Hp感染胃粘膜IL 8及ICAM 1的免疫组化研究
1湖北医科大学第二医院消化内科 湖北省武汉市 430071
2北京市肿瘤研究所免疫室 北京市 100034
3北京医科大学第一医院胃肠科 北京市 100034
朱尤庆，男，1952-01-12生 医学博士，副教授、硕士导师，消化内科主任，主要从事Hp相关性胃十二指肠疾病的免疫学研究，曾赴荷兰马斯特里赫特大学医院进行酒精性肝病合作研究，发表论文20篇.
项目负责人 朱尤庆，430071，湖北医科大学第二医院消化内科，湖北省武汉市武昌区东湖路169号.
Correspondence to ZHU You-Qing, Department of Gastroenterology, 2nd Teaching Hospital, Hubei Medical University, 169 Donghulu, Wuchang District, Wuhan 430071, Hubei Province, China
, http://www.100md.com
Tel. +86·27·7317541
收稿日期 1998-01-20 接收日期 1998-03-09
Immunohistochemical study of IL 8 and ICAM 1 in gastric mucosa with H.pylori infection
You-Qing Zhu1, Zuo-Liang Xu2 and Bo-Qi Jia3
Department of Gastroenterology, 2nd Teaching Hospital, Hubei Medical University, Wuhan 430071, Hubei Province, China
, 百拇医药
Abstract
AIMTo determine the changes of IL 8 and ㊣CAM 1 in gastric mucosa with Hp infection and to evaluate their possible roles in the pathogenesis of gastric mucosal inflammation of Hp related gastroduodenal diseases.
METHODS Biopsy specimens were taken from the antral mucosa at endoscopy in patients with or without Hp infection, which were diagnosed by urease test, bacterial culture and Warthing-Starry stain. Crystal sections (6μm) of gastric mucosa were performed. The degree of gastric mucosal inflammation were determined under light microscope according to Carrick＇s criteria. The expression of IL 8 and ICAM 1 in gastric mucosa was stained by the immunohistochemical method.
, http://www.100md.com
RESULTS Inflammation of gastric antral mucosa was more severe in Hp+ group than that in Hp-. The active inflammation was often accompanied on the basis of chronical inflammation in Hp positive mucosa. The expression rate of IL 8 and ICAM 1 was 66.7% (8/12) and 60.0%(9/15) in Hp+ group, while it was only 40.0%(4/10) in Hp- group. The sites of expression were mainly in the gastric interstitial mononuclear cells and the glandular epithelial cells.
, 百拇医药
CONCLUSION There is a higher rate of IL 8 and ICAM 1 expression in Hp+ gastric mucosa. IL 8 and ICAM 1 may play an important role in the local gastric mucosal inflammatory infiltration with a large amount of neutrophils and lymphocytes when there is Hp infection.
Subject headings Helicobacter pylori; Helicobacter infections; gastric mucosa; interleukin-8; gastritis; immunohistochemistry
Zhu YQ, Xu ZL, Jia BQ. Immunohistochemical study of IL 8 and ICAM 1 in gastric mucosa with H.pylori infection.
, 百拇医药
Huaren Xiaohua Zazhi,1998;6(4):329-331
摘要
目的 检测Hp感染胃粘膜IL-8和ICAM 1的变化，探讨其在Hp相关性胃十二指肠疾病发病机制中的可能作用.
方法 内镜下采取胃窦粘膜活检标本.经尿素酶试验、Hp培养和Warshing Starry染色确定有无Hp感染；恒冷箱胃粘膜切片(6μm)，光镜下按Carrick标准作胃粘膜炎症分级，免疫 刚衬お㊣L-8和ICAM 1的表达.
结果 Hp+胃粘膜炎症重于Hp-者，在慢性炎症基础上常常合并有活动性炎症；IL-8和ICAM 1表达在Hp+胃粘膜分别为66.7%(8/12)和60.0%
, 百拇医药
(9/15)，而Hp-者均为40.0%(4/10)；其表达部位主要位于胃间质单个核细胞和腺上皮细胞.
