大肠癌患者外周血树突状细胞免疫功能研究
第一军医大学南方医院消化科 广东省广州市 510515
项目负责人 李明松第一军医大学南方医院消化科 广东省广州市 510515
收稿日期 1998-11-09 接收日期 1998-12-30
Subject headings colorectal neoplasms/immunology; immunity, cellular; dendritic cells
主题词 结直肠肿瘤/免疫学；免疫，细胞；树突状细胞
本实验检测大肠癌患者外周血树突状细胞(DC)表面HLA-DR及B7表达水平，并进一步探讨DC表面HLA-DR及B7表达水平与DC免疫功能的相关性及其在肿瘤逃避宿主免疫监视中的作用及机制.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 1996/1997本院病理确诊Duke C期大肠癌患者11例，男8例，女3例，年龄30岁～65岁，平均49岁，均未接受任何抗肿瘤治疗. 健康成人10例(本校学员)，男女各5例，年龄20岁～24岁，平均21岁.
1.2 方法 参照Thomas方法[1]分离及纯化DC及T细胞. FITC标记的抗CD83 mAb特异性地显示DC，台盼蓝染色检测DC成活率. 以FITC标记的抗HLA-DR及B7 mAb按间接免疫荧光法通过FCM检测肝癌患者及正常人DC表面HLA-DR及B7表达水平(荧光值，VOF)[2]. 检测肝癌及正常人DC诱导自体T淋巴细胞增殖反应. 检测正常人DC表面HLA-DR及B7被抗HLA-DR mAb及抗B7 mAb封闭(抗体与其配体结合处于饱和状态)后其诱导自体T淋巴细胞增殖能力.
, 百拇医药
2 结果
从大肠癌及正常人外周血中分离出的DC经抗CD83 mAb以间接免疫法特异性染色显示DC的纯度达80%，台盼蓝染色显示其活力在90%以上. 大肠癌患者DC表面HLA-DR及B7表达水平(VOF，8.6±1.3及7.9±1.1)均明显低于对照组(VOF，12±1.1及13±0.9)，两者相差显著(P<0.05). 对照组及大肠癌患者DC诱导自体混合T淋巴细胞增殖能力(cpm)分别为11766±110及6870±90，两者相差非常显著(P<0.01). 正常人DC表面HLA-DR及B7被抗HLA-DR mAb及抗B7 mAb封闭后其免疫诱导能力明显下降(cpm,由11766±110降至5908±85)，两者相差非常显著(P<0.01).
3 讨论
宿主对肿瘤的攻击依赖于宿主高效而特异的抗肿瘤免疫，尤其是T细胞免疫. 然而要启动高效而特异的抗肿瘤免疫，宿主抗原递呈细胞，主要是DC，必须具备良好的免疫功能，尤其是DC表面HLA及B7等免疫分子的表达水平. DC表面HLA及B7等免疫分子的正常表达是DC识别、捕捉抗原性物质，识别肿瘤细胞及免疫细胞间信息传递的必须条件之一.
, http://www.100md.com
本实验以正常人作对照，发现大肠癌患者外周血DC表面HLA-DR及B7表达明显低于正常人；大肠癌患者外周血DC表面HLA-DR及B7表达明显低下，其DC诱导免疫能力亦相应低下；封闭正常人DC表面的HLA-DR及B7，则该DC免疫诱导能力亦明显下降. 提示大肠癌患者的DC表面HLA-DR及B7表达水平与DC免疫能力密切相关，DC表面HLA-DR及B7表达水平低下导致DC免疫功能低下，并进一步影响宿主抗肿瘤免疫功能. 同时我们近期的实验还发现，培养人大肠癌细胞系LOVO肿瘤细胞上清液能明显抑制大肠癌患者外周血DC表面HLA-DR及B7表达并进一步抑制DC免疫功能，推测大肠癌患者外周血中可能存在源于肿瘤细胞的细胞因子，该类细胞因子可能通过抑制DC表面HLA-DR及B7等免疫分子表达从而抑制DC免疫功能，导致宿主抗肿瘤免疫无能及肿瘤逃避宿主免疫监视.
