Ras p21,GST-pi在大肠腺瘤癌变中的表达
潍坊医学院病理学教研室 山东省潍坊市 261042
山东省卫生厅基金资助课题，No.98118.
项目负责人 郭文君潍坊医学院病理学教研室 山东省潍坊市 261042
Tel. +86-536-8213047(O)，8213221(H)
收稿日期 1999-08-10 接收日期 1999-11-19
Subject headings colorectal neoplasms; adenoma; gene expression; immunohistochemistry; ras p21
, 百拇医药
主题词 结直肠癌；腺瘤；癌基因；免疫组织化学
ras p21是ras癌基因共同编码的Mr 21000蛋白质. ras癌基因激活致p21过量表达[1]. 胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-pi)是一种重要的肿瘤标志酶. 较多的研究表明，GST-pi在人体肝肿瘤、胃癌、子宫内膜癌组织中含量显著升高[2-4]. 我们检测大肠腺瘤及其在癌变中ras p21，GST-pi表达状况，观察其分布和量的变化，探讨大肠腺瘤在癌变中两种标记物复合表达的内在联系及其意义.
1 材料和方法
收集本教研室及附属医院病理科结肠肿瘤手术标本及活检材料，大肠腺瘤52例，包括管状腺瘤34例，绒毛状腺瘤18例. 正常结肠粘膜31例，大肠中分化腺癌20例. 标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，HE染色及免疫组化染色. 鼠抗GST-pi单克隆抗体试剂盒为Dako公司产品. 鼠抗ras p21单克隆抗体试剂盒购自北京中山生物技术有限公司. 应用LSAB法，按试剂盒步骤进行免疫组化染色，以TBS代替一抗作为阴性对照，阳性判断标准同参考文献[3].
, 百拇医药
统计学处理 采用χ2检验.
2 结果
ras p21在正常粘膜、腺瘤及癌组织中的表达阳性率分别为3.1%(1/31)，38.5%(20/52)和65.0%(13/20)，三者对比均有显著意义(P<0.05，P<0.01). 阳性颗粒分布于胞膜及胞质内. GST-pi在正常粘膜中少数可见弱阳性表达，GST-pi除在胞质内表达外也可在核膜及核内表达. ras p21，GST-pi在大肠良恶性病变中的表达见表1.
表1 ras p21，GST-pi在大肠良恶性病变中的分布
, 百拇医药
aP<0.05，vs 腺瘤；bP<0.01，vs 正常粘膜.
在腺瘤中GST-pi阳性表达随着不典型增生的加重而增加，在重度不典型增生的腺瘤中的表达与在大肠癌组织中的表达无差异(P<0.05)，提示GST-pi可在早期癌变过程中过量表达. 在正常粘膜与腺瘤之间差异有显著性(P<0.01). 大肠腺瘤不典型增生程度与ras p21，GST-pi表达率的关系见表2.
表2 大肠腺瘤不典型增生程度与ras p21, GST-pi表达率的关系
, 百拇医药
aP<0.05，vs 轻度；bP<0.01，vs 轻、中度.
ras p21,GST-pi阳性率表达与不典型增生程度呈正相关. ras p21, GST-pi在同一腺瘤病例中复合表达率为32.6%(17/52)，在重度不典型增生腺瘤中复合表达率为54.2%(13/24)，在正常粘膜中无复合表达，在腺癌中复合表达率为60.0%.
3 讨论
大肠癌发生发展过程中癌基因的改变受到人们的重视，在腺瘤演变成为癌的过程中，基因水平的变化尚未十分清楚. 本结果显示，在癌前病变腺瘤和大肠癌中ras p21表达均高于正常粘膜(P<0.01)，特别是在重度不典型增生腺瘤中ras p21有高表达[6]. 提示ras p21的表达在腺瘤病变中有重要意义. 目前认为ras基因家族的基因产物p21过度表达，参与结肠肿瘤的发生发展[5]. ras癌基因的表达可能为癌变的早期信号，类似的结果不仅存在于结肠中，也存在于其他器官肿瘤转化过程中. 郑杰et al[6]通过大鼠肝癌模型动态观察在诱癌早期增生的肝细胞中存在p21的过度表达.
, 百拇医药
目前认为GST-pi是检测“启动细胞”较早的标志酶，GST-pi在癌前病变中表达增多[7]. 本研究表明GST-pi在重度不典型增生腺瘤中和腺癌中过度表达，而在正常粘膜表达率低，免疫组织化学显示从不典型增生癌前核异质向癌演变过程中GST-pi表达增强. GST-pi过度表达与腺瘤癌变有关，可作为一种判断癌变早期指标. ras p21，GST-pi在腺瘤及大肠腺癌组织中的复合表达较高，两种标记物表达强度随腺瘤不典型增生的程度的增加而增强，提示这两种标记物均可作为大肠癌早期诊断的参考指标. ras p21的过量表达，显示癌基因的激活，GST-pi的表达则可能显示其与致癌物结合解毒作用，在ras p21表达时GST-pi可协同表达.