结论 Hp阳性胃粘膜IL-8及ICAM-1表达较高，提示Hp感染时IL-8和ICAM-1在胃粘膜局部大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润中可能起重要作用.
主题词 螺杆菌，幽门；螺杆菌感染；胃粘膜；白细胞介素8；胃炎；免疫组织化学；细胞间粘附分子1
朱尤庆, 许佐良, 贾博琦.Hp感染胃粘膜IL 8及ICAM 1的免疫组化研究.华人消化杂志,1998;6(4):329-331
0 引言
Hp感染与慢性胃炎密切相关. 慢性胃炎的主要病理特征是粘膜固有层内有大量炎性细胞浸润. Hp定居于胃粘液下、胃粘膜表面，并不侵入胃粘膜内，其引起炎性细胞浸润的机制尚不明了. 研究表明，Hp感染时胃粘膜内IL 8等细胞因子活性增高，可能参与了胃炎的形成过程. 我们采用免疫组化方法，检测Hp感染患者胃粘膜ICAM 1及 IL 8等细胞因子，探讨其在胃炎形成中的病理与临床意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 对象 1991-10/1992-05在北医大一院内科门诊申请内镜检查的胃十二指肠疾病患者47例. 检测IL 8者22例. 男15例，女7例，年龄35岁～64岁，平均45.8岁. 内镜及病理诊断慢性胃炎15例，消化性溃疡6例，正常胃1例. 经尿素酶试验、Hp培养及Warshing-Starry 染色，诊断Hp(+)12例，Hp(-)10例.检测ICAM 1者25例. 男20例，女5例，年龄25岁～ 74岁，平均48.3岁.其中慢性胃炎15例，消化性溃疡8例，胃癌及正常胃各1例. Hp(+) 15例，Hp(-)10例.
1.2 方法
1.2.1 试剂 抗IL 8mAb，IgG1亚类，5g/L，(Sondoz Forshung Sinstitut, Wien). 抗ICAM 1(CD54)mAb，IgG1亚类，杂交瘤上清(Dept of Medicine, Royal Postgraguate Medical School, London). LSAB免疫组化试剂盒(Dako公司产品，中山试剂公司分装). 正常小鼠IgG，1g/L，北医大基础医学院免疫教研室提供.
, 百拇医药
1.2.2 免疫组化 胃窦活检标本摄取后，用OCT包埋，液氮内速冻，置-70℃冰箱内冻存.常规-20℃恒冷 箱冰冻连续切片，厚度6μm，风干后贮于-20℃冰箱内待测. 染色前，切片按1，5，9， 2，6，10顺序，每份标本选出6张邻片. 切片经PBS(0.1mol/L，pH 7.2)浸洗 5min，再以3mL/L HO2-甲醇液浸泡30min，以除去内源性过氧化 物酶. PBS浸洗5min×2次，将抗IL 8， ICAM 1抗体(一抗)分别加入每份标本的3张受检片上，每片20μL，切片置湿盒内，4℃孵育24h. PBS冲洗终止一抗，浸 洗5min×2次，加生物素化兔抗鼠IgG(二抗，1∶400稀释) )，每片30μL，37℃孵育30min. PBS冲洗终止二抗，如上浸洗后加streptavidin(三抗，1∶400稀释)，每片30μL，37℃孵育30min. PBS冲洗、浸洗后，加0.5g/L DAB-0.1mL/ L H2O2-PBS，30μL/片，显色7min～10min，自来水冲洗终止 反应. Mayer-苏木精复染2min，自来水冲洗5min使之蓝化. 切片经梯度乙醇及 二甲苯脱水、树胶封片. 实验设对照片. 正常小鼠IgG代Ⅰ抗，免Ⅰ抗及免Ⅱ，Ⅲ抗共3张 片，染色程序同上.
, 百拇医药
统计学处理 胃粘膜切片IL 8及ICAM 1免疫组化染色结果，按半定量方法统计，使用四格表确切概率法(Fisher＇s exact probability)进行统计学分析.
