大黄蒽醌抑制幽门螺杆菌的实验研究
解放军222医院 1药剂科 2检验科 吉林省吉林市 132011
苟奎斌，男，1954-01-18生，吉林省敦化市人，汉族. 1978 年第二军医大学药学系毕业，药剂科主任、副主任药师，沈阳军区药学专业委员会委员，中国药学会吉林市分会理事，主要从事药剂学研究，发表论文60篇，《临床药物动力学参数 及用药指南》著作主编，获军队科技进步二等奖1项，三等奖1项，四等奖2项.
项目负责人 苟奎斌, 吉林市越山 路18号.
Tel: 0432-2011131-261.收搞日期 1996-05-20 接受日期 1996-07-12
Inhibition of anthraquinone in Rheum officinale on Helicobacter pylori
, 百拇医药
Kui_Bin Gou, Li_Hua Sun, Wei_Ning Lou and Chuan_Gang Leng
Department of Pharmacy, Chinese PLA 222 Hospital, Jilin 132011, Jilin Province, China
Abstract
AIM To study the inhibiting effect of four extracts of anthraquinone in Rheum officinale on Helicobacter pylori.
METHODS Four compounds of anthraquinone in Rheum officinale were extracted with gradient alkaline extration. Their inhibiting effects in Helicobacter pylori were studied by the test tube and the paper diffusion dilution method.
, 百拇医药
RESULTS Dilitability and Helicobacter pylori inhibited annulus of extracts anthraquinone in Rheum officinale were emodin 1:252 (30mm), rhein 1:168 (28mm), chrysophanol 1：128 (24mm) and aloe-emodin 1：118 (23mm), respectively. Control sampleRheum officinale extracts was 1：58 (15mm).
CONCLUSION Four compounds of anthraquinone in Rheum officinale can inhibit the growth of Helicobacter pylori.
Subject headings Anthraquinones/pharmacology; Rheum palma tum/pharmacology; Helicobacter pylori/drug effects
, http://www.100md.com
Gou KB, Sun LH, Lou WN,Leng CG.Inhibition of anthraquinone in Rheum officinale on Helicobacter pylori.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(8):495-496
摘 要目的 用4种大黄蒽醌化合物抑制幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)的实验研究
方法 用梯度酸碱提取法，将大黄中的4种蒽醌类化合物提取，然后用试管稀释法和纸片扩散法，分别观察它们对Hp的抑菌效果.
结果 4种大黄蒽醌，它们稀释度及抑制Hp环分别为∶大黄素(emodin)为1∶252(30mm,强)、大黄酸(rhein)为1∶168(28mm,强)、大黄酚(chrysophanol)为1∶128(24mm，强)、芦荟大黄素(aloeemodin)为1∶118(23mm，强)，对照品大黄提取物(Rheum officinale extracts)仅为1∶58(15mm，中).
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结论 4种大黄蒽醌化合物均具有较强的抑制Hp的生长作用.
主题词 蒽醌类/药理学 大黄/药理学 螺杆菌，幽门/药物作用
苟奎斌,孙丽华,娄卫宁,冷传刚.大黄蒽醌抑制幽门螺杆菌的实验研究.新消化 病学杂志,1997;5(8):495-496
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是消化性溃疡、慢性胃炎、功能性消化不良以及胃癌的病因之一[1]. 作者着重研究大黄中所含蒽醌类抑制Hp的生长作用. 实验证明：大黄中4种蒽醌类均具有较强的抑制Hp活性，介绍如下.
