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编号:10696780
河豚卵巢提取物对小鼠免疫功能的影响
http://www.100md.com 2000年3月15日 《世界华人消化杂志》 2000年第3期
     1 福建师范大学高分子研究所,生物高分子研究室 福建省福州市 350007

    2
福建华南女子学院营养与食品科学系 福建省福州市 350007

    福建省科委资助项目, No.96-2-34

    项目负责人
余萍 福建师范大学高分子研究所,生物高分子研究室 福建省福州市 350007

    收稿日期 1999-12-27 接收日期 1999-12-29

    

    Subject headings
extract from fugus ovary; phagocytic function; agglutination; hemolysin
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    主题词 河豚卵巢提取物;吞噬作用;凝集作用;溶血作用

    有关从河豚卵巢提取得到的有效成分对小鼠具有增强免疫功能的效果的研究,我们进行初步的研究和探讨,现报告如下.

    1 材料和方法

    1.1 材料
①河豚卵巢提取物:定量取冷冻的河豚卵巢切碎后用水浸泡,24h后过滤,反复3~4次,合并滤液,煮沸,除去凝固蛋白和结缔组织,得到提取原液.将此液通过弱酸性阳离子交换树脂和中性活性炭等柱处理,采用化学定性方法检测,收集有效馏份,调pH微碱性,析出淡红色粉未,干燥后保存. ②小鼠:昆明种,体质量(20±2)g,雌雄不分,由福建省医科大学动物房提供. ③鸡红细胞CRBC (chicken red blood cell): 市售健康公鸡,抽取静脉血,按常规方法制备CRBC悬液. ④绵羊红细胞SRBC (sheep red blood cell): 由南京军区总院动物房提供健康绵羊,抽取颈静脉血,按常规方法制备SRBC悬液. ⑤补体: 由福建省动物调配公司提供豚鼠,抽取心血制备血清. 经常规处理作为实验的补体来源. ⑥其他化学试剂: 均为国产
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    分析纯.

    1.2 方法1.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)吞噬功能测定 昆明种小鼠25只,将其随机分为4组,其中1组为对照组. 实验组按剂量分为27.2, 31.4, 37.2mg/kg 3个组. 各实验组按不同剂量皮下注射给药0.2mL/只,对照组注射等体积生理盐水. 于d5未次给药后,用无菌基础牛肉培养液作诱发剂(牛肉培养液:蛋白胨1g,牛肉膏0.3g,氯化钠0.5g,加蒸馏水至100mL,15磅20min灭菌备用), ip 1mL/只,24h后ip 20mL/L CRBC 0.5mL/只, 1h后脱颈椎致死,立即腹腔注射无菌生理盐水2mL/只,轻揉腹部,然后吸取腹腔内液体0.5mL涂片(平行两片),干燥,固定,经Giemsa-Wright染色后镜检计算吞噬百分率与吞噬指数[1].

, http://www.100md.com     1.2.2 小鼠免疫器官质量的测定 昆明种小鼠28只,随机分为4组,其中1组为对照组,小鼠给药剂量同1.2.1. 各组每天腹腔注射提取液0.2mL/只,对照组则注射等体积生理盐水. 连续给药5d,各组动物于未次给药后24h眼眶放血处死,取胸腺,脾脏,用滤纸吸干水分后即在分析天平上称质量. 计算脏器系数[1].

    1.2.3 小鼠血清溶血素测定 昆明种小鼠30只,体质量(20±2)g左右,♀♂各半. 分为3组,两组实验组给药剂量分别为27.2mg/kg和37.2mg/kg. 连续给药8d. 各组动物均于首日腹腔注射给药后d5 ip 100mL/L的SRBC 0.2mL免疫,于未次给药后24h摘眼球取血. 分离血清,每组小鼠血清混合于一试管中,用生理盐水对倍稀释(1∶10, 1∶20, 1∶40, 1∶80,1∶160, 1∶320),然后取不同稀释度的血清1mL于试管中,对照组以生理盐水1mL,放入冰浴中,依次加入100mL/L SRBC 0.25mL,1∶10稀释的豚鼠血清1mL,37℃保温20min,冰浴终止反应. 离心,取上清液1mL,加都氏液3mL(都氏液∶碳酸氢钠1.0g,氰化钾0.05g,高铁氰化钾0.2g,蒸馏水加至1000mL)混匀,10min后用53W型分光光度计于波长540nm处测A540值.另设半数溶血管, 取50mL/L SRBC 0.25mL,加都氏液至4mL,离心,上清液于波长540nm处比色,该吸收值即为SRBC半数溶血时吸收值. 结果以HC50表示[2].
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    1.2.4 小鼠血凝素抗体测定 上述小鼠血清溶血素生成实验的小鼠血清取0.2mL,置56℃水浴中灭活30min,在微量血凝测定板孔内,用生理盐水按两倍稀释法将该血清稀释成不同浓度,各孔0.05mL,然后在每孔内加10mL/L SRBC 0.05mL(一个浓度平行两孔),在微型振荡机上振摇1min后置37℃培养,1h后观察血球凝集程度,计算抗体积数[2].