2 结果
2.1 IL 8 22例的胃粘膜病理及免疫组化结果表1.
表1 Hp感染、胃粘膜病理及IL 8免疫组化结果
, http://www.100md.com
2.2 ICAM 1 25例的胃粘膜病理及免疫组化结果表2.
表2 Hp感染、胃粘膜病理及ICAM 1免疫组化结果
, 百拇医药
2.3 IL 8与ICAM 1相关性 检测12例患者 (Hp+与Hp-各6例)同一块标本胃粘膜病理及IL 8及ICAM 1的免疫组化结果 表3.
表3 同一块标本胃粘膜病理及免疫组化结果
, 百拇医药
本结果显示，胃粘膜炎症在Hp(-)组与Hp(+)组明显不同，Hp(-)时胃粘膜主要表现为慢性炎 症，而Hp(+)时则在慢性炎症基础上常伴有明显的活动性炎症. 免疫组化染色，IL 8及 ICAM 1的表达在Hp(+)组比Hp(-)组为多，前者分别为66.7%(8/12例)及60.0% (9/15例)，后者均为40.0%(4/10例).两组间无统计学意义. IL 8及ICA M 1的表达部位主要在间质单个核细胞及腺上皮细胞；表3结果亦未能显示出同一块标本 IL 8及ICAM 1表达在两组间的明显差异.
3 讨论
Hp感染胃粘膜炎性细胞因子变化的研究，尚未见国内文献报道. 我们应用免疫组化方法， 对Hp(+)与Hp(-)胃粘膜ICAM 1及IL 8等炎性细胞因子进行检测，以期揭示 他们在Hp相关性胃炎中的可能作用. IL 8激活与趋化中性粒细胞及淋巴细胞的作用， 已经大量体内外实验所证实. ICAM 1则是细胞粘附的物质基，也是引起中性粒细胞、淋巴细胞向局部组织浸润过程中的关键一环，其表达受局部IL 1，6，8等细胞因子及PAF等脂类炎性递质的调节. Crabtee et al 研究发现，正常胃粘膜可产 生分泌IL 8，但当有胃粘膜炎症特别是Hp感染时，胃粘膜 IL 8的含量明显增高，且其增高程度与胃粘膜炎症的活动性密切相关. 曾宁心et al 也证实Hp可刺激单个核细胞分泌IL 8. 以上研究提示，当Hp感染或其他病理条件下，IL 8表达增多，一方面可引起大量中性粒细胞、淋巴细胞向局部组织的浸 润，进而参入粘膜的炎性损害过程，同时对清除外来入侵病原体可能起重要作用.
本资料显示，Hp感染时，胃粘膜常常伴有活动性炎症. IL 8及ICAM 1的表达增加，推测二者在Hp相关性胃炎胃粘膜局部炎性细胞浸润中可能具有协同作用. 然而，Scheynius et al 报道，Hp相关性胃炎患者胃粘膜未见有ICAM 1的表达. 另外，本组12例患者同一块标本IL 8及ICAM 1的表达，与Hp感染状态及粘膜炎症程度未能显示出相关性，也令人费解. 以上结果不一致的原因，或许因为研究方法不同， 抗体来源不一、人群差异或标本抽样误差等所致, 百拇医药(朱尤庆1 许佐良2 贾博琦3)
2北京市肿瘤研究所免疫室 北京市 100034
3北京医科大学第一医院胃肠科 北京市 100034
朱尤庆，男，1952-01-12生 医学博士，副教授、硕士导师，消化内科主任，主要从事Hp相关性胃十二指肠疾病的免疫学研究，曾赴荷兰马斯特里赫特大学医院进行酒精性肝病合作研究，发表论文20篇.
项目负责人 朱尤庆，430071，湖北医科大学第二医院消化内科，湖北省武汉市武昌区东湖路169号.
