实验性肝硬变时表皮生长因子受体在肝细胞核表达 的免疫组织化学研究
山西医科大学肝病研究所 山西省太原市 030001
1研究生，现在山西中医学院病理教研室
2现在山西医科大学第二医院消化科
闫晋平，男，1957-10-10生，山西省临县人，汉族. 1983年华西医科大学临床医学系本科毕业，1996年获山西医科大学医学硕士学位，主要从事消化系疾病研究，发表论文6篇.
项目负责人 闫晋平，030001，山西省太原市，山西医科大学肝病研究所，山西省太原市晋祠路19号.
基金资助 本课题为卫生部基金资助项目，No.2179412.*Project supported by the Chinese Ministry of Public Health, No. 2179412.
, http://www.100md.com
Correspondence to Jin-Ping Yan, Institute of Hepatic Diseases, Shanxi Medical University, 19 Jinsilu, Taiyuan 030001, China
Tel. +86·351·6042310-5434
收稿日期 1997-06-15 接收日期1997-09-03
Immunohistochemical study on expression of epidermal growth factor receptor at hepatocyte nuclei in
experimental rat liver cirrhosis*
, 百拇医药
Jin-Ping Yan, Jin-Bin Jia,Xue-Hui Ma, Xi-Run Wu, Yuan-Chang Zhao and De-Wu Han
Institute of Hepatic Diseases, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
Abstract
AIM To study the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) at hepatocyte nuclei in rat cirrhotic liver and its role in liver regeneration.
, 百拇医药
METHODS In experimental cirrhosis rats (n=32) induced with CCl4 and dietetic factors and normal rats (n=8), the EGFR expression in hepatocyte nuclei was studied by immunohistochemical method.
RESULTS The number of EGFR positive nuclei (/mm2) averaged 0.8±0.4 in the control group. They increased to 208.6±39.8， 164.8±31.1， 124.7±25.2 and 85.3±26.5 at the end of 2nd, 4th, 6th and 8th week (P<0.05). The peak was at the end of the 2nd week and the number of positive nuclei was decreased from then on.
, 百拇医药
CONCLUSION Because of decreased EGFR expression in hepatocyte nuclei, there is a reduced capacity of liver regeneration
in rat model.
Subject headings liver cirrhosis, experimental/metabolism; receptors, epidermal growth factor-urogastrone/metabolism; liver/metabolism; immunohistochemistry
Yan JP, Jia JB, Ma XH, Wu XR, Zhao YC, Han DW. Immunohistochemical study on expression of epidermal growth factor receptor at hepatocyte nuclei in experimental rat liver cirrhosis. Huaren Xiaohua Zazhi, 1998;6(1):15-16
, 百拇医药
摘要
目的 探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在肝硬变过程中的表达和对肝再生的作用.
方法 采用复合因子复制肝硬变动物模型(n=32)，正常大鼠(n=8)作对照，用免疫组化研究肝硬变过程中肝细胞核EGFR表达的变化.
结果 实验组动物EGFR阳性肝细胞核数(/mm-2)于肝硬变进程2，4，6和8wk末分别为208.6±39.8，164.8±31.1，124.7±25.2，85.3±26.5. 而对照组仅为0.8±0.4.
结论 大鼠实验性肝硬变模型存在着EGFR表达减少引起的肝再生能力下降.
, 百拇医药
主题词 肝硬变，实验性/代谢；受体，表皮生长因子尿抑胃素/代谢；肝/代谢；免疫组织化学
闫晋平, 贾晋斌, 马学惠, 武希润, 赵元昌, 韩德五. 实验性肝硬变时表皮生长因子受体在肝细胞核表达的免疫组织化学研究.
