu SS, Li RR,Gu WQ, Hu YB, Shi Y, Jiang SJ,Xiao SD.Intervention of folate on ENNG-induced canine gastric cancer.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(8):489-490
摘 要目的 研究叶酸对乙基硝基亚硝基胍(ENNG)致犬胃癌前病变和胃癌生长的干预作用.
方法 猎犬6条分为叶酸组与非叶酸组，用ENNG诱发胃癌，叶酸组给予叶酸(20mg/d)，每两月用胃镜观察胃粘膜改变和胃癌生长情况，并做病理检查.
结果 叶酸组胃粘膜炎症、萎缩、不典型增生明显比非叶酸组轻(P<0.05,P<0.01)，其中1条犬发生胃癌；非叶酸组3条犬均发生胃癌.
, 百拇医药
结论 叶酸可以通过减轻胃粘膜炎症，萎缩和不典型增生，从而延缓或中止癌的发生.
主题词 叶酸/药理学 胃肿瘤/预防和控制
燕善军,朱舜时,李蓉蓉,顾伟齐,胡运彪,施尧,江绍基,萧树东.叶酸对ENNG致犬胃癌的干预作用.新消化病学杂志, 1997;5(8):489-490
研究表明[1]，叶酸可以改善或逆转宫颈上皮不典型增生，吸烟者支气管鳞状上皮 化生. 溃疡性结肠炎患者补充叶酸可以预防或改善肠粘膜不典型增生而减少结肠癌的发生. 因此，叶酸可以通过减轻或逆转上皮细胞癌前病变，以达到预防癌症的作用.本实验用乙基 硝基亚硝基胍(ENNG)诱发胃癌[2]，同时给予叶酸以观察叶酸对ENNG致胃癌前病变 和胃癌发生的干预作用.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 实验共用小猎犬6条，体重7kg～12kg，犬龄平均19个月，均为雄性. 每条犬每日给予ENNG 75mg共8个月. 随机确定3条犬为叶酸干预组(简称叶酸组)，在给予ENNG的同时给予叶酸；另3条犬作为非叶酸组，只给ENNG，不给叶酸. 叶酸片剂磨成粉末状，与颗粒饲料一起浸入ENNG溶液，分早、晚两次吞入，每次10mg，与ENNG同时开始，连续服药，直至实验结束. ENNG和叶酸使用前后，每2个月做一次内镜检查，并做胃粘膜病理检查以及胃粘膜细胞、血清叶酸测定.
1.2 方法 叶酸测定采用放免法(试剂盒为美国OPC产品). 血清标本处理和胃粘膜细胞测定液的制备方法均由上海市消化疾病研究所生化室建立. 胃粘膜病理评分：正常-0，±-0.5，+-1，++-2,+++-3，取同一次胃窦部不同活检点病理记分的平均值为评分结果，根据炎症，萎缩，不典型增生的出现和程度记分，得出每条犬每次胃粘膜炎症、萎缩、不典型增生病变的病理积分，并以此作为统计处理的参数. 肿瘤生长体积计算公式[3]：肿瘤近似体积(V)=3/4πAB2，A为肿瘤长径，B为肿瘤短径. 统计学处理 以t检验分析两组叶酸浓度、炎症、萎缩和不典型增生病理积分的差异.
, 百拇医药
2 结果2.1 犬体内叶酸变化 实验结果表明：叶酸组血清叶酸含量明显高于非叶酸组，差异具有非常显著性意义(表1，P<0.01)，而胃粘膜细胞内叶酸含量差异无显著性.
2.2 癌的发生和生长情况 实验持续15个月，结果叶酸组仅1条犬出现印戒细胞癌，癌肿出现后近7个月内生长缓慢，一直停留于0.2cm～0.5cm大小，呈单癌灶生长；非叶酸组3条犬均发生胃癌，虽然发生 癌肿较晚，但肿瘤生长快速，多癌灶生长明显，最大癌肿为2cm×3cm，其中1条犬于实 验结束后不久即死亡，解剖发现皮革胃及腹水.