Correspondence to ZHU You-Qing, Department of Gastroenterology, 2nd Teaching Hospital, Hubei Medical University, 169 Donghulu, Wuchang District, Wuhan 430071, Hubei Province, China
, http://www.100md.com
Tel. +86·27·7317541
收稿日期 1998-01-20 接收日期 1998-03-09
Immunohistochemical study of IL 8 and ICAM 1 in gastric mucosa with H.pylori infection
You-Qing Zhu1, Zuo-Liang Xu2 and Bo-Qi Jia3
Department of Gastroenterology, 2nd Teaching Hospital, Hubei Medical University, Wuhan 430071, Hubei Province, China
, 百拇医药
Abstract
AIMTo determine the changes of IL 8 and ㊣CAM 1 in gastric mucosa with Hp infection and to evaluate their possible roles in the pathogenesis of gastric mucosal inflammation of Hp related gastroduodenal diseases.
METHODS Biopsy specimens were taken from the antral mucosa at endoscopy in patients with or without Hp infection, which were diagnosed by urease test, bacterial culture and Warthing-Starry stain. Crystal sections (6μm) of gastric mucosa were performed. The degree of gastric mucosal inflammation were determined under light microscope according to Carrick＇s criteria. The expression of IL 8 and ICAM 1 in gastric mucosa was stained by the immunohistochemical method.
, http://www.100md.com
RESULTS Inflammation of gastric antral mucosa was more severe in Hp+ group than that in Hp-. The active inflammation was often accompanied on the basis of chronical inflammation in Hp positive mucosa. The expression rate of IL 8 and ICAM 1 was 66.7% (8/12) and 60.0%(9/15) in Hp+ group, while it was only 40.0%(4/10) in Hp- group. The sites of expression were mainly in the gastric interstitial mononuclear cells and the glandular epithelial cells.
, 百拇医药
CONCLUSION There is a higher rate of IL 8 and ICAM 1 expression in Hp+ gastric mucosa. IL 8 and ICAM 1 may play an important role in the local gastric mucosal inflammatory infiltration with a large amount of neutrophils and lymphocytes when there is Hp infection.
Subject headings Helicobacter pylori; Helicobacter infections; gastric mucosa; interleukin-8; gastritis; immunohistochemistry
Zhu YQ, Xu ZL, Jia BQ. Immunohistochemical study of IL 8 and ICAM 1 in gastric mucosa with H.pylori infection.
, 百拇医药
Huaren Xiaohua Zazhi,1998;6(4):329-331
摘要
目的 检测Hp感染胃粘膜IL-8和ICAM 1的变化，探讨其在Hp相关性胃十二指肠疾病发病机制中的可能作用.
方法 内镜下采取胃窦粘膜活检标本.经尿素酶试验、Hp培养和Warshing Starry染色确定有无Hp感染；恒冷箱胃粘膜切片(6μm)，光镜下按Carrick标准作胃粘膜炎症分级，免疫 刚衬お㊣L-8和ICAM 1的表达.
结果 Hp+胃粘膜炎症重于Hp-者，在慢性炎症基础上常常合并有活动性炎症；IL-8和ICAM 1表达在Hp+胃粘膜分别为66.7%(8/12)和60.0%
, 百拇医药
(9/15)，而Hp-者均为40.0%(4/10)；其表达部位主要位于胃间质单个核细胞和腺上皮细胞.
结论 Hp阳性胃粘膜IL-8及ICAM-1表达较高，提示Hp感染时IL-8和ICAM-1在胃粘膜局部大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润中可能起重要作用.
