抗戊型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建与筛选

http://www.100md.com 魏华 张建琼 吕海芹 孟继鸿 鲁晓 王宣 谢维

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     魏华；张建琼；吕海芹；孟继鸿；鲁晓瑄；谢维 东南大学医学院遗传学研究中心 江苏南京210009；东南大学医学院病原生物学与免疫学系东南大学医学院江苏省基因诊断与治疗医学重点实验室； 细胞与分子免疫学杂志 2003 5

    关键词：噬菌体展示；抗体库；戊型肝炎病毒

    目的:构建人抗戊型肝炎病毒(HEV)噬菌体抗体库,筛选人源中和性抗HEV的单克隆抗体(mAb)。方法:取抗HEV抗体阳性的6例HE患者静脉血,分离淋巴细胞,提取细胞总RNA后逆转录。用一组人IgGFab基因特异性引物,分别扩增IgGκ0轻链与重链Fd段基因。将κ轻链与Fd段基因先后克隆入噬菌体载体pComb3的相应位点,经电穿孔法转化大肠杆菌XL1 Blue ,再以辅助噬菌体VCSM13超感染,构建人抗HEV噬菌体抗体库。采用独特的5轮筛选法(逐渐降低抗原包被量,严格洗脱条件) ,以固相化的4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原,筛选人噬菌体抗体库,并以ELISA鉴定噬菌体抗体。

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