p53 C-myc和P-gp蛋白在胃癌细胞中表达
江西省人民医院病理科 江西省南昌市 330006
刘勇，男，1970-02-08生，江西省南昌市人，汉族. 1991年南京大学医学院毕业，病理科免疫实验室负责人，卫生厅科研项目“胃粘膜肠化生细胞增殖状态分型的研究及应用”和“胃癌前病变细胞增殖调控及早期诊断的研究”负责人，发表论文7篇.
项目负责人 刘勇,江西省南昌市爱国路92号.
Tel: 0791-5714818；6813352-280.收搞日期 1996-10-04 接受日期 1996-12-10
The expression of p53 C-myc and P-gp proteins in gastric cancer
, 百拇医药
Yong Liu, Ming-Zhi Lu, Qi-Ming Li and Yi-Li Wang
Department of Pathology, Jiangxi Provincial People′s Hospital, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
Abstract
AIM To study the relationship between the expression of p53 and C-myc protein and multidrug resistance in gastric cancer.
METHODS By LSAB immunohistochemical methods, the correlation of the expressions of p53, C-myc and P-gp proteins in 67 cases of gastric cancer was studied.
, 百拇医药
RESULTS Thirty-two (47.8%) cases of gastric cancer were p53 p ositive, 37 (55.2%) were C-Myc positive, 39 (58.2%) were P-gp positive. A si gnificant correlation was found between p53 over-expresison and mdr-1 gene exp ression (r=0.63, P<0.05). Meanwhile, there was no significant correla tion between the expressions of C-myc and mdr-1.
CONCLUSION p53 over-expression might increased the expression of mdr-1 gene so as to obtain multidrug resistance phenotype in gastric cells.
, 百拇医药
Subject headings protein P53/metabolism; p-glycoprotein/metabolism; stomach neoplasms/metabolism
Liu Y,Lu MZ,Li QM,Wang YL.The expression of p53 C-gp proteins in gastric cancer.Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(9):585-586
摘 要目的 研究胃癌组织中p53和C-myc的表达与多药耐药性(MDR)的关系.
方法 应用LSAB免疫组织化学方法研究67例(男41例，女26例，平均年龄46±15.8岁)胃癌标本中p53，C-myc和P-gp的表达.
, 百拇医药
结果 本组胃癌中p53阳性32例(47.8%)，C-myc阳性37例(55.2%)，P-gp阳性39例(58.2%). 淋巴结转移阳性胃癌p53阳性率(56.9%)和C-myc阳性率(64.7%)显著高于淋巴结转移阴性的胃癌(P<0.05). p53的异常表达与mdr-1基因表达呈显著正相关(r=0.63,P<0.05)，而C-myc和mdr-1的表达无明显相关.
结论 p53异常表达可增加mdr-1基因的表达，从而使胃癌细胞获得MDR表型.
主题词 蛋白质/P53/代谢; P糖蛋白/代谢; 胃肿瘤/代谢
刘勇,路名芝,李启明,王夷黎.p53 C-myc和P-gp蛋白在胃癌细胞中表达.新消化病学杂志,1997;5(9):585-586
, 百拇医药
抑癌基因p53和癌基因C_myc异常表达在肿瘤的发生发展过程中起重要作用[1，2]. 多药耐药性(multidrug resistance, MDR)的产生与其基因mdr-1过度表达一种P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)有关[3，4]. 关于p53和C_myc异常表达与mdr_1基因表达关系的研究，国内这方面的工作甚少. 我们应用免疫组织化学方法研究p53和C_myc异常表达与胃癌细胞MDR的关系，并探讨p53,C_myc和mdr_1 三个基因与胃癌组织类型及浸润转移的关系.
1 对象和方法1.1 对象 选取我院外科1990年～1995年手术切除胃癌标本67例，男41例，女26例，平均年龄46岁±15.8岁，所有患者术前均未经放疗、化疗. 标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚，HE染色.