, 百拇医药
1 材料和方法1.1 材料 采用梯度碱液提取法，将不同酸度的游离蒽醌从苯液中依次分离而得. 将大黄饮片(50g) 压碎，置提取器内，加苯和20%H2SO4混合液(5∶1)，将其回流水解3～4次，然后将苯液合并，用水洗去H2SO4后再用NaHCO3液(5%)提取数次，把该提取液加稀HCl酸化，即析出沉淀(Ⅰ)；用NaHCO3提取后的苯液加5%Na2CO3液提取数次，该提取液再加稀HCl酸化，即析出沉淀(Ⅱ)；将Na2CO3提取后的苯液加5%KOH提取数次，水层加稀HCl酸化，得橙色沉淀析出物，过滤，水洗，干燥后溶于适量 CHCl3，静置2d～3d，得橙黄色析出物(Ⅲ)；过滤 滤液再以0.5% KOH液提取数次，提取物加稀HCl酸化，析出红色沉淀物(Ⅳ)；剩余的氯仿层以5% KOH提取数次，提取液加稀HCl酸化，析出黄色沉淀，滤过，水洗，然后拌在少量CaHPO3中，把它加在预先装好的CaHPO3柱上，用苯展开，继续用苯洗脱. 第一条黄色带回收苯后，用石油醚提取，再进行CaHPO3层析，石油醚洗脱，下面的黄色部分，蒸干石油醚以后用甲醇重结晶，得结晶物(Ⅴ). 根据教材提供的分析方法[2]，对以上成分作薄层层析分析. 做法是将样品分别点于硅胶G板上(10cm×10cm)，用苯-乙酸乙酯-醋酸(75∶24∶1)展开，取出晾干，喷10%KOH甲醇液，观察斑点的位置，并计算Rf值. 实验结果是：提取物(Ⅰ)的Rf值是0.24，为大黄酸；(Ⅱ)的Rf值是0.52，为大黄素；(Ⅲ)和(Ⅳ)的Rf值均是0.36，它 们为同一产物，是芦荟大黄素；(Ⅴ)的Rf值是0.76，为大黄酚. 4种大黄蒽醌化合物分别加水配制成浓度为0.1mg/ml的供试液.阳性对照为大黄提取物，加水配制成浓度为1mg/ml.
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1.2 方法 Hp从几位Imin UT阳性患者的胃粘膜活检接种在含有7%羊血的Skirrow琼脂选择性平板上，置 5% O2，10% CO2，85% N2的环境下，35℃培养3d～5d，选取白色或灰白色菌落， 作革兰染色观察，见革兰阴性海鸥状、马蹄状、豆状弯曲细菌. 经氧化酶、过氧化氢酶 、尿素酶等生化试验(阳性及强阳性)及需O2条件试验(不生长)，即鉴定为Hp， 冰箱内4℃保存备用. 用前制成布氏肉汤混悬液(每ml含Hp 10亿～15亿). Hp 抑菌试验采用试管稀释法和纸片扩散法两种. 试管稀释法为：每个供试液及阳性对照液各取 10支试管，分别加入各试管1ml药液及1ml含Hp的布氏肉汤混悬液，用不含Hp的布氏肉汤按倍比稀释，置于5%O2，10% CO2，85%N2条件下，35℃培养72h，凡药物高 稀释管中无细菌生长者，该管的药物浓度即为此药物对Hp的最低抑菌浓度. 纸片扩散法是将100片直径为6mm的中华牌滤纸用药液浸泡，然后取出贴在已接种含Hp的布氏肉汤混悬液1ml的Skirrow羊血平板上，同试管稀释法相同条件，35℃恒温孵育72h，测定抑菌环，根据抑菌环的大小判定敏感度.
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2 结果稀释度及抑菌环分别为：大黄素1∶252(30min,强)，大黄酸1∶168(28mm，强)，大黄酚1∶128(24mm，强)，芦荟大黄素1∶118(23mm，强).对照组大黄提取物为1∶58(15mm，中).
3 讨论大黄中含有的4种蒽醌化合物，除大黄酚为止血成分有止血作用外，其余均具有抗菌作用 [2]. 经本实验证实，这4种大黄蒽醌皆对Hp有较强的抑制作用. 说明无抗菌作用 的某些成分(如大黄中的大黄酚)对Hp的生长亦可有抑制作用. 此外，我们对抗菌中药黄连、黄芩等所试验证实，它们有较强的抑制Hp生长作用，但其中的主要抗菌成分黄连素，黄芩甙皆无抑制Hp活性，因此具有抗菌作用的有效成分并非均具有抑制Hp的生长作用.大黄是我国常用中药，具有泻下、抗菌、抗肿瘤及止血等效用[3]. 古今中外医药学者对它有精深的研究，而用大黄蒽醌类抑制Hp的实验研究未见报告. 本实验的结果为进一步开发大黄的药用价值提供资料.
