自体胆汁胰管内注射建立急性出血坏死性胰腺炎家兔模型
奚维东,赵聪, 袁得强,郑敏, 杨秀兰,璩浙屏,成都市第三人民医院消化内科 四川省成都市 610031
项目负责人:赵聪, 610031,四川省成都市,成都市第三人民医院消化内科. czhao0050@sohu.com
电话:028-86649831-71099
收稿日期:2003-12-29 接受日期:2004-03-04
摘要
目的:我们以胰管内注射自身胆汁诱导和建立了急性出血坏死性胰腺炎家兔模型.
方法:日本纯种长耳白兔20只，造模组15只，对照组5只.通过抽取自身胆汁从十二指肠乳头处逆行穿刺主胰管注射，并于术后24h处死动物取出胰腺，送组织病理学检查分级，对照组开腹后找到胰腺，未作处理，同样于术后24h送组织病理学检查分级.
, http://www.100md.com
结果:模型组动物15只病理学诊断均为急性出血坏死性胰腺炎，水肿、炎症、出血、坏死4项指标评分均为III-IV级，造模成功.对照组只有1例为水肿I级，1例为水肿II级，其余均正常.
结论:通过兔胰管内逆行注射自身胆汁法诱导的重症胰腺炎模型胆源性胰腺炎病理生理相仿.
奚维东,赵聪, 袁得强,郑敏, 杨秀兰,璩浙屏. 自体胆汁胰管内注射建立急性出血坏死性胰腺炎家兔模型.世界华人消化杂志 2004;12(6):1473-1474
0 引言出血坏死性胰腺炎(急性重症胰腺炎)是一种死亡率高的严重危害人类生命健康的临床常见疾病之一，其发病机制和治疗方法一直是国内外医学研究的重点和热点内容之一.胰酶的自身消化作用、炎性递质和微循环障碍在该病的发生和进展过程中起重要作用.近年来的研究表明细胞凋亡参与胰腺炎的病理生理过程，胰腺炎的严重程度与胰腺细胞凋亡呈负相关关系.为研究生长抑素对实验性急性出血坏死性胰腺炎中细胞凋亡的影响，我们以胰管内注射自身胆汁成功地诱导和建立了急性出血坏死性胰腺炎家兔模型.现将建模方法报道如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 日本纯种长耳白兔20只，体质量1800-2 400 g (四川大学医学院实验动物中心提供).其中造模组15只，对照组5只.
1.2 方法 取成年日本长耳白兔15只，动物房饲养24-48h后禁食不禁水12h. 造模前先用20g/L硫贲妥钠3-6mg ip麻醉后将动物固定于手术台上;采用上腹正中切口，分离出胆囊后，用5号针穿刺胆囊取胆汁备用.仔细分离辨认胰腺及胰管与十二指肠交接处，用4.5号针从十二指肠乳头处对侧逆行穿刺进针，进入主胰管1-2mm后缓慢注入自身胆汁0.2mL/kg [1]; 注射后即见主胰管呈绿黄色，证实注射成功;拔针后逐层关腹.术后继续禁食，于手术后24h用超量硫贲妥钠处死动物;随即迅速切开腹腔，其中9只见腹腔有少量血性腹水;所有动物胰腺体积明显增大，呈紫色;仔细分离并迅速切除动物胰腺，将组织固定于40g/L甲醛中送组织病理学检查.对照组开腹后找到胰腺，未作处理则关腹，术后24h处死动物，见腹腔有少许透明腹水，胰腺无明显变化.石蜡包埋后切片，HE常规染色后显微镜观察.胰腺组织病理学的标准评分法采用Schimidt法[2].水肿、炎症、出血、坏死4项指标，每项指标均分为I-IV级，以IV级为最重.
, http://www.100md.com
2 结果造模组动物15只组织病理学诊断均为急性出血坏死性胰腺炎，水肿、炎症、出血、坏死4项指标评分均为III-IV级，仅1例出血评分为II级.评分较为集中，13例为水肿IV级(87%)，12例为炎症IV级(80%)，9例为出血III级(60%)，11例为坏死III级(73%).造模成功. 对照组只有1例为水肿I级，1例为水肿II级，其余均正常.