, 百拇医药
1.2 方法 采用链霉菌素-生物素(LSAB)免疫组织化学方法. 抗p53抗体(DO-7)购自Dako公司，工作浓度 1∶40， 需微波处理，抗C_myc抗体(9E11)购自Novo公司，工作浓度1∶150，需胰酶消化；抗P-gp抗体(JSB-1)购自Novo公司，工作浓度1∶50，需微波处理，以上均为单克隆抗体.试剂盒购自Dako公司，严格按说明书进行操作，DAB显色. TBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照. 结果判断：染色阳性信号呈棕黄色，每张切片由2名医师双盲观测10个高倍视野. 无阳性细胞或阳性细胞<5个且着色 较淡者为阴性(-)；阳性细胞>5个，但<肿瘤细胞的30%者为阳性(+)；阳性细胞>肿瘤 细胞的30%，且着色较强者为强阳性(++). 统计学分析 采用χ2及相关性检验.
2 结果
, 百拇医药
2.1 p53表达 定位于细胞核，核分裂相染色阴性. 胃癌p53阳性率47.8%(表1)，癌旁细胞未见着色. 低 分化腺癌和管状腺癌中p53阳性率较高，但无显著性意义. 肿瘤浸润至浆膜层胃癌中的p53阳性率显著高于肿瘤窒拊谡衬ぜ罢衬は虏愕奈赴校正χ2=4 .20，P<0.05). 淋巴结转移阳性胃癌中p53阳性率显著高于淋巴结转移阴性的胃癌( 校正χ2=5.67，P<0.05).
2.2 C-myc表达 主要位于胞核，少数病例(3例)胞浆着色. 胃癌C_myc阳性率55.2%(表1)，癌旁粘膜上皮未 见着色. 低分化腺癌和管状腺癌中C_myc阳性率较高，但无显著性意义. 肿瘤浸润至浆膜层 胃癌的C_myc阳性率比肿瘤局限于粘膜及粘膜下层的胃癌高，无统计学差异(校正χ2=2.66，P>0.05). 淋巴结转移阳性胃癌的C_myc阳性率显著高于淋巴结转移阴性的胃癌(校正χ2=6.26，P<0.05).
, 百拇医药
2.3 P_gp表达 主要定位于胞浆. 胃癌Pgp阳性率58.2%(表1)，癌旁胃腺上皮及巨噬细胞亦可见阳性着色. 低分化腺癌和管状腺癌中P_gp阳性率较高，但无显著性意义. P_gp的阳性率与肿瘤浸润程度义及淋巴结转移状况无明显相关.
2.4 胃癌p53,C_myc与P_gp表达的关系 p53阳性胃癌32例中P_gp阳性29例，阳性率90.6%，明显高于p53阴性的胃癌. 胃癌中p53异常表达与mdr-1的表达呈显著正相关(r=0.63，P<0.05). 37例C_myc阳性胃癌中P_gp阳性24例，阳性率64.9%，胃癌中C_myc异常表达与mdr_1的表达无明显相关(表2).
表1 胃癌组织p53,C_myc,P_gp的表达
, 百拇医药
表2 胃癌组织p53,C_myc与P_gp表达的关系(%)
, 百拇医药
3 讨论肿瘤多药耐药性基因mdr_1的编码产物P_gp是由1280个氨基酸构成的跨膜糖蛋白，具有将抗癌药物泵出细胞，使细胞内药物浓度降低的功能，从而使细胞产生耐药性. 人的许多正常组 织中也有mdr_1的表达，如肾上腺、肠、肝、睾丸等，起源于这些组织的肿瘤，具有先天的M DR，但起源于其它组织的肿瘤也可获得MDR表型[3-4]. 推测原因有化疗药物的使用 以及肿瘤发生发展过程癌基因和抑癌基因对mdr_1基因的调控作用. 有学者从基因转录水平 研究p53基因对mdr_1启动子的调节作用，发现野生型p53能够抑制mdr_1基因转录，减低P_gp 生成，而突变型p53增强mdr_1基因的表达[5]. 有关从基因蛋白产物水平研究p53和 C_myc对mdr_1基因调控作用的工作尚未见报道，从蛋白水平开展此项研究，对指导临床工作 有一定的意义.p53基因编码产物为P53蛋白，Mr 53000，执行p53基因的调控功能. 野生型P53蛋白与DNA有很高的亲和性，抑制DNA合成和复制，从而抑制细胞增殖，而突变型P53蛋白由于构象发生改变，对DNA亲和性下降，抑制细胞增殖能力减弱. 野生型P53蛋白的半衰期较短，不易检测，突变型P53蛋白由于构象改变，半衰期延长，在细胞中稳定性增加，能被常规免疫组织化学方法检测，且p53基因突变和P53蛋白在组织中表达是相一致的[1,6]. 