胃舒胶囊对大鼠慢性萎缩性胃炎癌前病变超微结构的影响
1江苏省中医院神鹿消化病研究所 江苏省南京市 210029
2南京医科大学电镜室 江苏省南京市 210005江苏省中医管理局资助项目，No.9527
项目负责人 陆为民江苏省中医院神鹿消化病研究所 江苏省南京市 210029
收稿日期 1999-05-23
Subject headings gastritis, atrophic/therapy; precancerous lesions; Weishu capsule; Qi deficiency and blood stasis; tonifying Qi activating blood
, 百拇医药
主题词 胃炎，萎缩性/治疗；癌前病变；胃舒胶囊；气虚觯灰气活血
胃舒胶囊根据单兆伟教授多年运用益气活血法治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变的临床经验制成，具有健脾益气、活血消痞之功，临床疗效确切[1]，对实验性大鼠CAG癌前病变也有较好的防治作用[2]，为进一步证实其疗效，我们观察了胃舒胶囊对实验大鼠CAG癌前病变超微结构变化的影响.
1 材料和方法
1.1 材料 健康♂Wistar大鼠125只，体重104g±14g，由南京中医药大学动物实验中心提供，购回后先在本院动物房饲养3d， 以适应本院实验条件；MNNG为Fluka公司产品，盐酸雷尼替丁胶囊，杭州民生药厂生产，批号为950775，维甲酸由上海第二医科大学附属瑞金医院提供，胃舒胶囊(由党参、白术、薏苡仁、枳壳、丹参、仙鹤草等组成，每粒胶囊含生药0.5g)由江苏省中医院制药厂生产，批号为950718.
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 造模方法 根据李春启et al[3-5]方法改进，采用综合法造模，具体方法如下：动物分笼饲养于装有空调的房间内，室温22℃，相对湿度50%. MNNG先用去离子水配成1g/L的储备液(每周配制1次)，4℃冰箱避光保存，用前以自来水稀释为50mg/L浓度的溶液，装入涂有黑漆的避光饮水瓶内给大鼠自由饮用，每24h更换1次药液，造模期间不再给予其他饮水. 盐酸雷尼替丁胶囊按0.03g/(kg·d)ig，1次/d. 饥饱失常：2d喂食，保证足量，1d停食. 造模20wk，可造成大鼠CAG癌前病变气虚血瘀病证结合的动物模型[2]. 125只大鼠随机分为8组，预防实验：正常对照组(10只)：正常饲养，不予造模；模型组(15只)；造模时不予任何药物；维甲酸预防组(15只)：造模同时，按40mg/(kg.d)[3]予维甲酸灌胃，1次/d，至造模结束；胃舒胶囊预防组(15只)：造模同时，按3g/(kg.d)予胃舒胶囊灌胃，1次/d，至造模结束. 治疗实验：正常对照组(10只)：继续常规饲养8wk，至实验结束；自然恢复组(20只)：造模20wk后常规饲养8wk；维甲酸与胃舒胶囊治疗组(各20只)：于造模20wk后给药，给药方法与剂量同预防组，共8wk.
, 百拇医药
1.2.2 电镜观察 各组大鼠在实验结束时，模型组及自然恢复组各死亡5只与11只，维甲酸预防组及治疗组各死亡5只与9只；胃舒胶囊预防组与治疗组各死亡3只与7只，正常对照组无死亡. 各组大鼠禁食24h后全部杀检，剖腹，速取出胃，沿胃大弯剪开，于装有生理盐水的烧杯中漂洗，摊平，在大鼠新鲜胃标本上分别切取腺胃部与胃窦部粘膜1mm×1mm大小各1块，迅速戊二醛4℃充分固定，0.1mol/L的磷酸缓冲液充分冲洗，再用锇酸固定1.5h，丙酮逐级脱水，Epon812环氧树脂包埋，LKB-2088V型超薄切片机切片，经醋酸铀和柠檬酸铅双重染色后，Philips-400型透射电镜观察.
