新生牛促肝细胞生长素对HL-60细胞增生的影响
朱宏丽,卢学春, 范辉, 辛宏, 庄晓萌, 姚善谦,中国人民解放军总医院南楼血液科 北京市 100853
项目负责人: 朱宏丽, 100853, 北京市海淀区复兴路28号, 中国人民解放军总医院南楼血液科. bjzhl202_cn@sina.com
电话:010-66936403
收稿日期:2003-10-21 接受日期: 2003-12-06
Effect of hepatocyte growth-promoting substance on proliferation of HL-60 cell line
, 百拇医药 Hong-Li Zhu, Xue-Chun Lu, Hui Fan, Hong Xin, Xiao-Mei Zhuang, Shan-Qian Yao
Hong-Li Zhu, Xue-Chun Lu, Hui Fan, Hong Xin, Xiao-Mei Zhuang, Shan-Qian Yao, Department ofHematology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
Correspondence to: Hong-Li Zhu, Department of Hematology, GeneralHospital of Chinese PLA, 28 Fuxing Road, Haidian District, Beijing 100853,China. bjzhl202_cn@sina.com
, 百拇医药
Received: 2003-10-21 Accepted:2003-12-06
Abstract
AIM: To explore the effect of hepatocyte growth-promotingsubstance(HGS)on the proliferation of HL-60 cell line and its possiblemechanism.
METHODS: HL-60 cells were cultured with different concentrations ofHGS, As2O3, or As2O3 (107 mol/L) plus HGS(40 mg/L). At day 0, 1, 2 and 3,cell growth was examined by MTT assay and Trypan blue, cell cycle wasmeasured by flow cytometry. Meanwhile, DNA damage and repair wasdetermined by men single-cell gel eiectrophoresis.
, http://www.100md.com
RESULTS: HGS inhibited the growth of HL-60 cells in adose-dependent manner at concentrations ranging from 11.5 to 40 mg/L, with40 mg/L HGS exhibiting the strongest inhibitory effect. HGS(40 mg/L)notonly prevented HL-60 cells from entering G1 phase but also inhibited. DNAdamage repair. (-HGS and As2O3synergically inhibited the growth of HL-60cells.
CONCLUSION: HGS can inhibit theproliferation of HL-60 cells at a rather low concentration, which may berelated to its effect on the control of cell cycle and the inhibition ofDNA repair.
, 百拇医药
Key Words: Hepatocyte growth-promoting substance;As2O3;DNArepair
Zhu HL, Lu XC, Fan H, Xin H, Zhuang XM, Yao SQ. Effect of hepatocytegrowth-promoting substance on proliferation of HL-60 cell line. ShijieHuaren Xiaohua Zazhi 2005;13(3):351-354
摘要目的: 研究促肝细胞生长素(hepatocytegrowth-promoting substance, HGS)对急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60增生的影响,并探讨可能的作用机制.
, 百拇医药
方法: 体外悬浮培养法培养HL-60细胞, 分为空白对照组、三氧化二砷组、HGS组以及三氧化二砷(10-7mol/L)加HGS(40mg/L)组共四个实验组进行培养;在培养的第1、2、3和第4 d分别利用台盼蓝染色和MTT法检测细胞增生情况;采用流式细胞技术检测细胞周期动态变化;利用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤情况.
结果: HGS终浓度在11.5-45mg/L之间时对HL-60细胞的增生有剂量相关性抑制作用,以11.5 mg/L抑制作用最弱, 22.5mg/L组次之, 40 mg/L有最大的抑制作用;浓度为40 mg/L的HGS能够推迟HL-60细胞由G0期向G1期转化,减少进入细胞周期的细胞数量;浓度为40 mg/L的HGS能够抑制HL-60细胞DNA损伤后的修复;40mg/L的HGS与10-7 mol/L浓度的三氧化二砷对HL-60细胞的抑制有一定协同作用.
, http://www.100md.com
结论: HGS在较低浓度时即对HL-60细胞的增生有抑制作用,这种抑制作用可能是通过细胞周期调控和抑制细胞DNA损伤修复来实现的.
