食管癌核基质抗体的免疫组化研究
1江西省人民医院病理科 江西省南昌市 330006
2江西医学院病理解剖学教研室
江西省科委科研基金资助课题，No. 9507028.
李启明，男，1944-07-11生，江西省南昌市人， 汉族.1968年江西医学院毕业. 副教授、副主任医师.
主要从事病理学诊断及科研工作，发表论文6篇.
项目负责人 李启明, 江西省南昌市爱国路92号.
Tel: 0791-6813352-280.收搞日期 1996-11-13 接受日期 1996-12-28
, 百拇医药
Immunohistochemical study of nuclear matrix antibody in human esophageal cancer
Qi_Ming Li, Yong Liu, Hua_Qi Xiong, Qi_Ming Wu and Gui_Hua Zou
Department of Pathology, Jiangxi Provincial People′s Hospital, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
Abstract
AIM To study esophageal cancer nuclear matrix (ECNM) in human esophageal cancer.
, http://www.100md.com
METHODS By immunohistochemical method, human ECNM expression in tissues of 41 cases of human esophageal caner, 10 cases of lung cancer, 10 of gastric cancer and 5 of mouse esophageal cancer were studied.
RESULTS The differences between esophageal cancer (32/41， 78.0%) and lung cancer (3/10, 30.0%), gastric cancer (2/10, 20.0%), abnormal esophageal tissues (1/8, 12.5%) for ECNM espression were significant (P<0.05). The metastatic rate of esophageal cancer with ECNM expression was higher than that with negative ECNM expression (17/18, 94.4% vs 15/23, 65.2%；P<0.05). The difference between human and mouse esophageal cancer tissues for ECNM espression was not_significant (P>0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION ECNM antibody may be used as a new marker im human esophageal cancer, with different expressions in lymph node metastasis.
Subject headings esophageal neoplasms/immunology; nuclear matrix/immunology; antibodies/analysis; immunohistochemistry
Li QM, Liu Y, Xiong HQ, Wu QM, Zou GH.Immunohistochemical study of nuclear matrix antibody in human esophageal cancer.
, 百拇医药
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(9):562-563
摘 要目的 研究食管癌核基质抗体的肿瘤特异性和组织学特异性.
方法 用人食管癌组织提取核基质抗原，制备核基质抗体，采用免疫组织化学方法对食管癌41例(男26例，女15例，年龄53岁±7.2岁)、正常食管粘膜8例、食管粘膜异型增生15例、肺鳞癌10例、喉癌10例、胃腺癌10例以及大鼠食管癌5例进行免疫组化染色.
结果 食管癌核基质抗体在食管癌组织中表达有特异性(32/41,78.0%)，与正常食管粘膜(1/8，12.5%)及胃腺癌(2/10，20.0%)有非常显著差异(P<0.01)， 与食管异常增生(7/15，46.7%)、肺鳞癌(3/10，30.0%)、喉鳞癌(4/10，40.0%)差异明显(P<0.05)，但与大鼠食管癌组织(2/5，40.0%)差异不明显. 食管癌核基质的表达，在不同分化程度的食管癌组织中无明显差异(P>0.05)；在淋巴结转移阳性组高于淋巴结转移阴性组(17/18，94.4% vs 15/23，65.2%，P<0.05).
, 百拇医药
结论 食管癌核基质抗体具有较好肿瘤和组织学特异性，对肿瘤转移有一定影响，可作为食管癌的一项新标记物.
主题词 食管肿瘤/免疫病； 核基质/免疫学； 抗体/分析；免疫组织化学
李启明,刘勇,熊华淇,吴绮明,邹桂华.食管癌核基质抗体的免疫组化研究.新消化病学杂志,1997;5(9):562-563
细胞核基质(nuclear matrix)是一个不含染色质的以核蛋白为主要成分的网络状结构. 其与细胞基因的复制、转录及调控密切相关. 当肿瘤细胞内癌基因和抑癌基因异常表达时，必然存在核内生物大分子的变化[1，2]. 有关核基质及食管癌染色质抗原的研究国 内已开展[3,4]. 我们以人食管癌核基质(esophageal cancer nuclear matrix，BCNM)为抗原制备抗ECNM抗体，应用多免疫组织化学方法研究ECNM在食管癌及其它肿瘤组织中的表达，探讨抗ECNM抗体的临床应用价值及ECNM在食管癌发生过程中的意义.
