葡萄糖激酶基因重组逆转录病毒的构建及鉴定(基金项目)
逆转录病毒,葡萄糖激酶基因,逆转录病毒,基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:30070356),文献标识码】A【文章编号】1606-8106(2004)15-1537-03,1材料与方法,2结果,3讨论
基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:30070356)【摘要】 目的 构建葡萄糖激酶(Glucokinase，GK)基因重组逆转录病毒，为将GK基因应用于糖尿病的基因治疗打下基础。方法 质粒pCMV4-GKZ1经EcoR1/BamH1双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体PLXSN，构建成重组逆转录病毒表达载体PLX-GK，采用酶切及测序对重组体进行鉴定。而后脂质体转染PLX-GK至包装细胞PA317，检测培养上清病毒滴度，挑选滴度较高的稳定产毒细胞系并对其行PCR及免疫组化鉴定。结果 构建了GK基因逆转录病毒表达载体PLX-GK，经酶切及序列分析证实目的基因插入位点和读码框架正确、无突变;建立了稳定产毒细胞系PA317/GK，其培养上清平均病毒滴度为6.8×10 5 cfu/ml，最高为1.8×10 6 cfu/ml，PCR及免疫组化证实GK基因整合入PA317/GK细胞基因组并有GK的表达。结论 成功构建了GK基因重组逆转录病毒。
关键词 葡萄糖激酶基因 逆转录病毒
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)15-1537-03
Construction of a recombinant retroviral containing GK gene
Zheng Hongting，Deng Huacong，Jian Rui，et al.
Department of Endocrinology，Affiliated Xinqiao Hospital of Third Millitary University of Medical Science， Chongqing400037.
【Abstract】 Objective To establish a recombinant retroviral containing GK gene ......
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