关键词：内皮素；654-2；烧伤
[摘 要] 目的：观察烫伤早期血浆内皮素(ET)和乳酸脱氢酶(LDH)水平及654-2的影响。方法：以大鼠30%Ⅲ度体表烫伤为模型，检测了伤后2h、6h、12h、24h血浆ET和LDH的含量及应用654-2后的影响。结果：烫伤后2h、6h血浆ET(x±SEM，分别为104.4±3.8pg/ml、76.8±5.5pg/ml,n=8)较正常对照组(41.4±3.8pg/ml,n=8)明显升高，血浆LDH亦升高明显。654-2(10mg/kg，腹腔注射)治疗组，与烫伤组比较，伤后2h,6h血浆ET(62.6±4.1pg/ml，51.8±4.8pg/ml,n=8)明显下降。相关分析显示烫伤后血浆ET升高与血浆LDH呈显著正相关。结论：ET的升高可能参与了烧伤早期的组织损害，654-2可能通过抑制ET的升高发挥组织细胞保护作用。
Changesin Plasma Endothelin Level at the Early Stage of Severely Burned Rats and the Effect ofAnisodamine (654-2)
Zhong Keqin Ma Enqing
(Xian gya Hospital of Hunan Medical University 410008)
[Abstract] Objective: To observe the changesin plasma endothelin (ET) and lactic dehydrogenase (LDH) levels at the early stage postburn and the effect of Anisodamine (654-2). Method: Rats with 30%BSA 3rd degree scaldinjury were used in this experiment. Plasma ET and LDH levels at 2, 6, 12 and 24 hr postburn were determined and the effect of applying Anisodamine (654-2) was observed. Results:Plasma ET levels of scalded rats at 2 and 6 hr post injury were significantly higher thanthat of normal control and plasma LDH levels were also increased. In Anisodamine (654-2) (i.p. 10mg/kg) treating group, plasma ET level reduced greatly. Correlation analysisrevealed that the increase in plasma ET level was positively related to the increase inplasma LDH level. Conclusion: High ET level may play certain role in burn injury at theearly stage. Anisodamine (654-2) protected the tissue through inhibiting the increase inplasma ET level.
[Key words] Endothelin 654-2 Burn
内皮素(Endothelin简称ET)是体内迄今为止最强的缩血管物质。它与心源性、感染性、创伤性休克密切相关[1-3] 。ET在烧伤早期组织损害中的报道尚不多见。推测ET可能参与了烧伤早期的组织细胞损害。654-2保护组织细胞的作用机制是否与影响ET有关，也未见文献报道。本研究以30%大鼠烫伤为模型，观察烫伤后早期血浆ET、LDH的变化以及654-2的影响。
一、材料与方法
(一)实验动物及分组：本实验采用湖南医科大学实验动物中心提供的健康纯种Wistar大鼠72只，体重200g～250g，雌雄各半，随机分为三组：正常组8只(NC组)，烧伤组32只(B组)，烫伤+654-2治疗组32只(BA组)。
(二) 动物模型与处理：大鼠实验前常规喂养3天，观察有无异常。实验前自由饮水进食，将大鼠仰卧固定于特制的烫伤模型板上，将背部暴露，伤区不脱毛，不麻醉，浸入90℃恒温水浴15秒，造成大鼠背部30%Ⅲ度烧伤。正常组浸入室温15℃水中作为对照。
BA组在伤前即刻腹腔注射654-2(洞庭制药厂生产批号：92030)10mg/kg。NC组抽血前2h注射生理盐水0.1ml/kg作为对照。