关键词: 促肝细胞生长素;三氧化二砷;DNA修复
朱宏丽,卢学春, 范辉,辛宏,庄晓萌, 姚善谦.新生牛促肝细胞生长素对HL-60细胞增生的影响. 世界华人消化杂志 2005;13(3):351-354
(PDF) 不同浓度HGS对HL-60细胞生长的影响.
2.2MTT法检测HGS对HL-60细胞生长的抑制作用 与生长曲线结果类似，MTT法检测结果表明HGS对HL-60细胞的生长有明显抑制作用，且这种抑制作用呈现剂量相关性，以11.5mg/L抑制作用最弱，22.5mg/L组次之，40mg/L有最大的抑制作用(表1).
, http://www.100md.com
表1 MTT比色法检测不同浓度HGS与HL-60细胞的共同培养结果
, http://www.100md.com
aP<0.05vs对照组，bP<0.01vs对照组.
2.3 HGS对HL-60细胞周期的影响 以二倍体细胞内的DNA含量作为DNA的相对含量1，利用流式细胞仪检测细胞内DNA含量，根据DNA相对含量来推算处于不同细胞周期的细胞数量.与对照组相比，终浓度为40mg/L的HGS处理过的细胞能够推迟HL-60细胞由G0期向G1期转化，减少进入细胞周期的细胞数量(图2).
图2 (PDF)HGS对HL-60细胞周期的影响. A: control，0 d; B:control，第1d; C: control，第2 d; D: control，第3 d; E: HGS，0 d; F: HGS，第1d; G: HGS，第2 d; H: HGS，第3 d.
, http://www.100md.com
2.4SCGE法检测HGS对HL-60细胞DNA损伤修复的影响 以SCGE法检测HL-60细胞的DNA损伤情况，结果浓度为40mg/L的
HGS对HL-60细胞DNA损伤的修复有抑制作用，这种作用要弱于三氧化二砷，且二者对HL-60细胞DNA损伤的修复有协同抑制作用(图3).
图3 (PDF) HGS和三氧化二砷对HL-60细胞SCGE的影响.各组与对照相比均P<0.01.
3 讨论HGS来源于肝脏，但也有人[3]认为某些白血病细胞可能也能分泌HGS.研究发现，HGS具有双向性作用，能促进某些种类
细胞的增生，但却抑制另外一些细胞的生长.不同作用取决于不同组织和细胞类型，即HGS作用具有组织特异性.对肝脏来源细胞，包括正常肝组织细胞和肝癌细胞，HGS有显著性促进增生作用，而对其他肿瘤细胞，既可能是促进作用也可能是抑制作用，目前尚缺乏系统研究.就白血病而言，HGS对不同白血病亚型的作用也不一致.Arefet al[4]检测了63例髓系白血病患者和15名健康人血清游离肝细胞生长因子(sHGF)浓度，结果发现不同类型初诊白血病患者血清sHGF的浓度各不相同，以M5为最高(1 425 mg/L)，M4(1 295 mg/L)次之，且sHGF水平与外周血白细胞数量相关(r = 0.718;P = 0.000).从所观察的病例来看，sHGF与疾病的预后密切相关.死亡患者在初诊时的sHGF水平要显著高于缓解和复发者.sHGF是白血病预后不良的指征之一.在白血病初诊时测定sHGF浓度，可能有助于白血病预后判断和选择适当治疗方案以期获得尽可能好的疗效.对于骨髓增生异常综合征(MDS)，HGF也有重要的临床意义.为此，需要对HGF在白血病诊治中的潜在作用进行深入研究.
, 百拇医药
我们在进行HGS功能对比试验时发现，HGS能够抑制HL-60、K562以及某些肺癌细胞系的增生.但尤以对HL-60的抑制作用最强，目前还未见到相关文献报道.通过对不同剂量HGS作用的对比研究发现，即便是很小剂量，HGS对HL-60细胞也具有抑制作用，说明HGS可能在急性早幼粒细胞白血病的治疗方面具有潜在的应用价值.因大多数化疗药物对肝脏的毒副作用是限制白血病强化治疗的制约因素，也是影响白血病的预后因素之一.选择一种既能够杀伤或者抑制白血病细胞的生长，同时又能够保护肝脏，甚至是促进肝细胞修复的药物，需进一步的大样本临床试验加以证实.