, 百拇医药
1 材料和方法1.1 材料 选取我院1993年～1995年食管癌手术标本41例，男26例，女15例，年龄53岁±7.2岁，其中高分化12例，中分化25例，低分化4例，淋巴结转移阳性18例. 全部病例术前均未经放、化疗. 另选取正常食管粘膜8例，食管粘膜异型增生15例，大鼠食管癌5例，肺鳞癌10例，喉癌10例，胃腺癌10例. 全部标本经福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片.
1.2 方法 抗ECNM抗体的制备：ECNM抗原的提纯及成分测定，抗ECNM抗体的制备及效价测定，按Wen等[1]方法进行. 链霉菌素——生物素(LSAB)免疫组织化学染色：LSAB试剂盒购自Dako公司，严格按说明书进行操作，抗ECNM多克隆抗体的工作浓度为1∶50. TBS代替一抗作阴性对照，阳性对照用已知阳性切片. 实验数据统计分析采用χ2检验.
, 百拇医药
2 结果2.1 结果判断 染色阳性信号为棕黄色、棕褐色. 每张切片由2名病理医师观察10个高倍视野，根据阳性细胞数量及显色强度分为阴性(-)：阳性细胞<5个，且显色较弱；阳性(+)：阳性细胞<肿瘤细胞总数的30%；强阳性(++)：阳性细胞>肿瘤细胞的30%，且着色较强.
2.2 ECNM的表达 主要位于细胞核，胞浆亦可见弱阳性，在食管癌(图1)与正常粘膜组织中有非常显著差异(表1，χ2=13.08，P<0.01)； 在食管癌与异型增生粘膜中有差异(χ2=5.12，P<0.05)；在食管与肺鳞癌中差异明显(χ2=5.61，P<0.05)；在食管癌与胃癌中有非常显著差异(χ2=12， P<0.01)，在食管癌与大鼠食管癌中差异不明显(χ2=3.35，0.05
2.3 ECNM表达与组织分化及淋巴结转移 不同分化程度的食管癌中ECNM的表达无明显差异(P>0.05)；淋巴结转移阳性组食管癌中ECNM的表达高于淋巴结转移阴性组(表2，χ2=5.03，P<0.05).
图1 食管鳞癌和细胞核示ECNM阳性 LSAB×400
表1 食管癌及其他肿瘤组织中ECNM的表达
, 百拇医药
表2 食管癌ECNM表达与组织分化及淋巴结转移的关系
, http://www.100md.com
3 讨论细胞核基质上存在DNA复制位点，并且与DNA复制密切相关的DNA多聚酶、DNA引物酶等均连接于核基质上，故核基质与DNA复制过程密切相关. 另有实验证明核基质对基因表达发挥调控作用，与肿瘤的发生关系密切[2，3]. 食管癌的发生及浸润转移是一个复杂过程，涉及细胞内多个基因的突变及缺失，如p53,c_myc,APC,MCC[5]. 我们实验发现ECNM在食管癌中的表达与肺鳞癌，喉鳞癌、胃腺癌有显著差异，说明抗ECNM抗 体具有良好的组织学特异性. ECNM在食管癌中的表达与正常食管粘膜及异型增生粘膜有显著差异，说明肿瘤细胞与正常细胞核基质的结构和成分不同，ECNM有较好的肿瘤特异性. ECNM的表达随食管粘膜上皮细胞的增生、癌变而增强，提示食管癌发生过程中，细胞核基质结构及成分的变化影响细胞基因的表达，促进细胞癌变. 9例食管癌ECNM表达阴性，提示食管癌发生是一个复杂的生物学过程，受到除核基质以外多因素的影响. 人食管癌中ECNM的表达与大鼠食管癌差异不明显，此交叉反应提示不同种系动物的食管癌发生具有相似的生物学基础. 不同分化程度食管癌中ECNM的表达差异不明显，说明在细胞分化过程中，核基质的结构与成分变化不大. 淋巴结转移阳性组食管癌中ECNM的高表达，提示ECNM对肿瘤细胞转移相关基因有影响，对癌细胞的转移有促进作用. 由于核蛋白处于动态变化之中，在有丝分裂期出现在胞浆，并且核基质中残留的核内膜组织，与内织网膜系统是相关联的[1]. 故ECNM的表达不仅存在于细胞核，在胞核中亦可见是可以理解的. 本实验提示，抗ECNM抗体具有较好的肿瘤特异性及组织学特异性，在食管癌的诊断和鉴别诊断方面有较大应用价值. 可作为食管癌的一项新标记物，为食管癌早期诊断提供依据.