2.3 炎症、萎缩及不典型增生 将同一次每组3条犬胃粘膜出现的炎症、萎缩及不典型增生病理得分分别相加得表2. 统计分析发现两组胃粘膜炎症和不典型增生病变具有非常显著性差异(P<0.01)，萎缩性病变也有显著性差异(P<0.05). 因而提示叶酸组胃粘膜炎症、萎缩及不典型增生明显比非叶酸组轻.
, 百拇医药
表1 实验犬血清及胃粘膜细胞内叶酸含量 (n=3, x)
, 百拇医药
表2 实验犬胃粘膜炎症萎缩及不典型增生得分
, 百拇医药
3 讨论人类染色体上存在叶酸敏感点，在缺乏叶酸的介质中可见染色体发生断裂；组织叶酸低可以 减慢细胞分裂，进而增加染色体对癌起动的敏感性；叶酸依赖性DNA甲基化的改变可以影响 基因的调节[4]. 这一影响最早表现在细胞分裂快速的组织如骨髓和胃肠道上皮细 胞. 叶酸缺乏时，临床上出现巨幼红细胞贫血就是一个例证. Heimburger等[5]指出巨细胞改变与不典型增生的一致性，并推测细胞或局部组织叶酸缺乏与某些癌症发生危 险性有关，叶酸和B12可以改善或逆转支气管上皮鳞状化生. 1989年Lashner等[6]发现溃疡性结肠炎患者血清和血细胞内叶酸水平通常偏低，这是由于应用柳氮磺胺吡啶竞争性抑制叶酸的吸收，临床上，溃疡性 结肠炎患者发生肠粘膜不典型增生和结肠癌危险性很高，而补充叶酸可以减少62%不典型增 生或癌的发生. 我们用叶酸和ENNG同时喂养犬，以观察叶酸对ENNG致癌是否有抑制作用. 结 果叶酸组仅1条犬发生胃癌，而非叶酸组3条犬均发生胃癌. 由于犬数较少，很难从癌发生的时间和例数进行统计学处理，从肿瘤生长的速度和大小来看，叶酸 组1条犬虽出现肿瘤较早，但在以后7个月内未见肿瘤明显生长，而非叶酸组3条犬均发生胃癌，尤其有2条犬，虽发生肿瘤较晚，但肿瘤增长迅速，多癌灶生长明显. 这一现象或许可 以提示叶酸对肿瘤生长有抑制作用. 另外，两组犬胃粘膜在炎症、萎缩、不典型增生方面表现出明显差异，其中不典型增生差异非常显著(P<0.01)，也就是说，在ENNG致癌过程中，叶酸组胃粘膜病变，尤其是不典型增生比非叶酸组明显减轻. 这一结果表明叶酸可以通过减轻胃粘膜炎症、萎缩、不典型增生，保护胃粘膜，从而延缓或中止癌的发生.
, 百拇医药
4 参考文献1 Rosenberg IH, Mason JB. Folate dysplasia, and cancer. Gastroenterology, 1989;97(8):502-503
2 江绍基，萧树东，胡运彪，等. 实验性犬胃癌模型建立的研究. 肿瘤，1985；5(4)：145-147
3 高进，薛克勋，李宝贵，等. 人食管癌细胞株(Eca 109)在裸小鼠体内生长和侵袭特性的观察. 中华肿瘤杂志，1984；6(5)：331-333
4 Freudenheim JL, Graham S, Marshall JR, et al. Folate intake and carcinogenesis of the colon and rectum. Int J Epidemiol,1991;20(2):368-374
, 百拇医药
5 Heimburger DC, Krumdieck CL, Alexander B, et al. Localized folic acid deficieney and bronchial metaplasia in smokers: hypothesis
and preliminary report. Nutr Rep Int, 1987;3(1):54-60
6 Lashner BA, Heidenreich PA, Su GL, et al. The effect of folate supplementation on the incidence of dysplasia and cancer in chronic
ulcerative colitis: a case_control study. Gastroenterology, 1989;97(4):255-259, http://www.100md.com
2上海市消化疾病研究所 上海市 200001
燕善军，男，1963-03-15生，安徽省长丰县人，汉族. 1992年上海第二医科大学消化专业硕士研究生毕业，主治医师、讲师.