华人消化杂志, 1998;6(1):15-16
0 引言
肝硬变的形成源于肝细胞持续性变性、坏死基础上出现肝内纤维结缔组织增生和肝细胞的结节状再生. EGFR通过传递表皮生长因子和转化生长因子的信息，对肝再生调控起着一定作用，它在肝硬变过程中的变化和作用尚未完全阐明. 作者采用复合因子复制出大鼠肝硬变动物模型，以免疫组化法结合显微定量分析对EGFR(表皮生长因子受体)在肝硬变进程中肝细胞核阳性表达的动态变化进行了研究.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 雄性Wistar大鼠40只，本校动物中心提供，体重230g～250g，分为肝硬变组(n=32)和正常对照组(n=8). 正常对照组常规饲养3d，不作任何处理. 肝硬变组采用我所建立的方法，使用复合因子复制模型[1].
1.2 方法 分别于肝硬变进程第2，4，6和8wk末在乙醚轻微麻醉下采腹主动脉血(每组8只)测ALT(赖氏法)，TB(固兰B法)和BUN(二乙酰异肟法). 之后取肝左叶放入100ml/L中性福尔马林固定，石蜡包埋，5μm切片，作免疫组化及HE和VG染色.
免疫组化染色采用SP法. SPTM试剂盒购自ZYMED公司，EGFR-抗购自Santa Cruz生物技术公司. 部分标本连续切片(每组6例)，作免疫组化染色后，每张切片随机选取5个视野，用网格计数器(0.09mm2)在×400光镜下计数EGFR肝细胞阳性细胞核数，并计算NA[2].
, 百拇医药
统计学处理 采用方差分析，q检验. 数据以x-±s表示，α取0.05.
2 结果
HE和VG染色显示2wk末肝细胞广泛变性和灶状坏死，为变性坏死期；4wk末肝组织变性坏死依然存在，汇管区见纤维结缔组织增生，是肝纤维化期；6wk末肝内形成完整的薄纤维间隔，假小叶形成，为肝硬变早期，8wk末假小叶周围纤维间隔显著增宽，肝细胞数目相对减少，为肝硬变晚期. 免疫组化染色EGFR阳性表达可存在于细胞核与胞质. 随着肝硬变发展，胞质和核阳性程度都有提高. 肝细胞核阳性数(Na/mm2)正常为0.8±0.4，2wk末最多(n=6,208.6±40.0)，此后逐渐减少(164.8±31.0，124.7±25.2，85.3±26.5)，但均较正常对照组为高. 腹主动脉血生化测定结果见表1.
表1 肝硬变各期生化测定结果 (n=8)
, http://www.100md.com
aP<0.05，vs 正常对照组.
3 讨论
EGFR在肝细胞核和肝细胞膜中均有分布[3]. 体内外实验均表明表皮生长因子和转化生长因子α通过EGFR可强烈刺激肝细胞增殖，从而起到抗损伤作用. EGFR为表皮生长因子和转化生长因子α在肝细胞的唯一受体，因此它作为一种信息传递途径在表皮生长因子和转化生长因子α的促肝细胞再生作用中起着关键作用. 静脉内注射表皮生长因子后的肝脏与肝脏部分切除后的再生肝细胞同样可有EGFRmRNA表达增加[4]. 从再生肝脏中分离到的肝细胞核较对照组能更多地与表皮生长因子结合，从而起到促肝细胞再生作用. EGFR在肝细胞核的表达与增殖细胞核抗原也有很强的相关性[5]，因此观察EGFR在核的表达情形可间接反映肝细胞再生情况. 损伤肝脏是否存在肝细胞再生能力降低有两种不同意见. 肝纤维化大鼠作部分肝切除后发现其肝再生能力下降[6]，但胆汁性肝硬变大鼠在其28d的观察期中却未发现肝再生能力降低[5].
, 百拇医药
我们的实验中，EGFR在肝细胞核的表达，各实验组均高于正常对照组. 实验组中以2wk末为最高，2wk末后，EGFR的阳性核数渐次减少，说明在复合因子肝硬变动物模型中有因EGFR表达减少引起的肝再生能力降低. 究其原因可能是致病因素持续存在造成的肝细胞不断出现变性和坏死有关. 因为在肝纤维化过程中肝细胞损伤的生化指标均持续在增高水平.