, 百拇医药
4 参考文献1 Wen BG. Monoclonal antibodies to ninhistone proteins associated with human colon cancer nuclear matrix.
Int J Biochem, 1987;19(4):321-328
2 肖枫，王秀琴. 人食管癌的细胞和分子遗传学研究. 中华肿瘤杂志，1996；18(1)：73-75
3 刘勇，路名芝. 人胚肝核基质和肝癌核基质在肝细胞癌中的表达. 实用肿瘤学杂志，1996；10(3)：1-2
4 温博贵，刘兴洛，陈粤，等. 人食管癌染色质抗原的免疫组化特征. 临床与实验病理学杂志，1994；10(1)：41-42
5 李华川，陈士新. 食管癌组织中抑癌基因APC、MCC突变的研究. 中华肿瘤杂志，1995；17(1)：9-11, 百拇医药
2江西医学院病理解剖学教研室
江西省科委科研基金资助课题，No. 9507028.
李启明，男，1944-07-11生，江西省南昌市人， 汉族.1968年江西医学院毕业. 副教授、副主任医师.
主要从事病理学诊断及科研工作，发表论文6篇.
项目负责人 李启明, 江西省南昌市爱国路92号.
Tel: 0791-6813352-280.收搞日期 1996-11-13 接受日期 1996-12-28
, 百拇医药
Immunohistochemical study of nuclear matrix antibody in human esophageal cancer
Qi_Ming Li, Yong Liu, Hua_Qi Xiong, Qi_Ming Wu and Gui_Hua Zou
Department of Pathology, Jiangxi Provincial People′s Hospital, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
Abstract
AIM To study esophageal cancer nuclear matrix (ECNM) in human esophageal cancer.
, http://www.100md.com
METHODS By immunohistochemical method, human ECNM expression in tissues of 41 cases of human esophageal caner, 10 cases of lung cancer, 10 of gastric cancer and 5 of mouse esophageal cancer were studied.
RESULTS The differences between esophageal cancer (32/41， 78.0%) and lung cancer (3/10, 30.0%), gastric cancer (2/10, 20.0%), abnormal esophageal tissues (1/8, 12.5%) for ECNM espression were significant (P<0.05). The metastatic rate of esophageal cancer with ECNM expression was higher than that with negative ECNM expression (17/18, 94.4% vs 15/23, 65.2%；P<0.05). The difference between human and mouse esophageal cancer tissues for ECNM espression was not_significant (P>0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION ECNM antibody may be used as a new marker im human esophageal cancer, with different expressions in lymph node metastasis.
Subject headings esophageal neoplasms/immunology; nuclear matrix/immunology; antibodies/analysis; immunohistochemistry
Li QM, Liu Y, Xiong HQ, Wu QM, Zou GH.Immunohistochemical study of nuclear matrix antibody in human esophageal cancer.
, 百拇医药
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(9):562-563
摘 要目的 研究食管癌核基质抗体的肿瘤特异性和组织学特异性.
方法 用人食管癌组织提取核基质抗原，制备核基质抗体，采用免疫组织化学方法对食管癌41例(男26例，女15例，年龄53岁±7.2岁)、正常食管粘膜8例、食管粘膜异型增生15例、肺鳞癌10例、喉癌10例、胃腺癌10例以及大鼠食管癌5例进行免疫组化染色.
