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编号:10697322
L-365260对SGC-7901细胞中Bcl-2,Bax基因的调控
http://www.100md.com 2001年7月15日 《世界华人消化杂志》 2001年第7期
L-365260;胃肿瘤,病理学;基因,Bcl-2;Bax;细胞凋亡;肿瘤细胞,培养的;原癌基因;脱噬作用,主题词,1材料和方法,1.1材料,1.2方法,1.2.1RT-PCR检测,1.2.2流式细胞仪检测,1.2.3检测胃癌细胞凋亡,2结果,2.1Bcl-2mRN
    

    主题词
L-365260;胃肿瘤/病理学;基因,Bcl-2;Bax;细胞凋亡;肿瘤细胞,培养的;原癌基因;脱噬作用

    唐卓斌, 刘为纹. L-365260对SGC-7901细胞中Bcl-2, Bax基因的调控. 世界华人消化杂志,2001;9(7):831-832

    我们以前研究发现L-365260可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,但其作用机制未见报道. 为此,我们就L-365260对SGC-7901细胞中Bcl-2和Bax基因的调控作用进行了研究.

    1 材料和方法

    1.1 材料
L-365260由Manning教授惠赠,人胃癌细胞株SGC-7901由本科培养;引物序列如下:Bax:上游引物5′-GGCCCACCAGCTCTGAGCAGA-3′ 下游引物5′-GCCACGTGGGCGTCCCAAAGT-3′; Bcl-2:上游引 物5′-GTGGAGGAGCTCTTCAGGGA-3′; 下游引物5′-AGGCACCCAGGGTGATGCAA-3′;GAPDH: 上游引物CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA下游引物TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCAC扩增片段大小分别为479, 304, 598bp;引物均由上海生工公司合成. 逆转录试剂盒Asccess RT-PCR System(A1250)购自Promega公司,TripureTM Isolation Reagent kit购自德国宝灵曼公司,2400型PCR循环仪为美国Perkin-Elmer公司产品,紫外线凝胶成象系统为美国Bio-Rad公司产品.

    1.2 方法

    1.2.1 RT-PCR检测 选择对数生长期SGC-7901细胞,以4.5×108个L-1接种于6孔培养板中,每孔1.5mL,待其生长至对数生长期,每孔加入终浓度为1×10-7mol·L-1的L-365260,继续无血清培养6, 12, 24, 48h后提取RNA,按宝灵曼RNA提取试剂盒说明书操作,设未处理的胃癌细胞为空白对照. 采用25μL逆转录反应体积,内含RNA模板2μL,5×Buffer 5μL,dNTP 0.5μL,MgSO4 1μL,Bax,Bcl-2,GAPDH引物各1.5μL ......

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