    2 结果

    2.1 对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)吞噬功能的影响 3种剂量的河豚卵巢提取物都能够提高小鼠腹腔MΦ吞噬CRBC的吞噬率及吞噬指数,尤以第Ⅲ剂量组最为显著(表1).

    表1 对小鼠腹腔MΦ吞噬功能的影响(x±s)
组别剂量(mg·kg-1·d-1)n吞噬率(%)吞噬指数
对照组739.3±13.31.42±0.26
实验组Ⅰ27.2×5648.5±16.0a1.48±0.18
实验组Ⅱ31.4×5660.0±23.0b1.73±0.21a
实验组Ⅲ37.2×5667.8±18.8c2.33±0.23b

, 百拇医药
    aP<0.05,bP<0.01;cP<0.001, vs 对照组.

    2.2 对小鼠免疫器官质量的影响 实验组脾质量和胸腺质量都比对照组有不同程度的提高,特别是低剂量组最为显著. 说明在该浓度下河豚卵巢提取物能显著增加正常小鼠的脾指数和胸腺指数(表2).

    表2 对小鼠脾、胸腺重量的影响(n=7, x±s)
组别剂量(mg·kg-1·d-1)脾重/体重(mg/10g)增加百分率(%)胸腺重/体重(mg/10g)增加百分率(%)
对照组15.6±6.825.7±2.5
实验组Ⅰ 27.2×524.8±7.2b58.9729.8±4.0a15.95
实验组Ⅱ31.4×520.9±3.4a33.9730.6±7.5b19.07
实验组Ⅲ37.2×518.4±5.617.9528.3±4.810.12

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     aP<0.05, bP<0.01,vs 对照组.

    2.3 对致敏小鼠血清溶血素生成及血凝素抗体的影响 河豚卵巢提取物对小鼠外周血清溶血素的生成无明显影响. 而用药组血凝素抗体积数与对照组比较差异显著,说明河豚卵巢提取物具有增强小鼠B细胞产生抗体的功能(表3).

    表3 对小鼠血清溶血素生成及B细胞产生抗体功能的影响(n=10, x±s)
组别剂量(mg·kg-1·d-1)HC50血凝素抗体积数
对照组43.05±14.3565.0±11.2
实验组Ⅰ27.2×850.44±18.48a81.0±16.3b
实验组Ⅱ37.2×854.90±18.30a115.0±26.5c

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     aP>0.05, bP<0.01,cP<0.01,vs 对照组.

    3 讨论

    巨噬细胞作为机体抗肿瘤和杀灭入侵病原微生物的效应细胞,在抗体的免疫系统中处于特殊的地位. 上述实验结果表明,小鼠经皮下注射河豚卵巢提取物,其腹腔内巨噬细胞的吞噬功能有明显增强. 用药组和对照组比较,吞噬百分率与吞噬指数均有显著差异,既提高有吞噬能力的巨噬细胞数,也提高单个巨噬细胞吞噬CRBC的数目. 且在药物毒性剂量以内,提取物剂量愈大,其效果愈显著. 同时,河豚卵巢提取物对小鼠的免疫器官也产生影响,但不随剂量的增加而相应增加.以低、中剂量效果较显著,说明在一定剂量范围内,河豚卵巢提取物具有提高小鼠的非特异性免疫的功能.

    参与特异性体液免疫的抗体有多种类型免疫球蛋白,皆由B淋巴细胞接受抗原信息后分化增殖为浆细胞所产生的. 小鼠血凝素抗体测定结果表明,用药组与对照组抗体积数比较,有较明显的差异(P<0.01). 表明河豚卵巢提取物对小鼠参与特异性体液免疫的抗体,即脾细胞内B淋巴细胞产生IgG能力有增强作用. 但同时做的血清溶血素生成实验,效果却不显著.一般在抗原刺激下,B细胞和T细胞的免疫应答,需要TH细胞(helper T cell)和TS细胞(suppressor T cell)的共同调节以适应机体的需要. 河豚卵巢提取物含有何种有效成分以及如何作用于TH细胞和TS细胞需进一步研究.

    4 参考文献

    1 湖南医学院卫生学教研组编. 卫生毒理学实验方法. 北京:人民卫生出版社,1979:260-262

    2 徐淑云, 卞如濂, 陈修主编. 药理实验方法学. 北京:人民卫生出版社,1982:944-946, 百拇医药(余 萍1 刘艳如1 林 曦1 林晓红2 )