主题词 螺杆菌，幽门；螺杆菌感染；胃粘膜；白细胞介素8；胃炎；免疫组织化学；细胞间粘附分子1
朱尤庆, 许佐良, 贾博琦.Hp感染胃粘膜IL 8及ICAM 1的免疫组化研究.华人消化杂志,1998;6(4):329-331
0 引言
Hp感染与慢性胃炎密切相关. 慢性胃炎的主要病理特征是粘膜固有层内有大量炎性细胞浸润. Hp定居于胃粘液下、胃粘膜表面，并不侵入胃粘膜内，其引起炎性细胞浸润的机制尚不明了. 研究表明，Hp感染时胃粘膜内IL 8等细胞因子活性增高，可能参与了胃炎的形成过程. 我们采用免疫组化方法，检测Hp感染患者胃粘膜ICAM 1及 IL 8等细胞因子，探讨其在胃炎形成中的病理与临床意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 对象 1991-10/1992-05在北医大一院内科门诊申请内镜检查的胃十二指肠疾病患者47例. 检测IL 8者22例. 男15例，女7例，年龄35岁～64岁，平均45.8岁. 内镜及病理诊断慢性胃炎15例，消化性溃疡6例，正常胃1例. 经尿素酶试验、Hp培养及Warshing-Starry 染色，诊断Hp(+)12例，Hp(-)10例.检测ICAM 1者25例. 男20例，女5例，年龄25岁～ 74岁，平均48.3岁.其中慢性胃炎15例，消化性溃疡8例，胃癌及正常胃各1例. Hp(+) 15例，Hp(-)10例.
1.2 方法
1.2.1 试剂 抗IL 8mAb，IgG1亚类，5g/L，(Sondoz Forshung Sinstitut, Wien). 抗ICAM 1(CD54)mAb，IgG1亚类，杂交瘤上清(Dept of Medicine, Royal Postgraguate Medical School, London). LSAB免疫组化试剂盒(Dako公司产品，中山试剂公司分装). 正常小鼠IgG，1g/L，北医大基础医学院免疫教研室提供.
, 百拇医药
1.2.2 免疫组化 胃窦活检标本摄取后，用OCT包埋，液氮内速冻，置-70℃冰箱内冻存.常规-20℃恒冷 箱冰冻连续切片，厚度6μm，风干后贮于-20℃冰箱内待测. 染色前，切片按1，5，9， 2，6，10顺序，每份标本选出6张邻片. 切片经PBS(0.1mol/L，pH 7.2)浸洗 5min，再以3mL/L HO2-甲醇液浸泡30min，以除去内源性过氧化 物酶. PBS浸洗5min×2次，将抗IL 8， ICAM 1抗体(一抗)分别加入每份标本的3张受检片上，每片20μL，切片置湿盒内，4℃孵育24h. PBS冲洗终止一抗，浸 洗5min×2次，加生物素化兔抗鼠IgG(二抗，1∶400稀释) )，每片30μL，37℃孵育30min. PBS冲洗终止二抗，如上浸洗后加streptavidin(三抗，1∶400稀释)，每片30μL，37℃孵育30min. PBS冲洗、浸洗后，加0.5g/L DAB-0.1mL/ L H2O2-PBS，30μL/片，显色7min～10min，自来水冲洗终止 反应. Mayer-苏木精复染2min，自来水冲洗5min使之蓝化. 切片经梯度乙醇及 二甲苯脱水、树胶封片. 实验设对照片. 正常小鼠IgG代Ⅰ抗，免Ⅰ抗及免Ⅱ，Ⅲ抗共3张 片，染色程序同上.
, 百拇医药
统计学处理 胃粘膜切片IL 8及ICAM 1免疫组化染色结果，按半定量方法统计，使用四格表确切概率法(Fisher＇s exact probability)进行统计学分析.