结果 食管癌核基质抗体在食管癌组织中表达有特异性(32/41,78.0%)，与正常食管粘膜(1/8，12.5%)及胃腺癌(2/10，20.0%)有非常显著差异(P<0.01)， 与食管异常增生(7/15，46.7%)、肺鳞癌(3/10，30.0%)、喉鳞癌(4/10，40.0%)差异明显(P<0.05)，但与大鼠食管癌组织(2/5，40.0%)差异不明显. 食管癌核基质的表达，在不同分化程度的食管癌组织中无明显差异(P>0.05)；在淋巴结转移阳性组高于淋巴结转移阴性组(17/18，94.4% vs 15/23，65.2%，P<0.05).
, 百拇医药
结论 食管癌核基质抗体具有较好肿瘤和组织学特异性，对肿瘤转移有一定影响，可作为食管癌的一项新标记物.
主题词 食管肿瘤/免疫病； 核基质/免疫学； 抗体/分析；免疫组织化学
李启明,刘勇,熊华淇,吴绮明,邹桂华.食管癌核基质抗体的免疫组化研究.新消化病学杂志,1997;5(9):562-563
细胞核基质(nuclear matrix)是一个不含染色质的以核蛋白为主要成分的网络状结构. 其与细胞基因的复制、转录及调控密切相关. 当肿瘤细胞内癌基因和抑癌基因异常表达时，必然存在核内生物大分子的变化[1，2]. 有关核基质及食管癌染色质抗原的研究国 内已开展[3,4]. 我们以人食管癌核基质(esophageal cancer nuclear matrix，BCNM)为抗原制备抗ECNM抗体，应用多免疫组织化学方法研究ECNM在食管癌及其它肿瘤组织中的表达，探讨抗ECNM抗体的临床应用价值及ECNM在食管癌发生过程中的意义.
, 百拇医药
1 材料和方法1.1 材料 选取我院1993年～1995年食管癌手术标本41例，男26例，女15例，年龄53岁±7.2岁，其中高分化12例，中分化25例，低分化4例，淋巴结转移阳性18例. 全部病例术前均未经放、化疗. 另选取正常食管粘膜8例，食管粘膜异型增生15例，大鼠食管癌5例，肺鳞癌10例，喉癌10例，胃腺癌10例. 全部标本经福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片.
1.2 方法 抗ECNM抗体的制备：ECNM抗原的提纯及成分测定，抗ECNM抗体的制备及效价测定，按Wen等[1]方法进行. 链霉菌素——生物素(LSAB)免疫组织化学染色：LSAB试剂盒购自Dako公司，严格按说明书进行操作，抗ECNM多克隆抗体的工作浓度为1∶50. TBS代替一抗作阴性对照，阳性对照用已知阳性切片. 实验数据统计分析采用χ2检验.
, 百拇医药
2 结果2.1 结果判断 染色阳性信号为棕黄色、棕褐色. 每张切片由2名病理医师观察10个高倍视野，根据阳性细胞数量及显色强度分为阴性(-)：阳性细胞<5个，且显色较弱；阳性(+)：阳性细胞<肿瘤细胞总数的30%；强阳性(++)：阳性细胞>肿瘤细胞的30%，且着色较强.
2.2 ECNM的表达 主要位于细胞核，胞浆亦可见弱阳性，在食管癌(图1)与正常粘膜组织中有非常显著差异(表1，χ2=13.08，P<0.01)； 在食管癌与异型增生粘膜中有差异(χ2=5.12，P<0.05)；在食管与肺鳞癌中差异明显(χ2=5.61，P<0.05)；在食管癌与胃癌中有非常显著差异(χ2=12， P<0.01)，在食管癌与大鼠食管癌中差异不明显(χ2=3.35，0.05
