乙肝病毒感染者血清内源性β-葡萄糖醛酸酶含量与胆红素结石的关系
1中国人民解放军空军沈阳医院普外科 辽宁省沈阳市 110042
2中国医科大学第一临床医院普外二科 110001
3中国人民解放军沈阳军区总医院肝胆外科 110015
项目负责人 王宏林中国人民解放军空军沈阳医院普外科 辽宁省沈阳市 110042
收稿日期 1999-10-03 接收日期 1999-12-08
Subject headings hepatitis B; β-glucuronicase/analysis; pigment; cholithiasis
, 百拇医药
主题词 肝炎，乙型；β-葡萄糖醛酸酶/分析；胆红素；ń崾
大量流行病学调查发现，乙肝病毒感染患者胆石症发病率明显增高[1]，近来研究证实，内源性β-葡萄糖醛酸酶(β-G)在胆红素结石发病中起重要作用[2]，我们应用ELISA法测定了32例乙肝病毒慢性携带者及36例健康人血清内源性β-G含量，以探讨乙肝病毒感染与胆红素结石发病的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 收集中国医科大学第一临床医院1998-04/1999-04期间32例乙肝病毒感染者(其中无症状乙肝病毒携带者18例，慢性肝炎14例)空腹静脉血4mL，分离出血清4mL-70℃深低温冰箱储存. 32例患者中胆囊息肉8例，胃溃疡9例，肠梗阻10例，腹股沟斜疝3例，慢性阑尾炎1例. 所有患者均经检查排除患有胆红素结石，癌症及糖尿病等可能影响β-G含量之疾病，男女比例1.4∶1，年龄25岁～65岁，平均41.3岁. 另取健康献血员36例空腹静脉血4mL，分离出血清，-70℃低温冰箱储存，男女比例1.3∶1，年龄23岁～44岁，平均36.5岁. 单克隆及多克隆抗β-G抗体由美国Alabama大学K-J Ho教授惠赠.
, 百拇医药
1.2 方法 ①乙肝病毒感染患者诊断标准[3]：无症状乙肝病毒携带者无任何临床症状及体征，肝功能正常，HBsAg阳性持续6mo以上. 慢性乙型肝炎有肝炎症状，体征及肝功异常，或肝活体组织病理检查符合慢性肝炎改变，有一种以上乙肝病毒感染标志物阳性. ②乙肝病毒血清标志物由我院检验科用ELISA法测定. ③血清内源性β-G含量测定：用ELISA法，多克隆抗体用pH 9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲液1∶2000稀释，100μL/孔，酶标微孔板4℃过夜，牛血清清蛋白100μL/孔，37℃封闭2h，用PBST洗3次，每次3min，甩干；4℃保存. 待测血清100μL，37℃ 1h；PBST液洗3次，加单克隆抗体(1∶100)100μL，37℃温育1h；PBST洗3次，加酶标单克隆抗体(1∶800)100μL/孔，37℃温育1h，PBST洗3次，以邻苯二胺为底物，显色15min后用2mol/L H2SO4终止反应. 于酶标仪(BIO-RAD 3552型)490nm测吸光度，参比波长为655nm. 按常法计算判断值(样品吸光度/阴性对照吸光度≥2为阳性). 阳性样本以倍比方式稀释至阴性时的滴度为测得值.
, http://www.100md.com
统计学处理 血清内源性β-G活性测定结果以算术均数±标准差表示x±s，单位为滴度，用t检验对实验结果进行统计学处理.
2 结果
32例乙肝病毒感染患者血清β-G为12.3±3.0，其中18例乙肝病毒携带者组为11.3±2.8，14例慢性肝炎组为14.2±3.3，健康对照组为7.2±2.1. 乙肝病毒携带者组健康对照组β-G含量有显著差异(P<0.01)，慢性肝炎组与健康对照组β-G含量有显著差异(P<0.01)，乙肝病毒携带者组与慢性肝炎组亦有显著差异(P<0.05，见表1).
表1 各组血清内源性β-G含量(x±s)
, 百拇医药
aP<0.01vs 健康对照组；aP<0.05vs 慢性肝炎组；bP<0.01vs 健康对照组.
3 讨论
长期以来，国内外学者对胆石成因进行了广泛深入的研究. 目前认为胆石形成的基本因素为胆汁凝滞，胆汁理化性质改变及感染，这三种因素在胆石形成的作用往往很难分开. 大量流行病学调查发现乙肝患者胆石症发病率明显升高.