4 参考文献
1 Thorgeirsson UP, Turjpeenniemi HT, Williams JE, Westin EH, Heilman CA, Talmadge JE, Liotta LA. NIH/3T3 cell transfected
, 百拇医药
with human tumor DNA containing activated ras oncogenes express the metastatic phenotype in nude mice.
Mol Cell Biol, 1985;5:259-262
2 Sato K, Kitahara A, Satch K, Ishikawa T, Tatematsu M, Ito N. The placental form of glutathione S-transferase as a new marker
protein for preneoplasia in rat chemical hepatocarcinogenesis. Gann, 1984;75:199-202
3 郭文君，张伟栋，刘雨清，吴洪娟，黄文波. 子宫内膜癌组织中ras p21及GST-pi表达的对比研究. 潍坊医学院学报，1998；20：168-169
, 百拇医药
4 齐春会，郭山春，李华，李春海. 人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在胃癌及癌前病变组织中的表达. 中华病理学杂志，1995；24：53-55
5 Miller F, Heimann TM, Quish A, Pyo DJ, Szporn A, Martinelli G, Fasy TM. Ras and C-myc protein expression in colorectal
carcinoma. Study of cancer-prone patients. Dis Colon Rectum, 1992;35:430-435
6 郑杰，武忠弼，阮幼冰，杨木兰，刘冰. 癌基因蛋白ras p21、甲胎蛋白在实验性大鼠肝癌前病变中的表达.
临床与实验病理学杂志，1995；11：133-136
7 刘岳彪，陈亚军，尹勇，杨学军，杨亦静，吴德政. 肿瘤中GST活性及GST-π基因表达的研究. 癌症，1995；14：1-3, 百拇医药(郭文君 吴洪娟 刘雨清 张伟栋 黄文波)
山东省卫生厅基金资助课题，No.98118.
项目负责人 郭文君潍坊医学院病理学教研室 山东省潍坊市 261042
Tel. +86-536-8213047(O)，8213221(H)
收稿日期 1999-08-10 接收日期 1999-11-19
Subject headings colorectal neoplasms; adenoma; gene expression; immunohistochemistry; ras p21
, 百拇医药
主题词 结直肠癌；腺瘤；癌基因；免疫组织化学
ras p21是ras癌基因共同编码的Mr 21000蛋白质. ras癌基因激活致p21过量表达[1]. 胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-pi)是一种重要的肿瘤标志酶. 较多的研究表明，GST-pi在人体肝肿瘤、胃癌、子宫内膜癌组织中含量显著升高[2-4]. 我们检测大肠腺瘤及其在癌变中ras p21，GST-pi表达状况，观察其分布和量的变化，探讨大肠腺瘤在癌变中两种标记物复合表达的内在联系及其意义.
1 材料和方法
收集本教研室及附属医院病理科结肠肿瘤手术标本及活检材料，大肠腺瘤52例，包括管状腺瘤34例，绒毛状腺瘤18例. 正常结肠粘膜31例，大肠中分化腺癌20例. 标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，HE染色及免疫组化染色. 鼠抗GST-pi单克隆抗体试剂盒为Dako公司产品. 鼠抗ras p21单克隆抗体试剂盒购自北京中山生物技术有限公司. 应用LSAB法，按试剂盒步骤进行免疫组化染色，以TBS代替一抗作为阴性对照，阳性判断标准同参考文献[3].
, 百拇医药
统计学处理 采用χ2检验.
2 结果
ras p21在正常粘膜、腺瘤及癌组织中的表达阳性率分别为3.1%(1/31)，38.5%(20/52)和65.0%(13/20)，三者对比均有显著意义(P<0.05，P<0.01). 阳性颗粒分布于胞膜及胞质内. GST-pi在正常粘膜中少数可见弱阳性表达，GST-pi除在胞质内表达外也可在核膜及核内表达. ras p21，GST-pi在大肠良恶性病变中的表达见表1.
表1 ras p21，GST-pi在大肠良恶性病变中的分布
| 组织学类型 | n | p21阳性(n) | 阳性率(%) | GST-pi阳性(n) | 阳性率(%) |
| 正常粘膜 | 31 | 1 | 3.2 | 4 | 12.9 |
| 腺瘤 | 52 | 20 | 38.4b | 31 | 59.6b |
| 腺癌 | 20 | 13 | 65.0ab | 18 | 90.0ab |
, 百拇医药
aP<0.05，vs 腺瘤；bP<0.01，vs 正常粘膜.