2.3 ECNM表达与组织分化及淋巴结转移 不同分化程度的食管癌中ECNM的表达无明显差异(P>0.05)；淋巴结转移阳性组食管癌中ECNM的表达高于淋巴结转移阴性组(表2，χ2=5.03，P<0.05).
图1 食管鳞癌和细胞核示ECNM阳性 LSAB×400
表1 食管癌及其他肿瘤组织中ECNM的表达
| 组织类型 | n | ECNM | |||
| - | + | ++ | % | ||
| 正常食管粘膜 | 8 | 7 | 1 | 0 | 12.5 |
| 食管异型增生 | 15 | 8 | 5 | 2 | 46.7 |
| 食管癌 | 41 | 9 | 11 | 21 | 78.0 |
| 肺鳞癌 | 10 | 7 | 3 | 0 | 30.0 |
| 喉鳞癌 | 10 | 6 | 3 | 1 | 40.0 |
| 胃腺癌 | 10 | 8 | 2 | 0 | 20.0 |
| 大鼠食管癌 | 5 | 3 | 1 | 1 | 40.0 |
, 百拇医药
表2 食管癌ECNM表达与组织分化及淋巴结转移的关系
| 生物学指标 | n | ECNM | |||
| - | + | ++ | % | ||
| 组织分化程度 | |||||
| 高分化 | 12 | 4 | 6 | 2 | 66.7 |
| 中分化 | 25 | 5 | 4 | 16 | 80.0 |
| 低分化 | 4 | 0 | 1 | 3 | 100.0 |
| 淋巴结转移 | |||||
| 阳性组 | 18 | 1 | 5 | 12 | 94.4 |
| 阴性组 | 23 | 8 | 6 | 9 | 65.2 |
, http://www.100md.com
3 讨论细胞核基质上存在DNA复制位点，并且与DNA复制密切相关的DNA多聚酶、DNA引物酶等均连接于核基质上，故核基质与DNA复制过程密切相关. 另有实验证明核基质对基因表达发挥调控作用，与肿瘤的发生关系密切[2，3]. 食管癌的发生及浸润转移是一个复杂过程，涉及细胞内多个基因的突变及缺失，如p53,c_myc,APC,MCC[5]. 我们实验发现ECNM在食管癌中的表达与肺鳞癌，喉鳞癌、胃腺癌有显著差异，说明抗ECNM抗 体具有良好的组织学特异性. ECNM在食管癌中的表达与正常食管粘膜及异型增生粘膜有显著差异，说明肿瘤细胞与正常细胞核基质的结构和成分不同，ECNM有较好的肿瘤特异性. ECNM的表达随食管粘膜上皮细胞的增生、癌变而增强，提示食管癌发生过程中，细胞核基质结构及成分的变化影响细胞基因的表达，促进细胞癌变. 9例食管癌ECNM表达阴性，提示食管癌发生是一个复杂的生物学过程，受到除核基质以外多因素的影响. 人食管癌中ECNM的表达与大鼠食管癌差异不明显，此交叉反应提示不同种系动物的食管癌发生具有相似的生物学基础. 不同分化程度食管癌中ECNM的表达差异不明显，说明在细胞分化过程中，核基质的结构与成分变化不大. 淋巴结转移阳性组食管癌中ECNM的高表达，提示ECNM对肿瘤细胞转移相关基因有影响，对癌细胞的转移有促进作用. 由于核蛋白处于动态变化之中，在有丝分裂期出现在胞浆，并且核基质中残留的核内膜组织，与内织网膜系统是相关联的[1]. 故ECNM的表达不仅存在于细胞核，在胞核中亦可见是可以理解的. 本实验提示，抗ECNM抗体具有较好的肿瘤特异性及组织学特异性，在食管癌的诊断和鉴别诊断方面有较大应用价值. 可作为食管癌的一项新标记物，为食管癌早期诊断提供依据.
, 百拇医药
4 参考文献1 Wen BG. Monoclonal antibodies to ninhistone proteins associated with human colon cancer nuclear matrix.
Int J Biochem, 1987;19(4):321-328
2 肖枫，王秀琴. 人食管癌的细胞和分子遗传学研究. 中华肿瘤杂志，1996；18(1)：73-75
3 刘勇，路名芝. 人胚肝核基质和肝癌核基质在肝细胞癌中的表达. 实用肿瘤学杂志，1996；10(3)：1-2
4 温博贵，刘兴洛，陈粤，等. 人食管癌染色质抗原的免疫组化特征. 临床与实验病理学杂志，1994；10(1)：41-42
5 李华川，陈士新. 食管癌组织中抑癌基因APC、MCC突变的研究. 中华肿瘤杂志，1995；17(1)：9-11, 百拇医药