β-G是一种溶酶体内酸性水解酶，广泛存在于人体组织中，在肝脏中特别丰富[4]，完成如下生理功能：第一，与类固醇激素的结和作用；第二，对结合的葡萄糖酸苷的水解作用；第三，参与细胞增生[5]. 其中对结合葡萄糖酸苷的水解作用与胆红素结石形成关系密切. 因其将结合胆红素水解为未结合胆红素，而未结合胆红素难溶于水，与胆汁中钙结合而形成胆红素结石. 人体中β-G分内源性与外源性. 内源性β-G主要是肝细胞，胆道内皮细胞及胆囊产生的，平时即分泌入血及胆汁，当肝细胞受损或有炎症时β-G分泌量显著增加[6]. 大量研究证实，内源性β-G在胆红素结石形成过程中起重要作用，当内源性β-G值超出正常值上限时有成石倾向. 因胆红素结石患者本身和肝癌，糖尿病患者血清β-G含量可增高[7]，本实验排除了这些干扰因素. 乙型肝炎患者乙肝病毒于肝细胞复制，肝细胞受损，大量β-G由破坏的肝细胞分泌至血及胆汁，β-G在胆汁将结合胆红素水解成未结合胆红素，未结合胆红素为脂溶性，完全不溶于水，易与钙形成钙盐而沉积进而形成结石. 肝炎时，肝细胞功能受损，合成胆汁酸障碍. 当胆汁中胆汁酸浓度减少时，未结合胆红素，碳酸，磷酸，脂肪酸及棕榈酸等易与钙形成不溶性钙盐而沉淀. 此外，Mason et al[8]认为，HBV可在肝外组织尤其在胆道系统复制，引起免疫损伤造成病毒性胆管炎，胆囊炎. 我们认为，病毒性胆管炎，胆囊炎可使胆管及胆囊内皮细胞受到不同程度损伤，加上病毒性肝炎时肝细胞的破坏，均使内源性β-G分泌量大大增加. 这些因素单独或共同作用导致乙肝病毒感染者胆石症发病率增高. 上述各种因素所致的病理性胆汁包含着成石因素即结晶析出因素. 如果肝细胞损害很快恢复，析出的胆泥可再溶或排放. 如肝胆损害因素持续存在，则成石可能性增大. 故慢性乙肝患者的胆石症发病率较高. 本实验32例乙肝病毒感染者β-G含量12.3±3.0，较36例健康对照组β-G含量7.2±2.1有显著增高(P<0.01)，其中18例乙肝病毒携带者组为11.3±2.8，14例慢性肝炎组为14.2±3.3，均分别较36例健康对照组有非常显著差异(P<0.01，P<0.01). 且慢性乙型肝炎组血清β-G含量较乙肝病毒携带者组亦有显著差异
, 百拇医药
(P<0.05). 本文结果提示乙型肝炎病毒感染与胆红素结石发病率具有密切联系，且随着乙肝病毒造成肝损害加重，胆红素结石症发病率有增高趋势.
4 参考文献
1 Shyan S, Yun FL. The prevasense and incidence of cholecystolithisis in patients with chronic liver disease: a prospective.
Study Aepatology, 1989:538-540
2 Ho KJ. Pathogenesis of the formation of pigment gallstone. Therole of human biliary β-Glucuronicase. Med Today,1992;155:694
, http://www.100md.com
3 第五次全国传染病与寄生虫病学术会议纪要. 中华传染病杂志，1995；13：241-242
4 Ho KJ, Lin XZ, Yu SC, Chen JS, Wu CZ. Characterization anddetermination of the activity of biliary β-Glucuronicase in rats.
J Lab Clin Med, 1979;93:916
5 Finch PJ, Matsuzawa T, Takio K, Oyama Rsuzuki M. Gastric enzymes asa screening test for gastric cancer. Gut,1987;28:319-320
6 Ho KJ. Biliary electrolytes and enzymes in patients with and without gallstones. Dig Dis Sci, 1996;41:2409-2416
7 扬波，朱善德，杜晓炬，李顺明，康健，蒲菲菲. 血清β-葡萄糖醛酸酶活性测定对肝癌大诊断价值. 世界华人消化杂志，1999；7：108-109
8 Mason A, Wich M, White H. Hepatitis B virus. Replication in diverse cell types dwing chronic hepatitis B virus infection.
