重组人内皮抑素在大肠杆菌中表达及其生物学活性鉴定
内皮抑素是肿瘤源性血管内皮细胞高活性的特异抑制因子。它主要作用于新生血管，抑制其生长。实验表明，鼠内皮抑素几乎对所有血管依赖性肿瘤都有强大的抑瘤活性，提示内皮抑素是一种很有希望治疗肿瘤的药物。南华大学基础医学院肿瘤所从人胚肝脏组织中分离内皮抑素cDNA，在可高效表达融合蛋白的原核系统中表达出重组人内皮抑素蛋白，并对其进行生物学活性鉴定，为以后大量生产及临床应用奠定了基础。|, http://www.100md.com
方法：采用RT-RCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA，将其克隆入pGEM-TEasy克隆载体中。经全自动序列分析仪测序确证后，将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450-1，构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒。将该重组质粒转化入大肠杆菌TG1中进行诱导表达，表达产物经SDS-PAGE鉴定。表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定。结果：成功获得549bp人内皮抑素基因，测序证实序列正确。经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白。此蛋白在SDS-PAGE凝胶上显示出一条约75KD的阳性条带。重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间。|, http://www.100md.com
结论：人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达，并具有抗血管生成活性。|, http://www.100md.com
摘自《中国现代应用药学杂志》2003年第20卷第2期(《中国现代应用药学杂志》 )
方法：采用RT-RCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA，将其克隆入pGEM-TEasy克隆载体中。经全自动序列分析仪测序确证后，将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450-1，构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒。将该重组质粒转化入大肠杆菌TG1中进行诱导表达，表达产物经SDS-PAGE鉴定。表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定。结果：成功获得549bp人内皮抑素基因，测序证实序列正确。经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白。此蛋白在SDS-PAGE凝胶上显示出一条约75KD的阳性条带。重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间。|, http://www.100md.com
结论：人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达，并具有抗血管生成活性。|, http://www.100md.com
摘自《中国现代应用药学杂志》2003年第20卷第2期(《中国现代应用药学杂志》 )