由此可见，肝硬变的形成不仅与肝细胞变性、坏死及纤维结缔组织增生有关，也和肝细胞表达EGFR减少导致的再生能力下降，再生肝细胞不足以弥补损伤肝细胞相关，最终导致肝纤维结缔组织增生速度大于肝细胞再生速度，从而出现肝细胞结节状再生.
4 参考文献
1 韩德五，马学惠，赵元昌. 肝硬变动物模型的研究. 山西医药杂志，1979；4(1)：1-5
, 百拇医药
2 郑富盛.细胞立体计量学.第1版. 北京：中国协和医科大学. 北京医科大学联合出版社，1996：86-87
3 Marti U, Burwen SJ, Barker ME, Huling S, Feren AM. Localization of epidermal growth factor receptor in hepatocyte
nuclear. Hepatology,1991;13(1):15-20.
4 Johansson S,Andersson G.Similar induction of the hepatic EGF receptor in vivo by EGF and partial hepatectomy.Biochem Biophys
Res Commun,1990;166(2):661-666
, http://www.100md.com
5 Zimmermann H, Ganz P, Zimmermann A, Oguey D, Marti U, Reichen J. The overexpression of proliferating cell nuclear antigen in
biliary cirrhosis in the rat and its relationship with epidermal growth factor receptor. J Hepatol, 1995;23(3):459-464
6 Chijiiwa K, Nakano K, Nagai E, Tanaka M. Proliferating cell nuclear antigen, plasma fibronectin, and liver regeneration rate after
seventy percent hepatectomy in normal and cirrhotic rats. Surgery, 1994;116(3):544-549, http://www.100md.com(闫晋平 贾晋斌 马学惠 武希润 赵元昌 韩德五)
1研究生，现在山西中医学院病理教研室
2现在山西医科大学第二医院消化科
闫晋平，男，1957-10-10生，山西省临县人，汉族. 1983年华西医科大学临床医学系本科毕业，1996年获山西医科大学医学硕士学位，主要从事消化系疾病研究，发表论文6篇.
项目负责人 闫晋平，030001，山西省太原市，山西医科大学肝病研究所，山西省太原市晋祠路19号.
基金资助 本课题为卫生部基金资助项目，No.2179412.*Project supported by the Chinese Ministry of Public Health, No. 2179412.
, http://www.100md.com
Correspondence to Jin-Ping Yan, Institute of Hepatic Diseases, Shanxi Medical University, 19 Jinsilu, Taiyuan 030001, China
Tel. +86·351·6042310-5434
收稿日期 1997-06-15 接收日期1997-09-03
Immunohistochemical study on expression of epidermal growth factor receptor at hepatocyte nuclei in
experimental rat liver cirrhosis*
, 百拇医药
Jin-Ping Yan, Jin-Bin Jia,Xue-Hui Ma, Xi-Run Wu, Yuan-Chang Zhao and De-Wu Han
Institute of Hepatic Diseases, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
Abstract
AIM To study the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) at hepatocyte nuclei in rat cirrhotic liver and its role in liver regeneration.
, 百拇医药
METHODS In experimental cirrhosis rats (n=32) induced with CCl4 and dietetic factors and normal rats (n=8), the EGFR expression in hepatocyte nuclei was studied by immunohistochemical method.
RESULTS The number of EGFR positive nuclei (/mm2) averaged 0.8±0.4 in the control group. They increased to 208.6±39.8， 164.8±31.1， 124.7±25.2 and 85.3±26.5 at the end of 2nd, 4th, 6th and 8th week (P<0.05). The peak was at the end of the 2nd week and the number of positive nuclei was decreased from then on.
, 百拇医药
CONCLUSION Because of decreased EGFR expression in hepatocyte nuclei, there is a reduced capacity of liver regeneration
in rat model.