Hepatology, 1993;18:781-789, http://www.100md.com(王宏林1 郭仁宣2 刘小芳2 孔凡民2 扬 波3 朱善德3)
2中国医科大学第一临床医院普外二科 110001
3中国人民解放军沈阳军区总医院肝胆外科 110015
项目负责人 王宏林中国人民解放军空军沈阳医院普外科 辽宁省沈阳市 110042
收稿日期 1999-10-03 接收日期 1999-12-08
Subject headings hepatitis B; β-glucuronicase/analysis; pigment; cholithiasis
, 百拇医药
主题词 肝炎，乙型；β-葡萄糖醛酸酶/分析；胆红素；ń崾
大量流行病学调查发现，乙肝病毒感染患者胆石症发病率明显增高[1]，近来研究证实，内源性β-葡萄糖醛酸酶(β-G)在胆红素结石发病中起重要作用[2]，我们应用ELISA法测定了32例乙肝病毒慢性携带者及36例健康人血清内源性β-G含量，以探讨乙肝病毒感染与胆红素结石发病的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 收集中国医科大学第一临床医院1998-04/1999-04期间32例乙肝病毒感染者(其中无症状乙肝病毒携带者18例，慢性肝炎14例)空腹静脉血4mL，分离出血清4mL-70℃深低温冰箱储存. 32例患者中胆囊息肉8例，胃溃疡9例，肠梗阻10例，腹股沟斜疝3例，慢性阑尾炎1例. 所有患者均经检查排除患有胆红素结石，癌症及糖尿病等可能影响β-G含量之疾病，男女比例1.4∶1，年龄25岁～65岁，平均41.3岁. 另取健康献血员36例空腹静脉血4mL，分离出血清，-70℃低温冰箱储存，男女比例1.3∶1，年龄23岁～44岁，平均36.5岁. 单克隆及多克隆抗β-G抗体由美国Alabama大学K-J Ho教授惠赠.
, 百拇医药
1.2 方法 ①乙肝病毒感染患者诊断标准[3]：无症状乙肝病毒携带者无任何临床症状及体征，肝功能正常，HBsAg阳性持续6mo以上. 慢性乙型肝炎有肝炎症状，体征及肝功异常，或肝活体组织病理检查符合慢性肝炎改变，有一种以上乙肝病毒感染标志物阳性. ②乙肝病毒血清标志物由我院检验科用ELISA法测定. ③血清内源性β-G含量测定：用ELISA法，多克隆抗体用pH 9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲液1∶2000稀释，100μL/孔，酶标微孔板4℃过夜，牛血清清蛋白100μL/孔，37℃封闭2h，用PBST洗3次，每次3min，甩干；4℃保存. 待测血清100μL，37℃ 1h；PBST液洗3次，加单克隆抗体(1∶100)100μL，37℃温育1h；PBST洗3次，加酶标单克隆抗体(1∶800)100μL/孔，37℃温育1h，PBST洗3次，以邻苯二胺为底物，显色15min后用2mol/L H2SO4终止反应. 于酶标仪(BIO-RAD 3552型)490nm测吸光度，参比波长为655nm. 按常法计算判断值(样品吸光度/阴性对照吸光度≥2为阳性). 阳性样本以倍比方式稀释至阴性时的滴度为测得值.
, http://www.100md.com
统计学处理 血清内源性β-G活性测定结果以算术均数±标准差表示x±s，单位为滴度，用t检验对实验结果进行统计学处理.
2 结果
32例乙肝病毒感染患者血清β-G为12.3±3.0，其中18例乙肝病毒携带者组为11.3±2.8，14例慢性肝炎组为14.2±3.3，健康对照组为7.2±2.1. 乙肝病毒携带者组健康对照组β-G含量有显著差异(P<0.01)，慢性肝炎组与健康对照组β-G含量有显著差异(P<0.01)，乙肝病毒携带者组与慢性肝炎组亦有显著差异(P<0.05，见表1).
表1 各组血清内源性β-G含量(x±s)
| 临床分型 | n | β-G |
| 乙肝病毒携带者组 | 18 | 11.3±2.8a |
| 慢性肝炎组 | 14 | 4.2±3.2b |
| 健康对照组 | 36 | 7.2±2.1 |
, 百拇医药
aP<0.01vs 健康对照组；aP<0.05vs 慢性肝炎组；bP<0.01vs 健康对照组.
3 讨论
长期以来，国内外学者对胆石成因进行了广泛深入的研究. 目前认为胆石形成的基本因素为胆汁凝滞，胆汁理化性质改变及感染，这三种因素在胆石形成的作用往往很难分开. 大量流行病学调查发现乙肝患者胆石症发病率明显升高.
