关键词：MEBO 抗菌作用 厌氧菌 真菌 细菌变异
内容摘要 观察湿润烧伤膏(MEBO)对有芽胞厌氧菌(破伤风杆菌)、无芽胞厌氧菌(脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌)和真菌(白色念珠菌)等的抗菌作用。将上述细菌分别接种在含MEBO的琼脂培养基上传代培养，观察MEBO对细菌的作用。实验结果MEBO使细菌的形态结构、培养特性等方面发生变异，并明显地影响细菌的生长繁殖速度和侵袭力。结果表明MEBO具有较强的广谱抗菌作用。
Experimental Research on theAntibacterial Effect of MEBO
Qu Yunying, et al.
Binzhou Medical College 256603
Abstract To test the antibacterial effectof MEBO against anaerobic spore-bearing bacillus (Bacillus tetani), anaerobicnon-spore-bearing bacillus (Bacteroides fragilis, propionibacterium acnes) and fungi (Candida albicans), etc. MEBO was applied respectively onto the culture media of thesebacteria. The results revealed that there were variations of morphological structure andcultural character of these bacteria and their proliferation rate and invasive power werealso significantly reduced. These results provide evidence for the antibacterial effect of MEBO.
Key words MEBO antibacterial effect anaerobic bacteria fungi bacterial variation
从大量烧伤创疡病人湿润暴露疗法用MEBO治疗的临床研究资料表明，MEBO具有较强的控制烧伤创面感染的能力，其作用机理是多方面的[1] 。本实验观察了MEBO使厌氧芽胞杆菌——破伤风杆菌、厌氧无芽胞杆菌——脆弱类杆菌和痤疮丙酸杆菌、真菌——白色念珠菌等在形态结构、菌落特点和致病性等方面发生变异。实验研究结果表明，烧伤湿润暴露疗法的MEBO具有较强的广谱抗菌作用，又能给予被烧伤破坏了的机体局部皮肤组织残存细胞以维持正常生命的环境和促进分裂再生的条件[2] ，是一种具有双向调节作用的药物。
材料和方法
材料：
MEBO：北京光明中医烧伤创疡研究所研制。B224型厌氧培养缸：滨医附院检验科任全研制。厌氧培养基：上海生物制品研究所。菌种：脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌，购自上海医科大学。破伤风杆菌、白色念珠菌，由滨医附院检验科提供。以上细菌经厌氧琼脂培养基传代后备用。
方法及分组：
MEBO试验组 将四种细菌(脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌、破伤风杆菌和白色念珠菌)分别接种在含有一定浓度MEBO的培养基上。厌氧菌置于厌氧培养缸37℃培养48h～72h为一代。白色念珠菌置于恒温箱37℃培养24h～48h为一代。连续传代4～6代，每代进行革兰氏染色(Gram′s)，观察细菌的染色反应及形态大小、菌落特点等。
正常对照组 以上四种细菌在接种到含MEBO的培养基前(原代菌)进行Gram′s，观察细菌形态、大小及菌落特点等。
检测指标
细菌变异现象的观察：
(1)观察破伤风杆菌、脆弱类杆菌和痤疮丙酸杆菌 将上述三种细菌分别接种在含有一定浓度MEBO的培养基上，进行传代培养后观察每代细菌的形态、菌落等的变异现象。