我们发现，p53过表达与胃癌浸润程度和淋巴结转移有关，说明p53过表达对癌细胞增殖的抑制作用减弱，促进癌细胞浸润转移，对判断胃癌的预后有一定意义. mdr_1基因表达与胃癌浸润程度及淋巴结转移无关，表明mdr_1基因对胃癌浸润转移过程无调控作用. 我们观察到巨噬细胞P_gp阳性，其生物学意义有待进一步探讨. 胃癌中p53过表达与mdr_1基因表达呈显著正相关，提示p53过表达可增强mdr-1基因表达，从而使胃癌细胞获得MDR表型. 但在p53阴性胃癌仍有10例P_gp阳性. 以及癌旁胃腺上皮可见P_gp阳性，提示除外p53基因，还应有其它基因调控mdr_1的表达，如癌基因ras、c_fos等[4，5].C_myc基因产物是一种DNA相关核蛋白，Mr 6000～62000，参与细胞增殖及分化调节 ，其异常表达在肿瘤发生发展中起重要作用[2]. 有关MDR与C_myc基因关系的研究 结果比较矛盾，Deloporte认为C_myc对mdr_1基因起负调节作用，而Niimi却得到相反的结果，C_myc的表达与MDR呈正相关[4]. 我们研究发现少数病例的C_myc阳性产物位于胞浆中，这可能与组织标本经福尔马林固定，石蜡包埋有关[7]. C_myc的阳性率随胃癌浸润积度及淋巴结转移而增高，说明C_myc过表达对癌细胞的浸润转移起促进作用. 胃癌中C_myc过表达与mdr_1基因无相关性，提示C_myc基因对胃癌细胞的MDR无明显影响.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 陈汉源.P53蛋白结构的生物功能. 国外医学遗传学分册，1995;18(5):239-243
2 Nomiya I, Yonemura Y, Matsumoto H, et al. Expression of C_myc gene product in gastric carcinoma. Oncology, 1991;48(2):149-153
3 高振强，高志萍. 多药耐药基因研究进展. 中华病理学杂志，1996；25(3)：185-187
4 杨居祥. 多药耐药性研究进展. 国外医学生理病理科学与临床分册，1994；14(3)：139-141
5 Clin KV, Ueda K, Pastan I, et al. Modulation of the activity of the promoter of human MDR_1 gene by ras and p53.
Science, 1992;255(4):459-462
6 顾健人. 抑癌基因及人原发性肝癌中抑癌基因研究进展(Ⅱ).肿瘤，1995；15(3)：289-290
7 倪灿荣. 免疫组织化学实验新技术及应用. 北京：北京科学技术出版社，1993：321, http://www.100md.com
刘勇，男，1970-02-08生，江西省南昌市人，汉族. 1991年南京大学医学院毕业，病理科免疫实验室负责人，卫生厅科研项目“胃粘膜肠化生细胞增殖状态分型的研究及应用”和“胃癌前病变细胞增殖调控及早期诊断的研究”负责人，发表论文7篇.
项目负责人 刘勇,江西省南昌市爱国路92号.
Tel: 0791-5714818；6813352-280.收搞日期 1996-10-04 接受日期 1996-12-10
The expression of p53 C-myc and P-gp proteins in gastric cancer
, 百拇医药
Yong Liu, Ming-Zhi Lu, Qi-Ming Li and Yi-Li Wang
Department of Pathology, Jiangxi Provincial People′s Hospital, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
Abstract
AIM To study the relationship between the expression of p53 and C-myc protein and multidrug resistance in gastric cancer.