Subject headings liver cirrhosis, experimental/metabolism; receptors, epidermal growth factor-urogastrone/metabolism; liver/metabolism; immunohistochemistry
Yan JP, Jia JB, Ma XH, Wu XR, Zhao YC, Han DW. Immunohistochemical study on expression of epidermal growth factor receptor at hepatocyte nuclei in experimental rat liver cirrhosis. Huaren Xiaohua Zazhi, 1998;6(1):15-16
, 百拇医药
摘要
目的 探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在肝硬变过程中的表达和对肝再生的作用.
方法 采用复合因子复制肝硬变动物模型(n=32)，正常大鼠(n=8)作对照，用免疫组化研究肝硬变过程中肝细胞核EGFR表达的变化.
结果 实验组动物EGFR阳性肝细胞核数(/mm-2)于肝硬变进程2，4，6和8wk末分别为208.6±39.8，164.8±31.1，124.7±25.2，85.3±26.5. 而对照组仅为0.8±0.4.
结论 大鼠实验性肝硬变模型存在着EGFR表达减少引起的肝再生能力下降.
, 百拇医药
主题词 肝硬变，实验性/代谢；受体，表皮生长因子尿抑胃素/代谢；肝/代谢；免疫组织化学
闫晋平, 贾晋斌, 马学惠, 武希润, 赵元昌, 韩德五. 实验性肝硬变时表皮生长因子受体在肝细胞核表达的免疫组织化学研究.
华人消化杂志, 1998;6(1):15-16
0 引言
肝硬变的形成源于肝细胞持续性变性、坏死基础上出现肝内纤维结缔组织增生和肝细胞的结节状再生. EGFR通过传递表皮生长因子和转化生长因子的信息，对肝再生调控起着一定作用，它在肝硬变过程中的变化和作用尚未完全阐明. 作者采用复合因子复制出大鼠肝硬变动物模型，以免疫组化法结合显微定量分析对EGFR(表皮生长因子受体)在肝硬变进程中肝细胞核阳性表达的动态变化进行了研究.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 雄性Wistar大鼠40只，本校动物中心提供，体重230g～250g，分为肝硬变组(n=32)和正常对照组(n=8). 正常对照组常规饲养3d，不作任何处理. 肝硬变组采用我所建立的方法，使用复合因子复制模型[1].
1.2 方法 分别于肝硬变进程第2，4，6和8wk末在乙醚轻微麻醉下采腹主动脉血(每组8只)测ALT(赖氏法)，TB(固兰B法)和BUN(二乙酰异肟法). 之后取肝左叶放入100ml/L中性福尔马林固定，石蜡包埋，5μm切片，作免疫组化及HE和VG染色.
免疫组化染色采用SP法. SPTM试剂盒购自ZYMED公司，EGFR-抗购自Santa Cruz生物技术公司. 部分标本连续切片(每组6例)，作免疫组化染色后，每张切片随机选取5个视野，用网格计数器(0.09mm2)在×400光镜下计数EGFR肝细胞阳性细胞核数，并计算NA[2].
, 百拇医药
统计学处理 采用方差分析，q检验. 数据以x-±s表示，α取0.05.
2 结果
HE和VG染色显示2wk末肝细胞广泛变性和灶状坏死，为变性坏死期；4wk末肝组织变性坏死依然存在，汇管区见纤维结缔组织增生，是肝纤维化期；6wk末肝内形成完整的薄纤维间隔，假小叶形成，为肝硬变早期，8wk末假小叶周围纤维间隔显著增宽，肝细胞数目相对减少，为肝硬变晚期. 免疫组化染色EGFR阳性表达可存在于细胞核与胞质. 随着肝硬变发展，胞质和核阳性程度都有提高. 肝细胞核阳性数(Na/mm2)正常为0.8±0.4，2wk末最多(n=6,208.6±40.0)，此后逐渐减少(164.8±31.0，124.7±25.2，85.3±26.5)，但均较正常对照组为高. 腹主动脉血生化测定结果见表1.