2 结果
正常对照组：胃粘膜上皮细胞游离缘微绒毛整齐、密集，胞膜及核膜完整，细胞器丰富，线粒体及粗面内质网等均未见异常改变，分泌颗粒未见减少. 模型组与自然恢复组：胃粘膜上皮与腺体细胞明显退变，细胞数目较少，细胞间隙增宽，上皮细胞表面微绒毛稀疏、短小、脱落，甚则消失. 胃粘膜上皮异型增生，细胞核形态不整，大小不一，核浆比例增加，核仁增多增大，部分细胞双核或多核，核分裂增多，并可见病理性核分裂. 大部分细胞粗面内质网减少，出现断裂，有的粗面内质网有不同程度扩张和脱颗粒. 高尔基复合体减少，游离核糖体增多. 线粒体大小不一，结构不整，嵴稀疏、断裂或消失，有的出现空化或肿胀，有的线粒体已断裂，甚则破碎. 胞质相对较少，初级和次级溶酶体增多；壁细胞内线粒体变性，分泌小管扩张、断裂、稀疏，主细胞内酶原颗粒减小. 部分区域胃粘膜上皮变性、坏死、脱落，细胞连接复合体欠发达，间质内有淋巴细胞、浆细胞、中性及酸性粒细胞浸润.
, 百拇医药
胃舒胶囊预防组与治疗组：超微结构较模型组及自然恢复组明显减轻，胃粘膜细胞大小、形状较一致，细胞核形状呈圆形、椭圆形，胃粘膜上皮细胞表面微绒毛排列较规整，细胞间连接复合体发育良好. 胞质内含有较多的分泌颗粒，粗面内质网及线粒体结构较规则，少数线粒体轻度肿胀，分泌小管数量较多，排列规整. 主细胞内酶原颗粒较多. 维甲酸预防组与治疗组：与模型组及自然恢复组比，细胞超微结构有一定程度恢复，但与正常对照组，胃舒胶囊预防组及治疗组尚有区别.
3 讨论
CAG是常见病，与胃癌的发生有一定关系，在CAG基础上伴发的肠上皮化生和异型增生，则是胃癌的癌前病变. 我们采用长期(20wk)的饥饱失常，小剂量雷尼替丁灌胃，低浓度MNNG溶液自由饮用，联合造模，复制出了CAG癌前病变气虚血瘀病证结合的动物模型[2]，这对探索中医药治疗CAG癌前病变的方法有重要意义，而维甲酸对MNNG诱导的胃粘膜上皮细胞损伤及大鼠实验性胃粘膜癌前病变有部分阻断和逆转作用[6，7].我们通过透射电镜观察，经MNNG造模的大鼠胃粘膜有典型的CAG癌前病变之病理改变，主要表现在各种细胞器的退行性改变. 线粒体在本病的发生过程中占有重要位置，故有“线粒体病”之称，是胃粘膜萎缩的主要原因，也是CAG脾虚证的病理基础[8]. 此外，电镜观察还显示，大鼠胃粘膜异型增生时，细胞和腺体结构异型均较明显，可见病理性核分裂，与胃癌的结构有许多相似之处，而经胃舒胶囊预防及治疗的大鼠胃粘膜病变明显改善，且较维甲酸显著. 胃舒胶囊能否通过抑制癌基因的激活和抑癌基因的失活，促进“癌前细胞”的凋亡(apoptosis)等分子生物学方面的机制则尚有待进行更深层次的研究.
, 百拇医药
4 参考文献
1 陆为民，单兆伟，沈洪，吴静，朱云华，朱长乐. 胃舒胶囊治疗萎缩性胃炎癌前病变的临床研究. 中国中西医结合杂志，1998；12：721-723
2 陆为民，单兆伟，沈洪，吴静，朱云华，朱长乐. 胃舒胶囊防治萎缩性胃炎癌前病变的实验研究. 华人消化杂志，1998；10：897-899
3 李春启，刘为纹，房殿春. 实验动物胃粘膜癌前病变的模型建立，发生机理及其逆转治疗的研究. 第三军医大学学报，1994；16：5-9
4 杨云，陈小野，郭育芝. 劳倦和饥饱失常引起的大鼠脾虚证模型的造型及实验研究. 中国医药学报，1989；4：65-67
5 范英昌，张斌，胡利明. 大鼠脾气虚型萎缩性胃炎动物模型的实验研究. 天津医药，1994；2：86-88
6 李春启，刘为纹，房殿春. 维甲酸对大鼠实验性腺胃粘膜癌前病变的逆转治疗作用. 中华消化杂志，1994；14：319-321
7 刘卫，房殿春，梁后杰. 维甲酸对甲基硝基亚硝基胍所致胃粘膜上皮细胞损伤的预防作用. 解放军医学杂志，1996；21：333-335
8 任宏义，牛灵地，郝万青，吕越，鲁光华，张玉枝. 慢性萎缩性胃炎脾虚证的病理组织学与超微结构观察.