METHODS By LSAB immunohistochemical methods, the correlation of the expressions of p53, C-myc and P-gp proteins in 67 cases of gastric cancer was studied.
, 百拇医药
RESULTS Thirty-two (47.8%) cases of gastric cancer were p53 p ositive, 37 (55.2%) were C-Myc positive, 39 (58.2%) were P-gp positive. A si gnificant correlation was found between p53 over-expresison and mdr-1 gene exp ression (r=0.63, P<0.05). Meanwhile, there was no significant correla tion between the expressions of C-myc and mdr-1.
CONCLUSION p53 over-expression might increased the expression of mdr-1 gene so as to obtain multidrug resistance phenotype in gastric cells.
, 百拇医药
Subject headings protein P53/metabolism; p-glycoprotein/metabolism; stomach neoplasms/metabolism
Liu Y,Lu MZ,Li QM,Wang YL.The expression of p53 C-gp proteins in gastric cancer.Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(9):585-586
摘 要目的 研究胃癌组织中p53和C-myc的表达与多药耐药性(MDR)的关系.
方法 应用LSAB免疫组织化学方法研究67例(男41例，女26例，平均年龄46±15.8岁)胃癌标本中p53，C-myc和P-gp的表达.
, 百拇医药
结果 本组胃癌中p53阳性32例(47.8%)，C-myc阳性37例(55.2%)，P-gp阳性39例(58.2%). 淋巴结转移阳性胃癌p53阳性率(56.9%)和C-myc阳性率(64.7%)显著高于淋巴结转移阴性的胃癌(P<0.05). p53的异常表达与mdr-1基因表达呈显著正相关(r=0.63,P<0.05)，而C-myc和mdr-1的表达无明显相关.
结论 p53异常表达可增加mdr-1基因的表达，从而使胃癌细胞获得MDR表型.
主题词 蛋白质/P53/代谢; P糖蛋白/代谢; 胃肿瘤/代谢
刘勇,路名芝,李启明,王夷黎.p53 C-myc和P-gp蛋白在胃癌细胞中表达.新消化病学杂志,1997;5(9):585-586
, 百拇医药
抑癌基因p53和癌基因C_myc异常表达在肿瘤的发生发展过程中起重要作用[1，2]. 多药耐药性(multidrug resistance, MDR)的产生与其基因mdr-1过度表达一种P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)有关[3，4]. 关于p53和C_myc异常表达与mdr_1基因表达关系的研究，国内这方面的工作甚少. 我们应用免疫组织化学方法研究p53和C_myc异常表达与胃癌细胞MDR的关系，并探讨p53,C_myc和mdr_1 三个基因与胃癌组织类型及浸润转移的关系.
1 对象和方法1.1 对象 选取我院外科1990年～1995年手术切除胃癌标本67例，男41例，女26例，平均年龄46岁±15.8岁，所有患者术前均未经放疗、化疗. 标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚，HE染色.
, 百拇医药
1.2 方法 采用链霉菌素-生物素(LSAB)免疫组织化学方法. 抗p53抗体(DO-7)购自Dako公司，工作浓度 1∶40， 需微波处理，抗C_myc抗体(9E11)购自Novo公司，工作浓度1∶150，需胰酶消化；抗P-gp抗体(JSB-1)购自Novo公司，工作浓度1∶50，需微波处理，以上均为单克隆抗体.试剂盒购自Dako公司，严格按说明书进行操作，DAB显色. TBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照. 结果判断：染色阳性信号呈棕黄色，每张切片由2名医师双盲观测10个高倍视野. 无阳性细胞或阳性细胞<5个且着色 较淡者为阴性(-)；阳性细胞>5个，但<肿瘤细胞的30%者为阳性(+)；阳性细胞>肿瘤 细胞的30%，且着色较强者为强阳性(++). 统计学分析 采用χ2及相关性检验.
2 结果
, 百拇医药
2.1 p53表达 定位于细胞核，核分裂相染色阴性. 胃癌p53阳性率47.8%(表1)，癌旁细胞未见着色. 低 分化腺癌和管状腺癌中p53阳性率较高，但无显著性意义. 肿瘤浸润至浆膜层胃癌中的p53阳性率显著高于肿瘤窒拊谡衬ぜ罢衬は虏愕奈赴校正χ2=4 .20，P<0.05). 淋巴结转移阳性胃癌中p53阳性率显著高于淋巴结转移阴性的胃癌( 校正χ2=5.67，P<0.05).