在观察到HGS抑制HL-60生长的同时，利用流式细胞仪检测了HL-60细胞周期的变化情况，G0期的延迟出现可能部分解释了HGS发挥作用的途径，而HL-60细胞DNA损伤修复的抑制从更深层次阐明了HGS对HL-60细胞生长抑制的机制.由于细胞周期与细胞增生和细胞分化密切相关，我们正积极在前面实验的基础上进行HGS对HL-60细胞分化影响方面的研究，以期能进一步明确HGS在白血病诊治中的重要意义，阐明HGS的作用机制，提高白血病疗效.总之，HGS有可能是某些类型白血病新的理想治疗药物，如急性早幼粒细胞白血病，需进一步深入研究.
, 百拇医药
4 参考文献1 罗运权, 吴孟超. 肝细胞生长因子. 新消化病学杂志 1997;5:198-199
2 邱华,贺福初, 杨晓明. 大鼠肝再生过程中肝再生刺激物质及其mRNA的动态变化.中国应用生理学杂志
1996;12:236-238
4 Mabed M, Aref S, Aladle DA. Hepatocellular carcinoma of a short malignant transformation time in a patient with
acute myeloblastic leukemia. Ann Hematol 2003;82:318-320
, 百拇医药
5 Aref S, Mabed M, Sakrana M. Soluble hepatocyte growth factor(sHGF)and vascular endothelial growth factor(sVEGF)
in adult acute myeloid leukemia:relationship to disease characteristics. Hematology 2002;7:273-279
6 Albitar M. Angiogenesis in acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome. Acta Haematol 2001;106:170-176
编辑 潘伯荣 审读 张海宁, 百拇医药( 朱宏丽, 卢学春, 范 辉, 辛 宏, 庄晓萌, 姚善谦)
项目负责人: 朱宏丽, 100853, 北京市海淀区复兴路28号, 中国人民解放军总医院南楼血液科. bjzhl202_cn@sina.com
电话:010-66936403
收稿日期:2003-10-21 接受日期: 2003-12-06
Effect of hepatocyte growth-promoting substance on proliferation of HL-60 cell line
, 百拇医药 Hong-Li Zhu, Xue-Chun Lu, Hui Fan, Hong Xin, Xiao-Mei Zhuang, Shan-Qian Yao
Hong-Li Zhu, Xue-Chun Lu, Hui Fan, Hong Xin, Xiao-Mei Zhuang, Shan-Qian Yao, Department ofHematology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
Correspondence to: Hong-Li Zhu, Department of Hematology, GeneralHospital of Chinese PLA, 28 Fuxing Road, Haidian District, Beijing 100853,China. bjzhl202_cn@sina.com
, 百拇医药
Received: 2003-10-21 Accepted:2003-12-06
Abstract
AIM: To explore the effect of hepatocyte growth-promotingsubstance(HGS)on the proliferation of HL-60 cell line and its possiblemechanism.
METHODS: HL-60 cells were cultured with different concentrations ofHGS, As2O3, or As2O3 (107 mol/L) plus HGS(40 mg/L). At day 0, 1, 2 and 3,cell growth was examined by MTT assay and Trypan blue, cell cycle wasmeasured by flow cytometry. Meanwhile, DNA damage and repair wasdetermined by men single-cell gel eiectrophoresis.
, http://www.100md.com
RESULTS: HGS inhibited the growth of HL-60 cells in adose-dependent manner at concentrations ranging from 11.5 to 40 mg/L, with40 mg/L HGS exhibiting the strongest inhibitory effect. HGS(40 mg/L)notonly prevented HL-60 cells from entering G1 phase but also inhibited. DNAdamage repair. (-HGS and As2O3synergically inhibited the growth of HL-60cells.
CONCLUSION: HGS can inhibit theproliferation of HL-60 cells at a rather low concentration, which may berelated to its effect on the control of cell cycle and the inhibition ofDNA repair.