(2) 观察白色念珠菌在含MEBO培养基上的变异现象。
芽管试验：
将原代菌及在MEBO培养基上传代的1～2代、5～6代白色念珠菌分别接种在0.5ml人血清液体培养基中，置于37℃水浴箱水浴3h，取菌涂片、染色、计数500个白色念珠菌，求其芽管产生百分率。
MEBO对细菌生长速度的影响：
将在含有MEBO的培养基上传代培养的第10代金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和原代金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌，用无菌取菌环分别取相同量的菌落，研磨于0.1ml盐水中，再加盐水至1ml。分别取菌液置于血球计数盘上，计数细菌数/ml，并进行比较。
MEBO对绿脓杆菌侵袭力的影响：
取在MEBO培养基传代培养的第10代绿脓杆菌和在普通培养基上培养的原代绿脓杆菌，分别取菌落于盐水中计数、稀释，使其含细菌数为3×106 /ml。然后再取菌液分别给小鼠皮内注射0.1ml，20h后处死。于注射细菌部位，由皮肤到肌层，取一长方形组织块，进行固定包埋，组织切片，HE染色等。观察病理变化。
结 果
一、MEBO对厌氧菌的作用见表1
表1 MEBO对厌氧菌的作用
| (1)破伤风杆菌 | ||
| 对照组 | G+ 细长杆菌，个别可以见到菌体顶端形成芽胞，菌体呈鼓槌状，菌落呈膜状生长(H)。见图1。 | |
| MEBO 试 验 组 | 1～2代 | 多数细菌呈长杆状或长丝状* ，可见到少许细菌形成芽胞，菌落略扁平，干糙，未见膜状生长(O)。见图2。 |
| 3～4代 | 多数细菌为长短不一杆菌，许多细菌可见有芽胞形成，菌体呈鼓槌状，少数细菌仍呈长杆状或长丝状，菌落略扁平，干糙，H→O变异。见图3。 | |
| (2)痤疮丙酸杆菌 | ||
| 对照组 | G+ 无芽胞杆菌，菌体直或微弯，菌落较小，圆形，表面光滑。见图4。 | |
| MEBO 试 验 组 | 1～2代 | 基本同对照组。 |
| 3～4代 | 出现长(似双杆菌)短不一的杆菌。细菌有聚集融合现象。菌落小，略扁平，干糙。 | |
| 5～6代 | 多为小的球杆菌，菌体有着色深的颗粒。菌落小，略扁平，干糙。见图5。 | |
| (3)脆弱类杆菌 | ||
| 对照组 | G+ 无芽胞中等大小杆菌，两端钝圆，菌落微凸，表面光滑。 | |
| MEBO 试 验 组 | 1～2代 | 基本同对照组。 |
| 3～4代 | 出现较长杆菌(似双杆菌)和球杆菌，菌落略扁平，表面较干糙。 | |
| 5～6代 | 多数细菌呈现小的球形菌和小的球杆菌。细菌聚集融合成不规则圆形体，菌落略扁平，干糙。 | |
[注] *表示在含MEBO浓度较低(25%)的培养基上，破伤风杆菌呈现长丝状变异比浓度较高的多。
二、MEBO对白色念珠菌的作用：见表2
表2 MEBO对白色念珠菌的作用
| 对照组 | 菌体呈卵圆形，可见到芽生孢子和少许假菌丝。菌落为乳白色，表面光滑湿润。见图6。 芽管试验：芽管产生率的90%。见图8。 | |
| MEBO 试 验 组 | 1～2代 | 形态基本同对照组。菌落较对照组略小，扁平。 芽管试验：芽管产生率约85%。 |
| 3～4代 | 有些菌体呈现较大圆球形及卵圆形，或大小不等的圆球形。可见到假菌丝，菌落较扁平，干糙。 | |
| 5～6代 | 菌体呈圆球形或卵圆形。可见到棒状和长杆状及长短不等的菌丝。芽生孢子较少。菌落较扁平，干燥，硬。见图7。 芽管试验：芽管产生率约0.5～2%* ，见图9。 | |
[注] *表示在含MEBO的培养基上，MEBO浓度不同，芽管产生率也不同。浓度低(25%)的培养基上芽管产生率为2%，略高于浓度高的。
三、MEBO对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌生长繁殖速度的影响：见表3
表3 MEBO对金葡、绿脓杆菌生长速度的影响
| 菌 种 | 原代培养 (细菌数/ml) | MEBO传代培养 第10代(细菌数/ml) |
| 金黄色葡萄球菌 | 1.4×108 | 7.5×106 |
| 绿脓杆菌 | 2×108 | 6.5×106 |
四、MEBO对绿脓杆菌侵袭力的影响：见表4