在腺瘤中GST-pi阳性表达随着不典型增生的加重而增加，在重度不典型增生的腺瘤中的表达与在大肠癌组织中的表达无差异(P<0.05)，提示GST-pi可在早期癌变过程中过量表达. 在正常粘膜与腺瘤之间差异有显著性(P<0.01). 大肠腺瘤不典型增生程度与ras p21，GST-pi表达率的关系见表2.
表2 大肠腺瘤不典型增生程度与ras p21, GST-pi表达率的关系
| 不典型增生 | n | p21阳性(n) | 阳性率(%) | GST-pi阳性(n) | 阳性率(%) |
| 无或轻度 | 16 | 3 | 18.7 | 4 | 25.0 |
| 中度 | 12 | 3 | 25.0 | 5 | 41.7 |
| 重度或伴癌变 | 24 | 14 | 58.3a | 22 | 91.7b |
, 百拇医药
aP<0.05，vs 轻度；bP<0.01，vs 轻、中度.
ras p21,GST-pi阳性率表达与不典型增生程度呈正相关. ras p21, GST-pi在同一腺瘤病例中复合表达率为32.6%(17/52)，在重度不典型增生腺瘤中复合表达率为54.2%(13/24)，在正常粘膜中无复合表达，在腺癌中复合表达率为60.0%.
3 讨论
大肠癌发生发展过程中癌基因的改变受到人们的重视，在腺瘤演变成为癌的过程中，基因水平的变化尚未十分清楚. 本结果显示，在癌前病变腺瘤和大肠癌中ras p21表达均高于正常粘膜(P<0.01)，特别是在重度不典型增生腺瘤中ras p21有高表达[6]. 提示ras p21的表达在腺瘤病变中有重要意义. 目前认为ras基因家族的基因产物p21过度表达，参与结肠肿瘤的发生发展[5]. ras癌基因的表达可能为癌变的早期信号，类似的结果不仅存在于结肠中，也存在于其他器官肿瘤转化过程中. 郑杰et al[6]通过大鼠肝癌模型动态观察在诱癌早期增生的肝细胞中存在p21的过度表达.
, 百拇医药
目前认为GST-pi是检测“启动细胞”较早的标志酶，GST-pi在癌前病变中表达增多[7]. 本研究表明GST-pi在重度不典型增生腺瘤中和腺癌中过度表达，而在正常粘膜表达率低，免疫组织化学显示从不典型增生癌前核异质向癌演变过程中GST-pi表达增强. GST-pi过度表达与腺瘤癌变有关，可作为一种判断癌变早期指标. ras p21，GST-pi在腺瘤及大肠腺癌组织中的复合表达较高，两种标记物表达强度随腺瘤不典型增生的程度的增加而增强，提示这两种标记物均可作为大肠癌早期诊断的参考指标. ras p21的过量表达，显示癌基因的激活，GST-pi的表达则可能显示其与致癌物结合解毒作用，在ras p21表达时GST-pi可协同表达.
4 参考文献
1 Thorgeirsson UP, Turjpeenniemi HT, Williams JE, Westin EH, Heilman CA, Talmadge JE, Liotta LA. NIH/3T3 cell transfected
, 百拇医药
with human tumor DNA containing activated ras oncogenes express the metastatic phenotype in nude mice.
Mol Cell Biol, 1985;5:259-262
2 Sato K, Kitahara A, Satch K, Ishikawa T, Tatematsu M, Ito N. The placental form of glutathione S-transferase as a new marker
protein for preneoplasia in rat chemical hepatocarcinogenesis. Gann, 1984;75:199-202
3 郭文君，张伟栋，刘雨清，吴洪娟，黄文波. 子宫内膜癌组织中ras p21及GST-pi表达的对比研究. 潍坊医学院学报，1998；20：168-169
, 百拇医药
4 齐春会，郭山春，李华，李春海. 人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在胃癌及癌前病变组织中的表达. 中华病理学杂志，1995；24：53-55
5 Miller F, Heimann TM, Quish A, Pyo DJ, Szporn A, Martinelli G, Fasy TM. Ras and C-myc protein expression in colorectal
carcinoma. Study of cancer-prone patients. Dis Colon Rectum, 1992;35:430-435
6 郑杰，武忠弼，阮幼冰，杨木兰，刘冰. 癌基因蛋白ras p21、甲胎蛋白在实验性大鼠肝癌前病变中的表达.
临床与实验病理学杂志，1995；11：133-136
7 刘岳彪，陈亚军，尹勇，杨学军，杨亦静，吴德政. 肿瘤中GST活性及GST-π基因表达的研究. 癌症，1995；14：1-3, 百拇医药(郭文君 吴洪娟 刘雨清 张伟栋 黄文波)