4 参考文献1 曹忠铭，刘宽宇，尹志良，等. 亚甲蓝染色检查幽门螺杆菌. 新消化病学杂志，1996；4(3)：140-141
2 第二军医大学药学系. 中草药成分化学，1977：167-173
3 吴贻谷. 中国医学百科全书中药学. 第1版. 第2次印刷. 上海：上海科学技术出版社， 1992：292-293, 百拇医药
苟奎斌，男，1954-01-18生，吉林省敦化市人，汉族. 1978 年第二军医大学药学系毕业，药剂科主任、副主任药师，沈阳军区药学专业委员会委员，中国药学会吉林市分会理事，主要从事药剂学研究，发表论文60篇，《临床药物动力学参数 及用药指南》著作主编，获军队科技进步二等奖1项，三等奖1项，四等奖2项.
项目负责人 苟奎斌, 吉林市越山 路18号.
Tel: 0432-2011131-261.收搞日期 1996-05-20 接受日期 1996-07-12
Inhibition of anthraquinone in Rheum officinale on Helicobacter pylori
, 百拇医药
Kui_Bin Gou, Li_Hua Sun, Wei_Ning Lou and Chuan_Gang Leng
Department of Pharmacy, Chinese PLA 222 Hospital, Jilin 132011, Jilin Province, China
Abstract
AIM To study the inhibiting effect of four extracts of anthraquinone in Rheum officinale on Helicobacter pylori.
METHODS Four compounds of anthraquinone in Rheum officinale were extracted with gradient alkaline extration. Their inhibiting effects in Helicobacter pylori were studied by the test tube and the paper diffusion dilution method.
, 百拇医药
RESULTS Dilitability and Helicobacter pylori inhibited annulus of extracts anthraquinone in Rheum officinale were emodin 1:252 (30mm), rhein 1:168 (28mm), chrysophanol 1：128 (24mm) and aloe-emodin 1：118 (23mm), respectively. Control sampleRheum officinale extracts was 1：58 (15mm).
CONCLUSION Four compounds of anthraquinone in Rheum officinale can inhibit the growth of Helicobacter pylori.
Subject headings Anthraquinones/pharmacology; Rheum palma tum/pharmacology; Helicobacter pylori/drug effects
, http://www.100md.com
Gou KB, Sun LH, Lou WN,Leng CG.Inhibition of anthraquinone in Rheum officinale on Helicobacter pylori.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(8):495-496
摘 要目的 用4种大黄蒽醌化合物抑制幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)的实验研究
方法 用梯度酸碱提取法，将大黄中的4种蒽醌类化合物提取，然后用试管稀释法和纸片扩散法，分别观察它们对Hp的抑菌效果.
结果 4种大黄蒽醌，它们稀释度及抑制Hp环分别为∶大黄素(emodin)为1∶252(30mm,强)、大黄酸(rhein)为1∶168(28mm,强)、大黄酚(chrysophanol)为1∶128(24mm，强)、芦荟大黄素(aloeemodin)为1∶118(23mm，强)，对照品大黄提取物(Rheum officinale extracts)仅为1∶58(15mm，中).
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结论 4种大黄蒽醌化合物均具有较强的抑制Hp的生长作用.
主题词 蒽醌类/药理学 大黄/药理学 螺杆菌，幽门/药物作用
苟奎斌,孙丽华,娄卫宁,冷传刚.大黄蒽醌抑制幽门螺杆菌的实验研究.新消化 病学杂志,1997;5(8):495-496
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是消化性溃疡、慢性胃炎、功能性消化不良以及胃癌的病因之一[1]. 作者着重研究大黄中所含蒽醌类抑制Hp的生长作用. 实验证明：大黄中4种蒽醌类均具有较强的抑制Hp活性，介绍如下.