中国中西医结合杂志，1992；10：593-597, 百拇医药(陆为民1 单兆伟1 吴 静1 沈 洪1 张健宁2)
2南京医科大学电镜室 江苏省南京市 210005江苏省中医管理局资助项目，No.9527
项目负责人 陆为民江苏省中医院神鹿消化病研究所 江苏省南京市 210029
收稿日期 1999-05-23
Subject headings gastritis, atrophic/therapy; precancerous lesions; Weishu capsule; Qi deficiency and blood stasis; tonifying Qi activating blood
, 百拇医药
主题词 胃炎，萎缩性/治疗；癌前病变；胃舒胶囊；气虚觯灰气活血
胃舒胶囊根据单兆伟教授多年运用益气活血法治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变的临床经验制成，具有健脾益气、活血消痞之功，临床疗效确切[1]，对实验性大鼠CAG癌前病变也有较好的防治作用[2]，为进一步证实其疗效，我们观察了胃舒胶囊对实验大鼠CAG癌前病变超微结构变化的影响.
1 材料和方法
1.1 材料 健康♂Wistar大鼠125只，体重104g±14g，由南京中医药大学动物实验中心提供，购回后先在本院动物房饲养3d， 以适应本院实验条件；MNNG为Fluka公司产品，盐酸雷尼替丁胶囊，杭州民生药厂生产，批号为950775，维甲酸由上海第二医科大学附属瑞金医院提供，胃舒胶囊(由党参、白术、薏苡仁、枳壳、丹参、仙鹤草等组成，每粒胶囊含生药0.5g)由江苏省中医院制药厂生产，批号为950718.
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 造模方法 根据李春启et al[3-5]方法改进，采用综合法造模，具体方法如下：动物分笼饲养于装有空调的房间内，室温22℃，相对湿度50%. MNNG先用去离子水配成1g/L的储备液(每周配制1次)，4℃冰箱避光保存，用前以自来水稀释为50mg/L浓度的溶液，装入涂有黑漆的避光饮水瓶内给大鼠自由饮用，每24h更换1次药液，造模期间不再给予其他饮水. 盐酸雷尼替丁胶囊按0.03g/(kg·d)ig，1次/d. 饥饱失常：2d喂食，保证足量，1d停食. 造模20wk，可造成大鼠CAG癌前病变气虚血瘀病证结合的动物模型[2]. 125只大鼠随机分为8组，预防实验：正常对照组(10只)：正常饲养，不予造模；模型组(15只)；造模时不予任何药物；维甲酸预防组(15只)：造模同时，按40mg/(kg.d)[3]予维甲酸灌胃，1次/d，至造模结束；胃舒胶囊预防组(15只)：造模同时，按3g/(kg.d)予胃舒胶囊灌胃，1次/d，至造模结束. 治疗实验：正常对照组(10只)：继续常规饲养8wk，至实验结束；自然恢复组(20只)：造模20wk后常规饲养8wk；维甲酸与胃舒胶囊治疗组(各20只)：于造模20wk后给药，给药方法与剂量同预防组，共8wk.
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1.2.2 电镜观察 各组大鼠在实验结束时，模型组及自然恢复组各死亡5只与11只，维甲酸预防组及治疗组各死亡5只与9只；胃舒胶囊预防组与治疗组各死亡3只与7只，正常对照组无死亡. 各组大鼠禁食24h后全部杀检，剖腹，速取出胃，沿胃大弯剪开，于装有生理盐水的烧杯中漂洗，摊平，在大鼠新鲜胃标本上分别切取腺胃部与胃窦部粘膜1mm×1mm大小各1块，迅速戊二醛4℃充分固定，0.1mol/L的磷酸缓冲液充分冲洗，再用锇酸固定1.5h，丙酮逐级脱水，Epon812环氧树脂包埋，LKB-2088V型超薄切片机切片，经醋酸铀和柠檬酸铅双重染色后，Philips-400型透射电镜观察.