B组，BA组分别于烫伤后2h、6h、12h、24h分批处死抽取心血。NC组试验开始后2h处死抽取心血。
(三) 观察指标及测定方法：ET测定：取心血2ml，加入含40ul抑肽酶和20ulEDTA-Na2 试管中，4℃,3000rpm,离心10分钟，-20℃冰箱保存。样本收齐后，使用解放军301医院生产的ET药盒，采用放射免疫法，按药盒说明书进行测定，单位pg/ml。
LDH测定：取心血1ml,2000rpm,4℃，离心5分钟，分离血浆，采用上海长征医学科学有限公司生产的LDH药盒，应用美国产ASCA自动生化分析仪进行测定，单位U/L。
(四) 统计学处理：所有数据均应用Systat软件，用计算机进行统计处理，数值以±SEM表示，P<0.05为差异显著标准，P<0.01为差异非常显著标准。
二、结 果
(一) 烫伤大鼠血浆ET的变化：B组烫伤后血浆ET含量在2h达峰值，随后逐渐下降；BA组伤后ET血浆含量较B组降低(见表1)。
(二) 烫伤大鼠血浆LDH的变化：血浆LDH活性在B组各时相点均较NC组显著升高(P<0.01)，并逐步下降。BA组伤后各时相点均明显低于B组(P<0.01)，见表2。
表1 烫伤大鼠血浆ET变化
| 组 别 | 伤前(n=8) | 伤后2h(n=8) | 6h(n=8) | 12h(n=8) | 24h(n=8) |
| NC | 41.4±3.8 | ||||
| B | 104.4±6.0## | 76.8±5.5## | 59.3±5.0 | 52.3±3.5 | |
| BA | 62.6±4.1ΔΔ | 51.8±4.8ΔΔ | 52.6±3.5 | 53.0±3.8 |
表2 烫伤大鼠血浆LDH变化
| 组 别 | 伤前(n=8) | 伤后(n=8) | 6h(n=8) | 12h(n=8) | 24h(n=8) |
| NC | 596.6±80.8 | ||||
| B | 2394.8±64.5## | 2138.6±128.2## | 2047.1±96.2## | 1414.7±79.3## | |
| BA | 1625.3±106.1##ΔΔ | 1461.2±92.6##ΔΔ | 1408.1±96.0##ΔΔ | 864.9±49.1ΔΔ |
三、讨 论
(一) 烧伤早期血浆ET的变化及意义：李元义等人研究30%TBSAⅢ度烧伤大鼠时发现血浆内皮素在伤后很快升高，4小时达高峰[4] 。我们的结果观察到伤后6小时内升高较为明显，且以2h即达高峰。烧伤早期血浆ET快速升高原因可能与多种因素有关，如严重烧伤后强烈的应激反应，低血容量造成的缺血缺氧状态，体内细胞因子如肿瘤坏死因子的作用，氧自由基等均能刺激机体产生大量ET。
LDH是反映组织细胞损害程度的指标。本实验观察到烫伤后早期LDH在各时相点均有明显升高，表明组织细胞损害严重。相关分析表明ET与LDH呈正相关。提示ET参与了烧伤早期的组织损害。高建川等[5] 的动物实验证实了内源性ET参与了烧伤早期的肾脏损害。我们认为在烧伤早期ET是一种较重要的致损伤因子。
(二) 654-2作用的可能新机制：654-2抗体克的机制在于它能在细胞水平上保护细胞，提高细胞对缺血缺氧的耐受性，稳定亚细胞结构，减少休克因子的产生，其细胞作用机制主要是通过钙拮抗作用[6-7] 。本实验结果表明：654-2具有抑制ET升高的作用。在抑制ET升高的同时，亦减轻了组织细胞损害的程度。654-2抑制血浆ET的升高，可能为直接抑制ET的表达释放，或为减轻组织细胞损害而间接减少ET的产生，或二者兼而有之，尚待阐明。推测654-2在抗体克中保护细胞作用的机制还可能与抑制ET有关。
参 考 文 献
[1]Kubac G,et al.Plasma endothelin is elevated inearly hours following myocardial infarction.Hypertension 1990;8(Suppl 3):S4
[2]唐朝枢，等.内皮素在休克中的发病学意义.生理学报，1989，41(5)：489
[3]张连元，等.内皮素在止血带休克发病学中的意义.中国病理生理杂志，1992，8(2)：380
[4]李元义，等.内皮素-1在大鼠烧伤后血管通透性增加中的发病作用.中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编：194
[5]高建川，等.内皮素在大鼠烧伤早期肾脏损害中的作用.中华整形烧伤外科杂志，1997，13(1)：21
[6]苏静怡，等.山莨菪碱(654-2)抗休克作用机制的研究进展.生理科学进展，1985，16(4)：317
[7]唐朝枢，等.山莨菪碱(654-2)的钙拮抗作用.北京医学院学报，1985，17(3)：165 , 百拇医药