β-G是一种溶酶体内酸性水解酶，广泛存在于人体组织中，在肝脏中特别丰富[4]，完成如下生理功能：第一，与类固醇激素的结和作用；第二，对结合的葡萄糖酸苷的水解作用；第三，参与细胞增生[5]. 其中对结合葡萄糖酸苷的水解作用与胆红素结石形成关系密切. 因其将结合胆红素水解为未结合胆红素，而未结合胆红素难溶于水，与胆汁中钙结合而形成胆红素结石. 人体中β-G分内源性与外源性. 内源性β-G主要是肝细胞，胆道内皮细胞及胆囊产生的，平时即分泌入血及胆汁，当肝细胞受损或有炎症时β-G分泌量显著增加[6]. 大量研究证实，内源性β-G在胆红素结石形成过程中起重要作用，当内源性β-G值超出正常值上限时有成石倾向. 因胆红素结石患者本身和肝癌，糖尿病患者血清β-G含量可增高[7]，本实验排除了这些干扰因素. 乙型肝炎患者乙肝病毒于肝细胞复制，肝细胞受损，大量β-G由破坏的肝细胞分泌至血及胆汁，β-G在胆汁将结合胆红素水解成未结合胆红素，未结合胆红素为脂溶性，完全不溶于水，易与钙形成钙盐而沉积进而形成结石. 肝炎时，肝细胞功能受损，合成胆汁酸障碍. 当胆汁中胆汁酸浓度减少时，未结合胆红素，碳酸，磷酸，脂肪酸及棕榈酸等易与钙形成不溶性钙盐而沉淀. 此外，Mason et al[8]认为，HBV可在肝外组织尤其在胆道系统复制，引起免疫损伤造成病毒性胆管炎，胆囊炎. 我们认为，病毒性胆管炎，胆囊炎可使胆管及胆囊内皮细胞受到不同程度损伤，加上病毒性肝炎时肝细胞的破坏，均使内源性β-G分泌量大大增加. 这些因素单独或共同作用导致乙肝病毒感染者胆石症发病率增高. 上述各种因素所致的病理性胆汁包含着成石因素即结晶析出因素. 如果肝细胞损害很快恢复，析出的胆泥可再溶或排放. 如肝胆损害因素持续存在，则成石可能性增大. 故慢性乙肝患者的胆石症发病率较高. 本实验32例乙肝病毒感染者β-G含量12.3±3.0，较36例健康对照组β-G含量7.2±2.1有显著增高(P<0.01)，其中18例乙肝病毒携带者组为11.3±2.8，14例慢性肝炎组为14.2±3.3，均分别较36例健康对照组有非常显著差异(P<0.01，P<0.01). 且慢性乙型肝炎组血清β-G含量较乙肝病毒携带者组亦有显著差异
, 百拇医药
(P<0.05). 本文结果提示乙型肝炎病毒感染与胆红素结石发病率具有密切联系，且随着乙肝病毒造成肝损害加重，胆红素结石症发病率有增高趋势.
4 参考文献
1 Shyan S, Yun FL. The prevasense and incidence of cholecystolithisis in patients with chronic liver disease: a prospective.
Study Aepatology, 1989:538-540
2 Ho KJ. Pathogenesis of the formation of pigment gallstone. Therole of human biliary β-Glucuronicase. Med Today,1992;155:694
, http://www.100md.com
3 第五次全国传染病与寄生虫病学术会议纪要. 中华传染病杂志，1995；13：241-242
4 Ho KJ, Lin XZ, Yu SC, Chen JS, Wu CZ. Characterization anddetermination of the activity of biliary β-Glucuronicase in rats.
J Lab Clin Med, 1979;93:916
5 Finch PJ, Matsuzawa T, Takio K, Oyama Rsuzuki M. Gastric enzymes asa screening test for gastric cancer. Gut,1987;28:319-320
6 Ho KJ. Biliary electrolytes and enzymes in patients with and without gallstones. Dig Dis Sci, 1996;41:2409-2416
7 扬波，朱善德，杜晓炬，李顺明，康健，蒲菲菲. 血清β-葡萄糖醛酸酶活性测定对肝癌大诊断价值. 世界华人消化杂志，1999；7：108-109
8 Mason A, Wich M, White H. Hepatitis B virus. Replication in diverse cell types dwing chronic hepatitis B virus infection.
Hepatology, 1993;18:781-789, http://www.100md.com(王宏林1 郭仁宣2 刘小芳2 孔凡民2 扬 波3 朱善德3)