项目负责人 燕善军, 安徽省蚌埠市长淮路16号.
Tel: 0552-3064590-2223.收搞日期 1996-08-31 接受日期 1996-10-11
Intervention of folate on ENNGinduced canine gastric cancer
, 百拇医药
Shan-Jun Yan1， Shun-Shi Zhu2, Rong-Rong Li2, Wei-Qi Gu2, Yun-Biao Hu2, Yao Shi2, Shao-JI Jiang2 and Shu-ong Xiao21Department of Digestive Diseases, Affiliated Hospital, Bengbu Medical College, Bengbu 233004, Anhui Province, China
2Shanghai Institute of Digestive Diseases, Shanghai 200001
Abstract
, http://www.100md.com
AIM To study the intervention of folate on gastric precancerous lesion and cancer growth induced by N-ethyl-N′-nitroN-nitrosoguanidine (ENNG).
METHODS Six dogs fed with ENNG were divided into folate-group and non-folate group. In folate group, the dogs were fed with folic acid (20mg/d), and the gastric mucosal changes and cancer growth were observed under gastroscopy bimonthly, while histological examination of gastric mucosa was performed and compared with nonfolate group.
, http://www.100md.com
RESULTS The gastric mucosal inflammation, atrophy and dysplasia in folate-group were significantly milder than that in nonfolate group, and gastric cancer was developed in one dog in folate group, but in all three dogs i n the non-folate group.
CONCLUSION The folate may protect gastric mucosa against infla mmation, atrophy, dysplasia and gastric cancer.
Subject headings Folic acid/pharmacology; Stomach neoplasms/prevention & control
, 百拇医药
Yan SJ， Zhu SS, Li RR,Gu WQ, Hu YB, Shi Y, Jiang SJ,Xiao SD.Intervention of folate on ENNG-induced canine gastric cancer.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(8):489-490
摘 要目的 研究叶酸对乙基硝基亚硝基胍(ENNG)致犬胃癌前病变和胃癌生长的干预作用.
方法 猎犬6条分为叶酸组与非叶酸组，用ENNG诱发胃癌，叶酸组给予叶酸(20mg/d)，每两月用胃镜观察胃粘膜改变和胃癌生长情况，并做病理检查.
结果 叶酸组胃粘膜炎症、萎缩、不典型增生明显比非叶酸组轻(P<0.05,P<0.01)，其中1条犬发生胃癌；非叶酸组3条犬均发生胃癌.
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结论 叶酸可以通过减轻胃粘膜炎症，萎缩和不典型增生，从而延缓或中止癌的发生.
主题词 叶酸/药理学 胃肿瘤/预防和控制
燕善军,朱舜时,李蓉蓉,顾伟齐,胡运彪,施尧,江绍基,萧树东.叶酸对ENNG致犬胃癌的干预作用.新消化病学杂志, 1997;5(8):489-490
研究表明[1]，叶酸可以改善或逆转宫颈上皮不典型增生，吸烟者支气管鳞状上皮 化生. 溃疡性结肠炎患者补充叶酸可以预防或改善肠粘膜不典型增生而减少结肠癌的发生. 因此，叶酸可以通过减轻或逆转上皮细胞癌前病变，以达到预防癌症的作用.本实验用乙基 硝基亚硝基胍(ENNG)诱发胃癌[2]，同时给予叶酸以观察叶酸对ENNG致胃癌前病变 和胃癌发生的干预作用.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 实验共用小猎犬6条，体重7kg～12kg，犬龄平均19个月，均为雄性. 每条犬每日给予ENNG 75mg共8个月. 随机确定3条犬为叶酸干预组(简称叶酸组)，在给予ENNG的同时给予叶酸；另3条犬作为非叶酸组，只给ENNG，不给叶酸. 叶酸片剂磨成粉末状，与颗粒饲料一起浸入ENNG溶液，分早、晚两次吞入，每次10mg，与ENNG同时开始，连续服药，直至实验结束. ENNG和叶酸使用前后，每2个月做一次内镜检查，并做胃粘膜病理检查以及胃粘膜细胞、血清叶酸测定.