2 结果
正常对照组：胃粘膜上皮细胞游离缘微绒毛整齐、密集，胞膜及核膜完整，细胞器丰富，线粒体及粗面内质网等均未见异常改变，分泌颗粒未见减少. 模型组与自然恢复组：胃粘膜上皮与腺体细胞明显退变，细胞数目较少，细胞间隙增宽，上皮细胞表面微绒毛稀疏、短小、脱落，甚则消失. 胃粘膜上皮异型增生，细胞核形态不整，大小不一，核浆比例增加，核仁增多增大，部分细胞双核或多核，核分裂增多，并可见病理性核分裂. 大部分细胞粗面内质网减少，出现断裂，有的粗面内质网有不同程度扩张和脱颗粒. 高尔基复合体减少，游离核糖体增多. 线粒体大小不一，结构不整，嵴稀疏、断裂或消失，有的出现空化或肿胀，有的线粒体已断裂，甚则破碎. 胞质相对较少，初级和次级溶酶体增多；壁细胞内线粒体变性，分泌小管扩张、断裂、稀疏，主细胞内酶原颗粒减小. 部分区域胃粘膜上皮变性、坏死、脱落，细胞连接复合体欠发达，间质内有淋巴细胞、浆细胞、中性及酸性粒细胞浸润.
, 百拇医药
胃舒胶囊预防组与治疗组：超微结构较模型组及自然恢复组明显减轻，胃粘膜细胞大小、形状较一致，细胞核形状呈圆形、椭圆形，胃粘膜上皮细胞表面微绒毛排列较规整，细胞间连接复合体发育良好. 胞质内含有较多的分泌颗粒，粗面内质网及线粒体结构较规则，少数线粒体轻度肿胀，分泌小管数量较多，排列规整. 主细胞内酶原颗粒较多. 维甲酸预防组与治疗组：与模型组及自然恢复组比，细胞超微结构有一定程度恢复，但与正常对照组，胃舒胶囊预防组及治疗组尚有区别.
3 讨论
CAG是常见病，与胃癌的发生有一定关系，在CAG基础上伴发的肠上皮化生和异型增生，则是胃癌的癌前病变. 我们采用长期(20wk)的饥饱失常，小剂量雷尼替丁灌胃，低浓度MNNG溶液自由饮用，联合造模，复制出了CAG癌前病变气虚血瘀病证结合的动物模型[2]，这对探索中医药治疗CAG癌前病变的方法有重要意义，而维甲酸对MNNG诱导的胃粘膜上皮细胞损伤及大鼠实验性胃粘膜癌前病变有部分阻断和逆转作用[6，7].我们通过透射电镜观察，经MNNG造模的大鼠胃粘膜有典型的CAG癌前病变之病理改变，主要表现在各种细胞器的退行性改变. 线粒体在本病的发生过程中占有重要位置，故有“线粒体病”之称，是胃粘膜萎缩的主要原因，也是CAG脾虚证的病理基础[8]. 此外，电镜观察还显示，大鼠胃粘膜异型增生时，细胞和腺体结构异型均较明显，可见病理性核分裂，与胃癌的结构有许多相似之处，而经胃舒胶囊预防及治疗的大鼠胃粘膜病变明显改善，且较维甲酸显著. 胃舒胶囊能否通过抑制癌基因的激活和抑癌基因的失活，促进“癌前细胞”的凋亡(apoptosis)等分子生物学方面的机制则尚有待进行更深层次的研究.
, 百拇医药
4 参考文献
1 陆为民，单兆伟，沈洪，吴静，朱云华，朱长乐. 胃舒胶囊治疗萎缩性胃炎癌前病变的临床研究. 中国中西医结合杂志，1998；12：721-723
2 陆为民，单兆伟，沈洪，吴静，朱云华，朱长乐. 胃舒胶囊防治萎缩性胃炎癌前病变的实验研究. 华人消化杂志，1998；10：897-899
3 李春启，刘为纹，房殿春. 实验动物胃粘膜癌前病变的模型建立，发生机理及其逆转治疗的研究. 第三军医大学学报，1994；16：5-9
4 杨云，陈小野，郭育芝. 劳倦和饥饱失常引起的大鼠脾虚证模型的造型及实验研究. 中国医药学报，1989；4：65-67
5 范英昌，张斌，胡利明. 大鼠脾气虚型萎缩性胃炎动物模型的实验研究. 天津医药，1994；2：86-88
6 李春启，刘为纹，房殿春. 维甲酸对大鼠实验性腺胃粘膜癌前病变的逆转治疗作用. 中华消化杂志，1994；14：319-321
7 刘卫，房殿春，梁后杰. 维甲酸对甲基硝基亚硝基胍所致胃粘膜上皮细胞损伤的预防作用. 解放军医学杂志，1996；21：333-335
8 任宏义，牛灵地，郝万青，吕越，鲁光华，张玉枝. 慢性萎缩性胃炎脾虚证的病理组织学与超微结构观察.
中国中西医结合杂志，1992；10：593-597, 百拇医药(陆为民1 单兆伟1 吴 静1 沈 洪1 张健宁2)