小鼠FasL基因的克隆和在软骨细胞中表达

http://www.100md.com 胡洪亮 曹谊林 刘阳 刘伟 崔磊 商庆新

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     胡洪亮；曹谊林；刘阳；刘伟；崔磊；商庆新 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室 上海200011 细胞与分子免疫学杂志 2003 4

    关键词：逆转录病毒；FasL；RT-PCR；软骨细胞；T-A克隆

    目的:获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆,通过逆转录病毒表达系统pLNCX2 在软骨细胞中进行表达,并分析其功能。方法:应用RT PCR和T A克隆技术,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中,再亚克隆到pLNCX2 中。转染软骨细胞后,以流式细胞仪检测mFasL蛋白的表达,以单向混合淋巴细胞反应鉴定其活性。结果:成功地克隆了0 .85 5kb的mFasLcDNA ,并经测序确证。通过pLNCX2 转染软骨细胞,转染率为6 0 .6 4 %。流式细胞仪检测到FasL蛋白的表达,并能显著抑制同种异体的单向混合淋巴细胞反应,刺激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%。结论:克隆到...

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