真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3的构建及在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达
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邓志宏 王锦玲 邱建华 金明 高下 王成济 杨安纲
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关键词：NT3；基因克隆；真核表达载体；成纤维细胞NT3；基因克隆；真核表达载体；成纤维细胞
目的 构建真核表达载体pIRES2 EGFP NT3,并观察其在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达及分布。方法 用RT PCR法 ,从人肝脏组织中克隆NT3 cDNA基因 ,构建真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3,并经PCR及EcoRI/BamHI双酶切鉴定。用脂质体介导的方法 ,将用真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞。转染 4 8h后 ,分别在荧光显微镜下及用免疫组化法观察转染细胞中NT 3的表达。结果 人NT 3cDNA的PCR产物约为 74 4bp。序列测定结果用BLAST软件进行同源性比较 ,同源性为 10 0 %。经EcoRI/BamHI双酶切证实 ,NT 3cDNA已成功地克隆到真核表达载体pIR ...
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