, 百拇医药
Key Words: Hepatocyte growth-promoting substance;As2O3;DNArepair
Zhu HL, Lu XC, Fan H, Xin H, Zhuang XM, Yao SQ. Effect of hepatocytegrowth-promoting substance on proliferation of HL-60 cell line. ShijieHuaren Xiaohua Zazhi 2005;13(3):351-354
摘要目的: 研究促肝细胞生长素(hepatocytegrowth-promoting substance, HGS)对急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60增生的影响,并探讨可能的作用机制.
, 百拇医药
方法: 体外悬浮培养法培养HL-60细胞, 分为空白对照组、三氧化二砷组、HGS组以及三氧化二砷(10-7mol/L)加HGS(40mg/L)组共四个实验组进行培养;在培养的第1、2、3和第4 d分别利用台盼蓝染色和MTT法检测细胞增生情况;采用流式细胞技术检测细胞周期动态变化;利用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤情况.
结果: HGS终浓度在11.5-45mg/L之间时对HL-60细胞的增生有剂量相关性抑制作用,以11.5 mg/L抑制作用最弱, 22.5mg/L组次之, 40 mg/L有最大的抑制作用;浓度为40 mg/L的HGS能够推迟HL-60细胞由G0期向G1期转化,减少进入细胞周期的细胞数量;浓度为40 mg/L的HGS能够抑制HL-60细胞DNA损伤后的修复;40mg/L的HGS与10-7 mol/L浓度的三氧化二砷对HL-60细胞的抑制有一定协同作用.
, http://www.100md.com
结论: HGS在较低浓度时即对HL-60细胞的增生有抑制作用,这种抑制作用可能是通过细胞周期调控和抑制细胞DNA损伤修复来实现的.
关键词: 促肝细胞生长素;三氧化二砷;DNA修复
朱宏丽,卢学春, 范辉,辛宏,庄晓萌, 姚善谦.新生牛促肝细胞生长素对HL-60细胞增生的影响. 世界华人消化杂志 2005;13(3):351-354
(PDF) 不同浓度HGS对HL-60细胞生长的影响.
2.2MTT法检测HGS对HL-60细胞生长的抑制作用 与生长曲线结果类似，MTT法检测结果表明HGS对HL-60细胞的生长有明显抑制作用，且这种抑制作用呈现剂量相关性，以11.5mg/L抑制作用最弱，22.5mg/L组次之，40mg/L有最大的抑制作用(表1).
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表1 MTT比色法检测不同浓度HGS与HL-60细胞的共同培养结果
| 分组(mg/L) | A490 | |||
| 0d | 第1 d | 第2 d | 第3 d | |
| 0 | 0.496±0.006 | 0.560±0.010 | 0.803±0.011 | 0.890±0.020 |
| 11.5 | 0.493±0.006 | 0.530±0.010 | 0.570±0.020b | 0.617±0.015b |
| 22.5 | 0.493±0.006 | 0.516±0.011 | 0.536±0.015b | 0.603±0.006b |
| 40.0 | 0.493±0.006 | 0.507±0.021a | 0.510±0.010b | 0.557±0.006b |
, http://www.100md.com
aP<0.05vs对照组，bP<0.01vs对照组.
2.3 HGS对HL-60细胞周期的影响 以二倍体细胞内的DNA含量作为DNA的相对含量1，利用流式细胞仪检测细胞内DNA含量，根据DNA相对含量来推算处于不同细胞周期的细胞数量.与对照组相比，终浓度为40mg/L的HGS处理过的细胞能够推迟HL-60细胞由G0期向G1期转化，减少进入细胞周期的细胞数量(图2).
图2 (PDF)HGS对HL-60细胞周期的影响. A: control，0 d; B:control，第1d; C: control，第2 d; D: control，第3 d; E: HGS，0 d; F: HGS，第1d; G: HGS，第2 d; H: HGS，第3 d.
, http://www.100md.com
2.4SCGE法检测HGS对HL-60细胞DNA损伤修复的影响 以SCGE法检测HL-60细胞的DNA损伤情况，结果浓度为40mg/L的
HGS对HL-60细胞DNA损伤的修复有抑制作用，这种作用要弱于三氧化二砷，且二者对HL-60细胞DNA损伤的修复有协同抑制作用(图3).