2 结果
2.1 IL 8 22例的胃粘膜病理及免疫组化结果表1.
表1 Hp感染、胃粘膜病理及IL 8免疫组化结果
| Hp | n | 慢性炎症 | 急性炎症 | IL 8组化 | |||||
| 轻 | 中 | 重 | 轻 | 中 | 重 | (+) | (-) | ||
| (+) | 12 | 2 | 10 | 0 | 3 | 3 | 4 | 8 | 4 |
| (-) | 10 | 5 | 4 | 0 | 0 | 0 | 1 | 4 | 6 |
, http://www.100md.com
2.2 ICAM 1 25例的胃粘膜病理及免疫组化结果表2.
表2 Hp感染、胃粘膜病理及ICAM 1免疫组化结果
| Hp | n | 慢性炎症 | 急性炎症 | ICAM 1(CD54)组化 | |||||
| 轻 | 中 | 重 | 轻 | 中 | 重 | (+) | (-) | ||
| (+) | 15 | 4 | 7 | 4 | 4 | 4 | 3 | 9 | 6 |
| (-) | 10 | 5 | 4 | 0 | 0 | 0 | 1 | 4 | 6 |
, 百拇医药
2.3 IL 8与ICAM 1相关性 检测12例患者 (Hp+与Hp-各6例)同一块标本胃粘膜病理及IL 8及ICAM 1的免疫组化结果 表3.
表3 同一块标本胃粘膜病理及免疫组化结果
| Hp | n | 慢性炎症 | 急性炎症 | IL 8 | ICAM 1 | ||||
| 轻 | 中 | 重 | 轻 | 中 | 重 | ||||
| (+) | 1 | + | + | - | + | ||||
| 2 | + | + | - | ||||||
| 3 | + | + | + | + | |||||
| 4 | + | + | - | - | |||||
| 5 | + | + | + | + | |||||
| 6 | + | + | - | + | |||||
| (-) | 1 | + | - | - | |||||
| 2 | + | + | - | ||||||
| 3 | + | + | - | ||||||
| 4 | + | + | + | + | |||||
| 5 | + | + | + | ||||||
| 6 | 正常 | - | - |
, 百拇医药
本结果显示，胃粘膜炎症在Hp(-)组与Hp(+)组明显不同，Hp(-)时胃粘膜主要表现为慢性炎 症，而Hp(+)时则在慢性炎症基础上常伴有明显的活动性炎症. 免疫组化染色，IL 8及 ICAM 1的表达在Hp(+)组比Hp(-)组为多，前者分别为66.7%(8/12例)及60.0% (9/15例)，后者均为40.0%(4/10例).两组间无统计学意义. IL 8及ICA M 1的表达部位主要在间质单个核细胞及腺上皮细胞；表3结果亦未能显示出同一块标本 IL 8及ICAM 1表达在两组间的明显差异.
3 讨论
Hp感染胃粘膜炎性细胞因子变化的研究，尚未见国内文献报道. 我们应用免疫组化方法， 对Hp(+)与Hp(-)胃粘膜ICAM 1及IL 8等炎性细胞因子进行检测，以期揭示 他们在Hp相关性胃炎中的可能作用. IL 8激活与趋化中性粒细胞及淋巴细胞的作用， 已经大量体内外实验所证实. ICAM 1则是细胞粘附的物质基，也是引起中性粒细胞、淋巴细胞向局部组织浸润过程中的关键一环，其表达受局部IL 1，6，8等细胞因子及PAF等脂类炎性递质的调节. Crabtee et al 研究发现，正常胃粘膜可产 生分泌IL 8，但当有胃粘膜炎症特别是Hp感染时，胃粘膜 IL 8的含量明显增高，且其增高程度与胃粘膜炎症的活动性密切相关. 曾宁心et al 也证实Hp可刺激单个核细胞分泌IL 8. 以上研究提示，当Hp感染或其他病理条件下，IL 8表达增多，一方面可引起大量中性粒细胞、淋巴细胞向局部组织的浸 润，进而参入粘膜的炎性损害过程，同时对清除外来入侵病原体可能起重要作用.
本资料显示，Hp感染时，胃粘膜常常伴有活动性炎症. IL 8及ICAM 1的表达增加，推测二者在Hp相关性胃炎胃粘膜局部炎性细胞浸润中可能具有协同作用. 然而，Scheynius et al 报道，Hp相关性胃炎患者胃粘膜未见有ICAM 1的表达. 另外，本组12例患者同一块标本IL 8及ICAM 1的表达，与Hp感染状态及粘膜炎症程度未能显示出相关性，也令人费解. 以上结果不一致的原因，或许因为研究方法不同， 抗体来源不一、人群差异或标本抽样误差等所致, 百拇医药(朱尤庆1 许佐良2 贾博琦3)