3 讨论急性出血坏死性胰腺炎目前仍是临床常见死亡率较高的疾病，其发病机制未完全明确，且无特效的治疗药物和方法，故仍是临床和基础研究的热点.制备理想的急性出血坏死性胰腺炎模型是研究其发病机制和评价药物疗效的主要手段.造模方法有食物或药物(雨蛙素)诱导法、胰管内注射诱导法、胰管结扎诱导法和十二指肠闭襻法等[1,3-6]. 其中食物或药物诱导法多用于制造水肿型胰腺炎模型，十二指肠闭襻法由于不符合生理条件且存活率较低，不适合进行药物评价尤其是观察胰腺损伤后的恢复情况.胰管内注射诱导法更接近生理条件，多用于制备急性出血坏死性胰腺炎，常用的注射液有30-50g/L牛磺胆酸钠，糖脱氧胆酸，自身胆汁等[7-9]，但牛磺胆酸钠，糖脱氧胆酸价格较昂贵，自身胆汁则方便、便宜.常用的造模动物有犬、猪、兔和大鼠等[10-12]，犬模型操作方便但费用较高，且有品种上的差异;大鼠较便宜但操作困难且不易长期饲养，死亡率高.兔模型则价格相对便宜、易饲养，存活率高.我们通过兔胰管内逆行注射自身胆汁法诱导的重症胰腺炎模型是根据胆汁反流入胰管，激活胰蛋白酶原，引起胰腺自身消化和全身炎症反应，是人类急性胰腺炎常见的发病因素，且与胆源性胰腺炎病理生理相仿[1].本模型与对照组比较，胰腺组织均出现典型的急性出血坏死性胰腺炎的病理改变，且比较集中，无明显差异，证明该方法稳定可靠，操作简单，重复性好，费用低，且死亡率低.通过兔急性胰腺炎模型的建立，我们可以进一步观察比较不同药物对重症胰腺炎的作用效果及胰腺的恢复情况，以指导临床用药，降低胰腺炎的死亡率.
, 百拇医药
4 参考文献1 沈魁, 钟守先,张圣道. 胰腺外科.第1版.北京: 人民卫生出版社,2000:629-631
2 Schmidt J, Rattner DW, Lewandrowski K, Compton CC, Mandavilli U,Knoefel WT, Warshaw AL. A better model of acute
Pancreatitis for evaluating therapy. AnnSurg 1992; 215:44-56
3 Hirano T, Hirano K. Glucagon ameliorates pancreatic subcelluarredistribution of lysosomal enzyme in rats with acute
, http://www.100md.com
pancreatitis of closed duodenal loop. DigSurg 1999; 16:16-21
4 Eibl G, Forgacs B, Hotz HG, Buhr HJ, Foitzik T. Endothelin A butnot endothelin B receptor blockade reduces capillary
permeability in severe experimentalpanreatitis. Pancreas 2002;25:15-20
5 Urunuela A, Manso MA, de-la-Mano AM, Sevillano S, Orfao A, de-DiosI. Asynchronous impairment of calcium homoeo-
, http://www.100md.com
stasis in different acinar cells afterpancreatic duct obstruction in rat. Clin Sci (Lond) 2002;102:615-622
6 Cui HF, Bai ZL. Protective effects of transplanted and mobilizedbone marrow stem cells on mice with severe acute
pancreatitis. World J Gastroenterol 2003;9:2274-2277
7 Foitzik T, Hotz HG, Hotz B, Wittig F, Buhr HJ. Selective inhibitionof cyclooxygenase-2 (cox-2) reduces prostaglandin E2
, http://www.100md.com
production and attenuates systemic diseasesequelae in experimental pancreatitis. Hepatogastroenterology
2003;50:1159-1162
8 Strate T, Mann O, Kleinhans H, Schneider C, Knoefel WT, Yekebas E,Standl T, Bloechle C, Izbicki JR. Systemic
intravenous infusion of bovine hemoglobinsignificantly reduces microcirculatory dysfunction in experimental induced
pancreatitis in the rat. Ann Surg 2003;238:765-771
, 百拇医药
9 Yasuda T, Takeyama Y, Ueda T, Takase K, Nishikawa J, Kuroda Y.Splenic atrophy in experimental severe acute
pancreatitis. Pancreas 2002;24:365-372
10 Kinnala PJ, Kuttila KT, Gronroos JM, Havia TV, Nevalainen TJ,Niinikoski JH. Splanchnic and pancreatic tissue perfusion in
experimental acute pancreatitis. Scand JGastroenterol 2002;37:845-849
11 Qin HL, Su ZD, Hu LG, Ding ZX, Lin QT. Effect of early intrajejunalnutrition on pancreatic pathological features and gut
, http://www.100md.com
barrier function in dogs with acutepancreatitis. Clin Nutr 2002;21:469-473
12 Kinnala PJ, Gronroos JM, Kuttila KT, Havia TV, Nevalainen TJ,Peltola O, Niinikoski JH. Catalytic activity of phospholipase
A2 in blood plasma and pancreatic tissueperfusion in early experimental acute pancreatitis. Langenbecks Arch Surg
2002;386:587-591, 百拇医药( 奚维东, 赵 聪, 袁得强, 郑 敏, 杨秀兰, 璩浙屏)
项目负责人:赵聪, 610031,四川省成都市,成都市第三人民医院消化内科. czhao0050@sohu.com
电话:028-86649831-71099
收稿日期:2003-12-29 接受日期:2004-03-04
摘要
目的:我们以胰管内注射自身胆汁诱导和建立了急性出血坏死性胰腺炎家兔模型.