2.2 C-myc表达 主要位于胞核，少数病例(3例)胞浆着色. 胃癌C_myc阳性率55.2%(表1)，癌旁粘膜上皮未 见着色. 低分化腺癌和管状腺癌中C_myc阳性率较高，但无显著性意义. 肿瘤浸润至浆膜层 胃癌的C_myc阳性率比肿瘤局限于粘膜及粘膜下层的胃癌高，无统计学差异(校正χ2=2.66，P>0.05). 淋巴结转移阳性胃癌的C_myc阳性率显著高于淋巴结转移阴性的胃癌(校正χ2=6.26，P<0.05).
, 百拇医药
2.3 P_gp表达 主要定位于胞浆. 胃癌Pgp阳性率58.2%(表1)，癌旁胃腺上皮及巨噬细胞亦可见阳性着色. 低分化腺癌和管状腺癌中P_gp阳性率较高，但无显著性意义. P_gp的阳性率与肿瘤浸润程度义及淋巴结转移状况无明显相关.
2.4 胃癌p53,C_myc与P_gp表达的关系 p53阳性胃癌32例中P_gp阳性29例，阳性率90.6%，明显高于p53阴性的胃癌. 胃癌中p53异常表达与mdr-1的表达呈显著正相关(r=0.63，P<0.05). 37例C_myc阳性胃癌中P_gp阳性24例，阳性率64.9%，胃癌中C_myc异常表达与mdr_1的表达无明显相关(表2).
表1 胃癌组织p53,C_myc,P_gp的表达
| 生物学指标 | n | p53 | C_myc | P_gp | ||||||
| - | + | ++ | - | + | ++ | - | + | ++ | ||
| 组织类型 | ||||||||||
| 管状腺癌 | 25 | 14 | 7 | 4 | 13 | 9 | 3 | 10 | 8 | 7 |
| 低分化腺癌 | 32 | 13 | 10 | 9 | 10 | 13 | 9 | 11 | 14 | 7 |
| 印戒细胞癌 | 3 | 3 | 0 | 0 | 2 | 1 | 0 | 2 | 1 | 0 |
| 粘液腺癌 | 7 | 5 | 2 | 0 | 5 | 2 | 0 | 5 | 1 | 1 |
| 浸润程度 | ||||||||||
| 粘膜及粘膜下 | 6 | 5 | 1 | 0 | 4 | 2 | 0 | 3 | 2 | 1 |
| 肌层 | 15 | 12 | 1 | 2 | 11 | 3 | 1 | 7 | 4 | 4 |
| 浆膜层 | 46 | 18 | 17 | 11 | 15 | 20 | 11 | 18 | 18 | 10 |
| 淋巴结转移 | ||||||||||
| 阳性 | 51 | 22 | 16 | 13 | 18 | 22 | 11 | 22 | 19 | 10 |
| 阴性 | 16 | 13 | 3 | 0 | 12 | 3 | 1 | 6 | 5 | 5 |
, 百拇医药
表2 胃癌组织p53,C_myc与P_gp表达的关系(%)
| P_gp表达 | n | p53表达 | C_myc表达 | ||||
| - | + | ++ | - | + | ++ | ||
| 阴性组 | 28(41.8) | 25(71.4) | 2(10.5) | 1(7.7) | 15(50.0) | 8(32.0) | 5(41.7) |
| 阳性组 | 24(35.8) | 9(25.7) | 11(57.9) | 4(30.8) | 13(43.3) | 9(36.0) | 2(16.6) |
| 强阳性 | 15(22.4) | 1(2.9) | 6(31.6) | 8(61.5) | 2(6.7) | 8(32.0) | 5(41.7) |
, 百拇医药