表4 MEBO对绿脓杆菌侵袭力的影响
| 病理所见 | 对照组 | 皮下充血水肿，有炎症细胞浸润，见有化脓带。 |
| MEBO 试 验 组 | 皮下及横纹肌组织可见到少许炎症细胞浸润，未见化脓现象。 |
讨 论
细菌生长繁殖迅速，世代周期短(一般20min为一代)。因此，有些细菌在繁殖过程中易受环境中不利因素的影响而发生细菌性状的变异。如细菌形态结构的变异、培养特性、毒力、抗原性和耐药性等方面的变异。细菌形态的变异与细菌的分裂有关。细菌分裂过程是一个复杂的过程，它对环境中非致死性不利因素作用的敏感性比蛋白质或DNA合成对有害物质的敏感性更大。因此，细菌细胞可出现多形态——多核丝状或圆球状等变异，如破伤风杆菌、脆弱类杆菌。这是由于细胞壁合成受影响不能及时形成或断裂，而代谢仍在进行有关[3] 。细菌性状变异的发生与作用于细菌的不利因素的强度、作用的时间有密切关系。从本实验中清楚地观察到，同一种细菌在含不同浓度MEBO的培养基上出现形态变异的时间及形态变异的特点是有差异的。
本实验观察了MEBO对破伤风杆菌、脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌和白色念珠菌等的抗菌作用。这些细菌都是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可致病，大多数属于内源性感染。烧伤病人由于大量应用抗生素，易造成菌群失调，导致条件致病菌白色念珠菌的感染，时有报导。烧伤创面的细菌感染，需氧菌(如金葡菌、大肠杆菌和绿脓杆菌等)仍是优势菌。由于烧伤创面可发生缺血坏死，也易发生厌氧菌的感染，但因标本细菌学检查时不检查或不经常检查厌氧菌，故易被漏检。王德旺等(1983年)报告34例烧伤创面厌氧菌培养阳性率为23.9%，且均为多菌性混合感染[4] 。
破伤风杆菌属于厌氧芽胞杆菌，在含MEBO的培养基中传代后，出现长丝状变异，在第3代有较多的菌体形成芽胞。我们知道细菌是以二分裂法进行繁殖，具有繁殖能力的菌体称为繁殖体。一个细菌只形成一个芽胞，一个芽胞在适宜条件下也只生成一个菌体(繁殖体)，细菌数量并不增多，所以细菌芽胞的形成并非细菌繁殖方式，而是细菌对营养缺乏等不利因素环境的一种反应，此时细菌的生命活动处于休眠状态，代谢缓慢，但芽胞保持了细菌的生命活动[5] 。芽胞在不适宜因素存在的环境中是不能形成繁殖体而进行繁殖的。破伤风杆菌属于厌氧菌，只有在一定条件下细菌才能进行繁殖，产生外毒素而致病。同样，白色念珠菌以出芽方式进行繁殖，在含MEBO的培养基上传代至第6代，见到芽生孢子较正常念珠菌的芽生孢子要少的多，芽管产生率由正常的90%降至0.5%～2%。由此可见MEBO对破伤风杆菌、白色念珠菌的生长繁殖、致病性等产生的影响。
从表3可见到在含MEBO的培养基上传代至第10代的绿脓杆菌，经20h培养，菌落的细菌数/ml与原代细菌相比减少约30倍，对小鼠机体组织的侵袭力显著降低。结果说明细菌处于不利因素的条件下，不仅使细菌的形态结构发生变异，而且它的生理特性也随之发生了变化[6] 。
实验研究曾观察了MEBO对烧伤感染常见的G+ 需氧菌金葡菌、G- 菌大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等的抗菌作用，和本实验对G+ 有芽胞厌氧菌(破伤风杆菌)、G- 无芽胞厌氧菌(痤疮丙酸杆菌、脆弱类杆菌)及真菌(白色念珠菌)等的抗菌作用。实验研究结果和临床研究资料表明，MEBO是一种具有较强的广谱抗菌作用和促进烧伤创面愈合的双向调节作用的药物。
参考文献
[1]杨克非，马剑明，杨旗，等.论MEBO治疗各类创疡病4954例的综述报告.中国烧伤创疡杂志，1997，(4)：16
[2]徐荣祥主编.中国烧伤创疡学.中国烧伤创疡杂志社，1997，137～140
[3]陈世和，陈建华，王士芬编著.微生物生理学原理.同济大学出版社，1992，265
[4]陈聪敏，等编著.厌氧菌及其感染.上海医科大学出版社，1989，94
[5]陆德源主编.医学微生物学.第三版，人民卫生出版社，1988，20
[6]程皆能主编.微生物生理学.复旦大学出版社，1987，220 , http://www.100md.com