表1 肝硬变各期生化测定结果 (n=8)
| 组别 | ALT(mmol/S) | TB(μmol/L) | BUN(mmol/L) |
| 正常对照 | 1.12±0.14 | 11.87±2.05 | 3.65±0.81 |
| 2wk | 4.05±0.49a | 13.29±0.92 | 3.82±0.72 |
| 4wk | 4.98±0.36a | 13.29±1.76 | 4.53±0.51 |
| 6wk | 4.75±0.44a | 20.28±1.67a | 5.90±1.94a |
| 8wk | 4.79±0.44a | 21.80±1.86a | 5.85±2.57a |
, http://www.100md.com
aP<0.05，vs 正常对照组.
3 讨论
EGFR在肝细胞核和肝细胞膜中均有分布[3]. 体内外实验均表明表皮生长因子和转化生长因子α通过EGFR可强烈刺激肝细胞增殖，从而起到抗损伤作用. EGFR为表皮生长因子和转化生长因子α在肝细胞的唯一受体，因此它作为一种信息传递途径在表皮生长因子和转化生长因子α的促肝细胞再生作用中起着关键作用. 静脉内注射表皮生长因子后的肝脏与肝脏部分切除后的再生肝细胞同样可有EGFRmRNA表达增加[4]. 从再生肝脏中分离到的肝细胞核较对照组能更多地与表皮生长因子结合，从而起到促肝细胞再生作用. EGFR在肝细胞核的表达与增殖细胞核抗原也有很强的相关性[5]，因此观察EGFR在核的表达情形可间接反映肝细胞再生情况. 损伤肝脏是否存在肝细胞再生能力降低有两种不同意见. 肝纤维化大鼠作部分肝切除后发现其肝再生能力下降[6]，但胆汁性肝硬变大鼠在其28d的观察期中却未发现肝再生能力降低[5].
, 百拇医药
我们的实验中，EGFR在肝细胞核的表达，各实验组均高于正常对照组. 实验组中以2wk末为最高，2wk末后，EGFR的阳性核数渐次减少，说明在复合因子肝硬变动物模型中有因EGFR表达减少引起的肝再生能力降低. 究其原因可能是致病因素持续存在造成的肝细胞不断出现变性和坏死有关. 因为在肝纤维化过程中肝细胞损伤的生化指标均持续在增高水平.
由此可见，肝硬变的形成不仅与肝细胞变性、坏死及纤维结缔组织增生有关，也和肝细胞表达EGFR减少导致的再生能力下降，再生肝细胞不足以弥补损伤肝细胞相关，最终导致肝纤维结缔组织增生速度大于肝细胞再生速度，从而出现肝细胞结节状再生.
4 参考文献
1 韩德五，马学惠，赵元昌. 肝硬变动物模型的研究. 山西医药杂志，1979；4(1)：1-5
, 百拇医药
2 郑富盛.细胞立体计量学.第1版. 北京：中国协和医科大学. 北京医科大学联合出版社，1996：86-87
3 Marti U, Burwen SJ, Barker ME, Huling S, Feren AM. Localization of epidermal growth factor receptor in hepatocyte
nuclear. Hepatology,1991;13(1):15-20.
4 Johansson S,Andersson G.Similar induction of the hepatic EGF receptor in vivo by EGF and partial hepatectomy.Biochem Biophys
Res Commun,1990;166(2):661-666
, http://www.100md.com
5 Zimmermann H, Ganz P, Zimmermann A, Oguey D, Marti U, Reichen J. The overexpression of proliferating cell nuclear antigen in
biliary cirrhosis in the rat and its relationship with epidermal growth factor receptor. J Hepatol, 1995;23(3):459-464
6 Chijiiwa K, Nakano K, Nagai E, Tanaka M. Proliferating cell nuclear antigen, plasma fibronectin, and liver regeneration rate after
seventy percent hepatectomy in normal and cirrhotic rats. Surgery, 1994;116(3):544-549, http://www.100md.com(闫晋平 贾晋斌 马学惠 武希润 赵元昌 韩德五)