3 讨论肿瘤多药耐药性基因mdr_1的编码产物P_gp是由1280个氨基酸构成的跨膜糖蛋白，具有将抗癌药物泵出细胞，使细胞内药物浓度降低的功能，从而使细胞产生耐药性. 人的许多正常组 织中也有mdr_1的表达，如肾上腺、肠、肝、睾丸等，起源于这些组织的肿瘤，具有先天的M DR，但起源于其它组织的肿瘤也可获得MDR表型[3-4]. 推测原因有化疗药物的使用 以及肿瘤发生发展过程癌基因和抑癌基因对mdr_1基因的调控作用. 有学者从基因转录水平 研究p53基因对mdr_1启动子的调节作用，发现野生型p53能够抑制mdr_1基因转录，减低P_gp 生成，而突变型p53增强mdr_1基因的表达[5]. 有关从基因蛋白产物水平研究p53和 C_myc对mdr_1基因调控作用的工作尚未见报道，从蛋白水平开展此项研究，对指导临床工作 有一定的意义.p53基因编码产物为P53蛋白，Mr 53000，执行p53基因的调控功能. 野生型P53蛋白与DNA有很高的亲和性，抑制DNA合成和复制，从而抑制细胞增殖，而突变型P53蛋白由于构象发生改变，对DNA亲和性下降，抑制细胞增殖能力减弱. 野生型P53蛋白的半衰期较短，不易检测，突变型P53蛋白由于构象改变，半衰期延长，在细胞中稳定性增加，能被常规免疫组织化学方法检测，且p53基因突变和P53蛋白在组织中表达是相一致的[1,6]. 我们发现，p53过表达与胃癌浸润程度和淋巴结转移有关，说明p53过表达对癌细胞增殖的抑制作用减弱，促进癌细胞浸润转移，对判断胃癌的预后有一定意义. mdr_1基因表达与胃癌浸润程度及淋巴结转移无关，表明mdr_1基因对胃癌浸润转移过程无调控作用. 我们观察到巨噬细胞P_gp阳性，其生物学意义有待进一步探讨. 胃癌中p53过表达与mdr_1基因表达呈显著正相关，提示p53过表达可增强mdr-1基因表达，从而使胃癌细胞获得MDR表型. 但在p53阴性胃癌仍有10例P_gp阳性. 以及癌旁胃腺上皮可见P_gp阳性，提示除外p53基因，还应有其它基因调控mdr_1的表达，如癌基因ras、c_fos等[4，5].C_myc基因产物是一种DNA相关核蛋白，Mr 6000～62000，参与细胞增殖及分化调节 ，其异常表达在肿瘤发生发展中起重要作用[2]. 有关MDR与C_myc基因关系的研究 结果比较矛盾，Deloporte认为C_myc对mdr_1基因起负调节作用，而Niimi却得到相反的结果，C_myc的表达与MDR呈正相关[4]. 我们研究发现少数病例的C_myc阳性产物位于胞浆中，这可能与组织标本经福尔马林固定，石蜡包埋有关[7]. C_myc的阳性率随胃癌浸润积度及淋巴结转移而增高，说明C_myc过表达对癌细胞的浸润转移起促进作用. 胃癌中C_myc过表达与mdr_1基因无相关性，提示C_myc基因对胃癌细胞的MDR无明显影响.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 陈汉源.P53蛋白结构的生物功能. 国外医学遗传学分册，1995;18(5):239-243
2 Nomiya I, Yonemura Y, Matsumoto H, et al. Expression of C_myc gene product in gastric carcinoma. Oncology, 1991;48(2):149-153
3 高振强，高志萍. 多药耐药基因研究进展. 中华病理学杂志，1996；25(3)：185-187
4 杨居祥. 多药耐药性研究进展. 国外医学生理病理科学与临床分册，1994；14(3)：139-141
5 Clin KV, Ueda K, Pastan I, et al. Modulation of the activity of the promoter of human MDR_1 gene by ras and p53.
Science, 1992;255(4):459-462
6 顾健人. 抑癌基因及人原发性肝癌中抑癌基因研究进展(Ⅱ).肿瘤，1995；15(3)：289-290
7 倪灿荣. 免疫组织化学实验新技术及应用. 北京：北京科学技术出版社，1993：321, http://www.100md.com