4 参考文献
1 Thomas R, Davis LS, Lipsky PE. Isolation and characterization of human peripheral blood dendritic cells.
J Immunol, 1993;150:821-834
2 张君和. 单克隆抗体及细胞免疫实验技术. 第1版. 昆明：云南科技出版社，1986：115-126, 百拇医药(李明松 袁爱力 张万岱 陈学清 张亚历 周殿元)
项目负责人 李明松第一军医大学南方医院消化科 广东省广州市 510515
收稿日期 1998-11-09 接收日期 1998-12-30
Subject headings colorectal neoplasms/immunology; immunity, cellular; dendritic cells
主题词 结直肠肿瘤/免疫学；免疫，细胞；树突状细胞
本实验检测大肠癌患者外周血树突状细胞(DC)表面HLA-DR及B7表达水平，并进一步探讨DC表面HLA-DR及B7表达水平与DC免疫功能的相关性及其在肿瘤逃避宿主免疫监视中的作用及机制.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 1996/1997本院病理确诊Duke C期大肠癌患者11例，男8例，女3例，年龄30岁～65岁，平均49岁，均未接受任何抗肿瘤治疗. 健康成人10例(本校学员)，男女各5例，年龄20岁～24岁，平均21岁.
1.2 方法 参照Thomas方法[1]分离及纯化DC及T细胞. FITC标记的抗CD83 mAb特异性地显示DC，台盼蓝染色检测DC成活率. 以FITC标记的抗HLA-DR及B7 mAb按间接免疫荧光法通过FCM检测肝癌患者及正常人DC表面HLA-DR及B7表达水平(荧光值，VOF)[2]. 检测肝癌及正常人DC诱导自体T淋巴细胞增殖反应. 检测正常人DC表面HLA-DR及B7被抗HLA-DR mAb及抗B7 mAb封闭(抗体与其配体结合处于饱和状态)后其诱导自体T淋巴细胞增殖能力.
, 百拇医药
2 结果
从大肠癌及正常人外周血中分离出的DC经抗CD83 mAb以间接免疫法特异性染色显示DC的纯度达80%，台盼蓝染色显示其活力在90%以上. 大肠癌患者DC表面HLA-DR及B7表达水平(VOF，8.6±1.3及7.9±1.1)均明显低于对照组(VOF，12±1.1及13±0.9)，两者相差显著(P<0.05). 对照组及大肠癌患者DC诱导自体混合T淋巴细胞增殖能力(cpm)分别为11766±110及6870±90，两者相差非常显著(P<0.01). 正常人DC表面HLA-DR及B7被抗HLA-DR mAb及抗B7 mAb封闭后其免疫诱导能力明显下降(cpm,由11766±110降至5908±85)，两者相差非常显著(P<0.01).
3 讨论
宿主对肿瘤的攻击依赖于宿主高效而特异的抗肿瘤免疫，尤其是T细胞免疫. 然而要启动高效而特异的抗肿瘤免疫，宿主抗原递呈细胞，主要是DC，必须具备良好的免疫功能，尤其是DC表面HLA及B7等免疫分子的表达水平. DC表面HLA及B7等免疫分子的正常表达是DC识别、捕捉抗原性物质，识别肿瘤细胞及免疫细胞间信息传递的必须条件之一.
, http://www.100md.com
本实验以正常人作对照，发现大肠癌患者外周血DC表面HLA-DR及B7表达明显低于正常人；大肠癌患者外周血DC表面HLA-DR及B7表达明显低下，其DC诱导免疫能力亦相应低下；封闭正常人DC表面的HLA-DR及B7，则该DC免疫诱导能力亦明显下降. 提示大肠癌患者的DC表面HLA-DR及B7表达水平与DC免疫能力密切相关，DC表面HLA-DR及B7表达水平低下导致DC免疫功能低下，并进一步影响宿主抗肿瘤免疫功能. 同时我们近期的实验还发现，培养人大肠癌细胞系LOVO肿瘤细胞上清液能明显抑制大肠癌患者外周血DC表面HLA-DR及B7表达并进一步抑制DC免疫功能，推测大肠癌患者外周血中可能存在源于肿瘤细胞的细胞因子，该类细胞因子可能通过抑制DC表面HLA-DR及B7等免疫分子表达从而抑制DC免疫功能，导致宿主抗肿瘤免疫无能及肿瘤逃避宿主免疫监视.
4 参考文献
1 Thomas R, Davis LS, Lipsky PE. Isolation and characterization of human peripheral blood dendritic cells.
J Immunol, 1993;150:821-834
2 张君和. 单克隆抗体及细胞免疫实验技术. 第1版. 昆明：云南科技出版社，1986：115-126, 百拇医药(李明松 袁爱力 张万岱 陈学清 张亚历 周殿元)