方法:日本纯种长耳白兔20只，造模组15只，对照组5只.通过抽取自身胆汁从十二指肠乳头处逆行穿刺主胰管注射，并于术后24h处死动物取出胰腺，送组织病理学检查分级，对照组开腹后找到胰腺，未作处理，同样于术后24h送组织病理学检查分级.
, http://www.100md.com
结果:模型组动物15只病理学诊断均为急性出血坏死性胰腺炎，水肿、炎症、出血、坏死4项指标评分均为III-IV级，造模成功.对照组只有1例为水肿I级，1例为水肿II级，其余均正常.
结论:通过兔胰管内逆行注射自身胆汁法诱导的重症胰腺炎模型胆源性胰腺炎病理生理相仿.
奚维东,赵聪, 袁得强,郑敏, 杨秀兰,璩浙屏. 自体胆汁胰管内注射建立急性出血坏死性胰腺炎家兔模型.世界华人消化杂志 2004;12(6):1473-1474
0 引言出血坏死性胰腺炎(急性重症胰腺炎)是一种死亡率高的严重危害人类生命健康的临床常见疾病之一，其发病机制和治疗方法一直是国内外医学研究的重点和热点内容之一.胰酶的自身消化作用、炎性递质和微循环障碍在该病的发生和进展过程中起重要作用.近年来的研究表明细胞凋亡参与胰腺炎的病理生理过程，胰腺炎的严重程度与胰腺细胞凋亡呈负相关关系.为研究生长抑素对实验性急性出血坏死性胰腺炎中细胞凋亡的影响，我们以胰管内注射自身胆汁成功地诱导和建立了急性出血坏死性胰腺炎家兔模型.现将建模方法报道如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 日本纯种长耳白兔20只，体质量1800-2 400 g (四川大学医学院实验动物中心提供).其中造模组15只，对照组5只.
1.2 方法 取成年日本长耳白兔15只，动物房饲养24-48h后禁食不禁水12h. 造模前先用20g/L硫贲妥钠3-6mg ip麻醉后将动物固定于手术台上;采用上腹正中切口，分离出胆囊后，用5号针穿刺胆囊取胆汁备用.仔细分离辨认胰腺及胰管与十二指肠交接处，用4.5号针从十二指肠乳头处对侧逆行穿刺进针，进入主胰管1-2mm后缓慢注入自身胆汁0.2mL/kg [1]; 注射后即见主胰管呈绿黄色，证实注射成功;拔针后逐层关腹.术后继续禁食，于手术后24h用超量硫贲妥钠处死动物;随即迅速切开腹腔，其中9只见腹腔有少量血性腹水;所有动物胰腺体积明显增大，呈紫色;仔细分离并迅速切除动物胰腺，将组织固定于40g/L甲醛中送组织病理学检查.对照组开腹后找到胰腺，未作处理则关腹，术后24h处死动物，见腹腔有少许透明腹水，胰腺无明显变化.石蜡包埋后切片，HE常规染色后显微镜观察.胰腺组织病理学的标准评分法采用Schimidt法[2].水肿、炎症、出血、坏死4项指标，每项指标均分为I-IV级，以IV级为最重.
, http://www.100md.com
2 结果造模组动物15只组织病理学诊断均为急性出血坏死性胰腺炎，水肿、炎症、出血、坏死4项指标评分均为III-IV级，仅1例出血评分为II级.评分较为集中，13例为水肿IV级(87%)，12例为炎症IV级(80%)，9例为出血III级(60%)，11例为坏死III级(73%).造模成功. 对照组只有1例为水肿I级，1例为水肿II级，其余均正常.