1.2 方法 叶酸测定采用放免法(试剂盒为美国OPC产品). 血清标本处理和胃粘膜细胞测定液的制备方法均由上海市消化疾病研究所生化室建立. 胃粘膜病理评分：正常-0，±-0.5，+-1，++-2,+++-3，取同一次胃窦部不同活检点病理记分的平均值为评分结果，根据炎症，萎缩，不典型增生的出现和程度记分，得出每条犬每次胃粘膜炎症、萎缩、不典型增生病变的病理积分，并以此作为统计处理的参数. 肿瘤生长体积计算公式[3]：肿瘤近似体积(V)=3/4πAB2，A为肿瘤长径，B为肿瘤短径. 统计学处理 以t检验分析两组叶酸浓度、炎症、萎缩和不典型增生病理积分的差异.
, 百拇医药
2 结果2.1 犬体内叶酸变化 实验结果表明：叶酸组血清叶酸含量明显高于非叶酸组，差异具有非常显著性意义(表1，P<0.01)，而胃粘膜细胞内叶酸含量差异无显著性.
2.2 癌的发生和生长情况 实验持续15个月，结果叶酸组仅1条犬出现印戒细胞癌，癌肿出现后近7个月内生长缓慢，一直停留于0.2cm～0.5cm大小，呈单癌灶生长；非叶酸组3条犬均发生胃癌，虽然发生 癌肿较晚，但肿瘤生长快速，多癌灶生长明显，最大癌肿为2cm×3cm，其中1条犬于实 验结束后不久即死亡，解剖发现皮革胃及腹水.
2.3 炎症、萎缩及不典型增生 将同一次每组3条犬胃粘膜出现的炎症、萎缩及不典型增生病理得分分别相加得表2. 统计分析发现两组胃粘膜炎症和不典型增生病变具有非常显著性差异(P<0.01)，萎缩性病变也有显著性差异(P<0.05). 因而提示叶酸组胃粘膜炎症、萎缩及不典型增生明显比非叶酸组轻.
, 百拇医药
表1 实验犬血清及胃粘膜细胞内叶酸含量 (n=3, x)
| 时间(月) | 叶酸组 | 非叶酸组 | ||
| 血清(μg/L) | 细胞(fg/细胞) | 血清(μg/L) | 细胞(fg/细胞) | |
| 0 | 15.90 | 0.99 | 7.30 | 1.71 |
| 2 | 21.13 | 1.20 | 14.56 | 0.34 |
| 4 | 18.58 | 1.87 | 7.45 | 0.66 |
| 6 | 20.35 | 1.38 | 7.91 | 0.43 |
| 8 | 16.60 | 4.30 | 10.45 | 1.24 |
| 10 | 20.25 | 0.14 | 6.06 | 0.08 |
| 12 | 20.55 | 0.41 | 5.93 | 0.20 |
| 14 | 17.12 | 0.94 | 8.59 | 0.73 |
, 百拇医药
表2 实验犬胃粘膜炎症萎缩及不典型增生得分
| 时间(月) | 叶酸组 | 非叶酸组 | ||||
| 炎症 | 萎缩 | 不典型增生 | 炎症 | 萎缩 | 不典型增生 | |
| 0 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 |
| 2 | 3.00 | 3.00 | 0.00 | 2.75 | 4.75 | 0.00 |
| 4 | 2.25 | 2.50 | 0.50 | 2.83 | 2.50 | 0.00 |
| 6 | 2.50 | 3.50 | 1.00 | 2.75 | 3.37 | 0.50 |
| 8 | 3.05 | 2.50 | 2.75 | 3.58 | 3.75 | 2.25 |
| 10 | 3.50 | 2.50 | 2.00 | 4.30 | 3.58 | 3.50 |
| 12 | 3.50 | 4.00 | 2.75 | 4.80 | 6.50 | 4.75 |
| 14 | 3.50 | 3.00 | 1.00 | 4.25 | 5.75 | 4.50 |