图3 (PDF) HGS和三氧化二砷对HL-60细胞SCGE的影响.各组与对照相比均P<0.01.
3 讨论HGS来源于肝脏，但也有人[3]认为某些白血病细胞可能也能分泌HGS.研究发现，HGS具有双向性作用，能促进某些种类
细胞的增生，但却抑制另外一些细胞的生长.不同作用取决于不同组织和细胞类型，即HGS作用具有组织特异性.对肝脏来源细胞，包括正常肝组织细胞和肝癌细胞，HGS有显著性促进增生作用，而对其他肿瘤细胞，既可能是促进作用也可能是抑制作用，目前尚缺乏系统研究.就白血病而言，HGS对不同白血病亚型的作用也不一致.Arefet al[4]检测了63例髓系白血病患者和15名健康人血清游离肝细胞生长因子(sHGF)浓度，结果发现不同类型初诊白血病患者血清sHGF的浓度各不相同，以M5为最高(1 425 mg/L)，M4(1 295 mg/L)次之，且sHGF水平与外周血白细胞数量相关(r = 0.718;P = 0.000).从所观察的病例来看，sHGF与疾病的预后密切相关.死亡患者在初诊时的sHGF水平要显著高于缓解和复发者.sHGF是白血病预后不良的指征之一.在白血病初诊时测定sHGF浓度，可能有助于白血病预后判断和选择适当治疗方案以期获得尽可能好的疗效.对于骨髓增生异常综合征(MDS)，HGF也有重要的临床意义.为此，需要对HGF在白血病诊治中的潜在作用进行深入研究.
, 百拇医药
我们在进行HGS功能对比试验时发现，HGS能够抑制HL-60、K562以及某些肺癌细胞系的增生.但尤以对HL-60的抑制作用最强，目前还未见到相关文献报道.通过对不同剂量HGS作用的对比研究发现，即便是很小剂量，HGS对HL-60细胞也具有抑制作用，说明HGS可能在急性早幼粒细胞白血病的治疗方面具有潜在的应用价值.因大多数化疗药物对肝脏的毒副作用是限制白血病强化治疗的制约因素，也是影响白血病的预后因素之一.选择一种既能够杀伤或者抑制白血病细胞的生长，同时又能够保护肝脏，甚至是促进肝细胞修复的药物，需进一步的大样本临床试验加以证实.
在观察到HGS抑制HL-60生长的同时，利用流式细胞仪检测了HL-60细胞周期的变化情况，G0期的延迟出现可能部分解释了HGS发挥作用的途径，而HL-60细胞DNA损伤修复的抑制从更深层次阐明了HGS对HL-60细胞生长抑制的机制.由于细胞周期与细胞增生和细胞分化密切相关，我们正积极在前面实验的基础上进行HGS对HL-60细胞分化影响方面的研究，以期能进一步明确HGS在白血病诊治中的重要意义，阐明HGS的作用机制，提高白血病疗效.总之，HGS有可能是某些类型白血病新的理想治疗药物，如急性早幼粒细胞白血病，需进一步深入研究.
, 百拇医药
4 参考文献1 罗运权, 吴孟超. 肝细胞生长因子. 新消化病学杂志 1997;5:198-199
2 邱华,贺福初, 杨晓明. 大鼠肝再生过程中肝再生刺激物质及其mRNA的动态变化.中国应用生理学杂志
1996;12:236-238
4 Mabed M, Aref S, Aladle DA. Hepatocellular carcinoma of a short malignant transformation time in a patient with
acute myeloblastic leukemia. Ann Hematol 2003;82:318-320
, 百拇医药
5 Aref S, Mabed M, Sakrana M. Soluble hepatocyte growth factor(sHGF)and vascular endothelial growth factor(sVEGF)
in adult acute myeloid leukemia:relationship to disease characteristics. Hematology 2002;7:273-279
6 Albitar M. Angiogenesis in acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome. Acta Haematol 2001;106:170-176
编辑 潘伯荣 审读 张海宁, 百拇医药( 朱宏丽, 卢学春, 范 辉, 辛 宏, 庄晓萌, 姚善谦)