3 讨论急性出血坏死性胰腺炎目前仍是临床常见死亡率较高的疾病，其发病机制未完全明确，且无特效的治疗药物和方法，故仍是临床和基础研究的热点.制备理想的急性出血坏死性胰腺炎模型是研究其发病机制和评价药物疗效的主要手段.造模方法有食物或药物(雨蛙素)诱导法、胰管内注射诱导法、胰管结扎诱导法和十二指肠闭襻法等[1,3-6]. 其中食物或药物诱导法多用于制造水肿型胰腺炎模型，十二指肠闭襻法由于不符合生理条件且存活率较低，不适合进行药物评价尤其是观察胰腺损伤后的恢复情况.胰管内注射诱导法更接近生理条件，多用于制备急性出血坏死性胰腺炎，常用的注射液有30-50g/L牛磺胆酸钠，糖脱氧胆酸，自身胆汁等[7-9]，但牛磺胆酸钠，糖脱氧胆酸价格较昂贵，自身胆汁则方便、便宜.常用的造模动物有犬、猪、兔和大鼠等[10-12]，犬模型操作方便但费用较高，且有品种上的差异;大鼠较便宜但操作困难且不易长期饲养，死亡率高.兔模型则价格相对便宜、易饲养，存活率高.我们通过兔胰管内逆行注射自身胆汁法诱导的重症胰腺炎模型是根据胆汁反流入胰管，激活胰蛋白酶原，引起胰腺自身消化和全身炎症反应，是人类急性胰腺炎常见的发病因素，且与胆源性胰腺炎病理生理相仿[1].本模型与对照组比较，胰腺组织均出现典型的急性出血坏死性胰腺炎的病理改变，且比较集中，无明显差异，证明该方法稳定可靠，操作简单，重复性好，费用低，且死亡率低.通过兔急性胰腺炎模型的建立，我们可以进一步观察比较不同药物对重症胰腺炎的作用效果及胰腺的恢复情况，以指导临床用药，降低胰腺炎的死亡率.
, 百拇医药
4 参考文献1 沈魁, 钟守先,张圣道. 胰腺外科.第1版.北京: 人民卫生出版社,2000:629-631
2 Schmidt J, Rattner DW, Lewandrowski K, Compton CC, Mandavilli U,Knoefel WT, Warshaw AL. A better model of acute
Pancreatitis for evaluating therapy. AnnSurg 1992; 215:44-56
3 Hirano T, Hirano K. Glucagon ameliorates pancreatic subcelluarredistribution of lysosomal enzyme in rats with acute
, http://www.100md.com
pancreatitis of closed duodenal loop. DigSurg 1999; 16:16-21
4 Eibl G, Forgacs B, Hotz HG, Buhr HJ, Foitzik T. Endothelin A butnot endothelin B receptor blockade reduces capillary
permeability in severe experimentalpanreatitis. Pancreas 2002;25:15-20
5 Urunuela A, Manso MA, de-la-Mano AM, Sevillano S, Orfao A, de-DiosI. Asynchronous impairment of calcium homoeo-
, http://www.100md.com
stasis in different acinar cells afterpancreatic duct obstruction in rat. Clin Sci (Lond) 2002;102:615-622
6 Cui HF, Bai ZL. Protective effects of transplanted and mobilizedbone marrow stem cells on mice with severe acute
pancreatitis. World J Gastroenterol 2003;9:2274-2277
7 Foitzik T, Hotz HG, Hotz B, Wittig F, Buhr HJ. Selective inhibitionof cyclooxygenase-2 (cox-2) reduces prostaglandin E2
, http://www.100md.com
production and attenuates systemic diseasesequelae in experimental pancreatitis. Hepatogastroenterology
2003;50:1159-1162
8 Strate T, Mann O, Kleinhans H, Schneider C, Knoefel WT, Yekebas E,Standl T, Bloechle C, Izbicki JR. Systemic
intravenous infusion of bovine hemoglobinsignificantly reduces microcirculatory dysfunction in experimental induced
pancreatitis in the rat. Ann Surg 2003;238:765-771
, 百拇医药
9 Yasuda T, Takeyama Y, Ueda T, Takase K, Nishikawa J, Kuroda Y.Splenic atrophy in experimental severe acute
pancreatitis. Pancreas 2002;24:365-372
10 Kinnala PJ, Kuttila KT, Gronroos JM, Havia TV, Nevalainen TJ,Niinikoski JH. Splanchnic and pancreatic tissue perfusion in
experimental acute pancreatitis. Scand JGastroenterol 2002;37:845-849
11 Qin HL, Su ZD, Hu LG, Ding ZX, Lin QT. Effect of early intrajejunalnutrition on pancreatic pathological features and gut
, http://www.100md.com
barrier function in dogs with acutepancreatitis. Clin Nutr 2002;21:469-473
12 Kinnala PJ, Gronroos JM, Kuttila KT, Havia TV, Nevalainen TJ,Peltola O, Niinikoski JH. Catalytic activity of phospholipase
A2 in blood plasma and pancreatic tissueperfusion in early experimental acute pancreatitis. Langenbecks Arch Surg
2002;386:587-591, 百拇医药( 奚维东, 赵 聪, 袁得强, 郑 敏, 杨秀兰, 璩浙屏)