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3 讨论人类染色体上存在叶酸敏感点，在缺乏叶酸的介质中可见染色体发生断裂；组织叶酸低可以 减慢细胞分裂，进而增加染色体对癌起动的敏感性；叶酸依赖性DNA甲基化的改变可以影响 基因的调节[4]. 这一影响最早表现在细胞分裂快速的组织如骨髓和胃肠道上皮细 胞. 叶酸缺乏时，临床上出现巨幼红细胞贫血就是一个例证. Heimburger等[5]指出巨细胞改变与不典型增生的一致性，并推测细胞或局部组织叶酸缺乏与某些癌症发生危 险性有关，叶酸和B12可以改善或逆转支气管上皮鳞状化生. 1989年Lashner等[6]发现溃疡性结肠炎患者血清和血细胞内叶酸水平通常偏低，这是由于应用柳氮磺胺吡啶竞争性抑制叶酸的吸收，临床上，溃疡性 结肠炎患者发生肠粘膜不典型增生和结肠癌危险性很高，而补充叶酸可以减少62%不典型增 生或癌的发生. 我们用叶酸和ENNG同时喂养犬，以观察叶酸对ENNG致癌是否有抑制作用. 结 果叶酸组仅1条犬发生胃癌，而非叶酸组3条犬均发生胃癌. 由于犬数较少，很难从癌发生的时间和例数进行统计学处理，从肿瘤生长的速度和大小来看，叶酸 组1条犬虽出现肿瘤较早，但在以后7个月内未见肿瘤明显生长，而非叶酸组3条犬均发生胃癌，尤其有2条犬，虽发生肿瘤较晚，但肿瘤增长迅速，多癌灶生长明显. 这一现象或许可 以提示叶酸对肿瘤生长有抑制作用. 另外，两组犬胃粘膜在炎症、萎缩、不典型增生方面表现出明显差异，其中不典型增生差异非常显著(P<0.01)，也就是说，在ENNG致癌过程中，叶酸组胃粘膜病变，尤其是不典型增生比非叶酸组明显减轻. 这一结果表明叶酸可以通过减轻胃粘膜炎症、萎缩、不典型增生，保护胃粘膜，从而延缓或中止癌的发生.
, 百拇医药
4 参考文献1 Rosenberg IH, Mason JB. Folate dysplasia, and cancer. Gastroenterology, 1989;97(8):502-503
2 江绍基，萧树东，胡运彪，等. 实验性犬胃癌模型建立的研究. 肿瘤，1985；5(4)：145-147
3 高进，薛克勋，李宝贵，等. 人食管癌细胞株(Eca 109)在裸小鼠体内生长和侵袭特性的观察. 中华肿瘤杂志，1984；6(5)：331-333
4 Freudenheim JL, Graham S, Marshall JR, et al. Folate intake and carcinogenesis of the colon and rectum. Int J Epidemiol,1991;20(2):368-374
, 百拇医药
5 Heimburger DC, Krumdieck CL, Alexander B, et al. Localized folic acid deficieney and bronchial metaplasia in smokers: hypothesis
and preliminary report. Nutr Rep Int, 1987;3(1):54-60
6 Lashner BA, Heidenreich PA, Su GL, et al. The effect of folate supplementation on the incidence of dysplasia and cancer in chronic
ulcerative colitis: a case_control study. Gastroenterology, 1989;97(4):255-259, http://www.100md.com