, 百拇医药
1 材料和方法1.1 材料 采用梯度碱液提取法，将不同酸度的游离蒽醌从苯液中依次分离而得. 将大黄饮片(50g) 压碎，置提取器内，加苯和20%H2SO4混合液(5∶1)，将其回流水解3～4次，然后将苯液合并，用水洗去H2SO4后再用NaHCO3液(5%)提取数次，把该提取液加稀HCl酸化，即析出沉淀(Ⅰ)；用NaHCO3提取后的苯液加5%Na2CO3液提取数次，该提取液再加稀HCl酸化，即析出沉淀(Ⅱ)；将Na2CO3提取后的苯液加5%KOH提取数次，水层加稀HCl酸化，得橙色沉淀析出物，过滤，水洗，干燥后溶于适量 CHCl3，静置2d～3d，得橙黄色析出物(Ⅲ)；过滤 滤液再以0.5% KOH液提取数次，提取物加稀HCl酸化，析出红色沉淀物(Ⅳ)；剩余的氯仿层以5% KOH提取数次，提取液加稀HCl酸化，析出黄色沉淀，滤过，水洗，然后拌在少量CaHPO3中，把它加在预先装好的CaHPO3柱上，用苯展开，继续用苯洗脱. 第一条黄色带回收苯后，用石油醚提取，再进行CaHPO3层析，石油醚洗脱，下面的黄色部分，蒸干石油醚以后用甲醇重结晶，得结晶物(Ⅴ). 根据教材提供的分析方法[2]，对以上成分作薄层层析分析. 做法是将样品分别点于硅胶G板上(10cm×10cm)，用苯-乙酸乙酯-醋酸(75∶24∶1)展开，取出晾干，喷10%KOH甲醇液，观察斑点的位置，并计算Rf值. 实验结果是：提取物(Ⅰ)的Rf值是0.24，为大黄酸；(Ⅱ)的Rf值是0.52，为大黄素；(Ⅲ)和(Ⅳ)的Rf值均是0.36，它 们为同一产物，是芦荟大黄素；(Ⅴ)的Rf值是0.76，为大黄酚. 4种大黄蒽醌化合物分别加水配制成浓度为0.1mg/ml的供试液.阳性对照为大黄提取物，加水配制成浓度为1mg/ml.
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1.2 方法 Hp从几位Imin UT阳性患者的胃粘膜活检接种在含有7%羊血的Skirrow琼脂选择性平板上，置 5% O2，10% CO2，85% N2的环境下，35℃培养3d～5d，选取白色或灰白色菌落， 作革兰染色观察，见革兰阴性海鸥状、马蹄状、豆状弯曲细菌. 经氧化酶、过氧化氢酶 、尿素酶等生化试验(阳性及强阳性)及需O2条件试验(不生长)，即鉴定为Hp， 冰箱内4℃保存备用. 用前制成布氏肉汤混悬液(每ml含Hp 10亿～15亿). Hp 抑菌试验采用试管稀释法和纸片扩散法两种. 试管稀释法为：每个供试液及阳性对照液各取 10支试管，分别加入各试管1ml药液及1ml含Hp的布氏肉汤混悬液，用不含Hp的布氏肉汤按倍比稀释，置于5%O2，10% CO2，85%N2条件下，35℃培养72h，凡药物高 稀释管中无细菌生长者，该管的药物浓度即为此药物对Hp的最低抑菌浓度. 纸片扩散法是将100片直径为6mm的中华牌滤纸用药液浸泡，然后取出贴在已接种含Hp的布氏肉汤混悬液1ml的Skirrow羊血平板上，同试管稀释法相同条件，35℃恒温孵育72h，测定抑菌环，根据抑菌环的大小判定敏感度.
, http://www.100md.com
2 结果稀释度及抑菌环分别为：大黄素1∶252(30min,强)，大黄酸1∶168(28mm，强)，大黄酚1∶128(24mm，强)，芦荟大黄素1∶118(23mm，强).对照组大黄提取物为1∶58(15mm，中).
3 讨论大黄中含有的4种蒽醌化合物，除大黄酚为止血成分有止血作用外，其余均具有抗菌作用 [2]. 经本实验证实，这4种大黄蒽醌皆对Hp有较强的抑制作用. 说明无抗菌作用 的某些成分(如大黄中的大黄酚)对Hp的生长亦可有抑制作用. 此外，我们对抗菌中药黄连、黄芩等所试验证实，它们有较强的抑制Hp生长作用，但其中的主要抗菌成分黄连素，黄芩甙皆无抑制Hp活性，因此具有抗菌作用的有效成分并非均具有抑制Hp的生长作用.大黄是我国常用中药，具有泻下、抗菌、抗肿瘤及止血等效用[3]. 古今中外医药学者对它有精深的研究，而用大黄蒽醌类抑制Hp的实验研究未见报告. 本实验的结果为进一步开发大黄的药用价值提供资料.
4 参考文献1 曹忠铭，刘宽宇，尹志良，等. 亚甲蓝染色检查幽门螺杆菌. 新消化病学杂志，1996；4(3)：140-141
2 第二军医大学药学系. 中草药成分化学，1977：167-173
3 吴贻谷. 中国医学百科全书中药学. 第1版. 第2次印刷. 上海：上海科学技术出版社， 1992：292-293, 百拇医药