草乌甲素软胶囊的药效学研究
【摘要】 目的 草乌甲素原剂型(片剂，注射剂)存在口服时口麻及疼痛等缺陷，临床急需进行剂型改进。方法 采用小鼠热板法或扭体法来评价草乌甲素软胶囊的镇痛作用，采用小鼠甲醛法来评价其抑制痒痛作用，运用角叉菜胶法及小鼠腹腔染料法来评价其抗炎作用。结果 本品0.5～0.75mg/kg灌胃，明显拮抗物理或化学性刺激所致疼痛，抑制痒痛反应及腹腔毛细血管渗透性的增加，显著拮抗大鼠关节炎模型的足肿胀。结论 与草乌甲素原剂型比较，草乌甲素软胶囊具有明显的抗炎镇痛作用，且无注射剂剧痛或吞服片剂口麻等缺陷。
关键词 草乌甲素 软胶囊 抗炎镇痛
龙头乌头(Aconition Longtounense T.L.Ming)系毛茛科乌头属植物 [1] 药用其根，产于云南滇南地区，为云南民间常用草药，主要用于治疗风湿性关节炎、肩周炎、四肢扭伤，沿用历史悠久 [2] 。
昆明植物研究所于20世纪90年代成功地提取分离出有效成份———滇西嘟拉碱甲，又名草乌甲素 [3] ，用于治疗风湿性关节炎，疗效显著 [4] 。因原有剂型(片剂，注射剂)存在口服口麻及注射疼痛等不便之处，急需进行剂型改进，本实验初步评价草乌甲素软胶囊的抗炎镇痛作用，为草乌甲素片剂改为软胶囊用于临床抗炎镇痛提供进一步的科学依据。
1 材料
1.1 动物 Wistar大鼠，体重(80～230g)。雌雄各半，由中科院昆明动物所提供(合格证号:云卫动管字第B06号)。ICR小鼠，体重18～23g，雌雄各半，由云南省天然药物药理重点实验室提供(合格证号:云卫动管第A12号)。
1.2 药物与试剂 草乌甲素软胶囊由昆明制药股份有限公司提供。草乌甲素片由云南弥勒制药厂生产。阿司匹林(aspirin，asp)结晶，sigma公司产品，使用前溶于100mmol/L 的Na 2 CO 3 中，以HCl调pH值约7.0。
1.3 仪器 临床生化分析仪(CL-770，日本岛津公司)。
2 方法和结果
2.1 大鼠角叉菜胶足肿胀法 Wistar大鼠60只，雌雄各半，随机分成6组:生理盐水及空白溶媒对照组均给予等体积(20ml/kg)，阿司匹林组(200mg/kg)，草乌甲素片组(0.5mg/kg)、草乌甲素软胶囊低剂量组(0.5mg/kg)和高剂量组(0.75mg/kg)，上述各组动物，均每日上午、下午各灌胃一次，连续3天，第四天上午按各组剂量一次给药，45min后，于大鼠右侧足跖皮下注射1%角叉菜胶混悬液0.1ml，左侧注射生理盐水0.1ml，采用毛细管放大法(容器内盛水银)测量足体积变化，于致炎后1、2、3、4、5、6h测量两足差值。
结果表明，对照组大鼠右足明显肿胀，厚度增加，两足差异较大，而给药组两足差异明显低于对照组，表明草乌甲素各剂量组与阿司匹林组均有较好的抑制炎症作用，抗炎作用明确，特别是草乌甲素软胶囊给予0.5mg/kg即出现明显的抗炎消肿作用，作用可持续6h以上，并随剂量的增大而作用增强，显示有一定的量效关系(见表1)。
表1 草乌甲素软胶囊对大鼠足跖肿胀的影响 (略)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01均与空白溶媒组比较
2.2 小鼠腹腔血管通透性 实验参考Whittle法 [5] ，小鼠60只，随机分成6组，组别、剂量及给药方法同上。最后一次给药后45min，尾静脉注射0.5%伊文思蓝0.2ml/只后及时腹腔注射0.7%醋酸0.2ml/只，15min后处死动物，腹腔 ˇ 基金项目:云南省新药基金资助项目(NO:ynkmzd08) 注射生理盐水5ml，轻揉后抽取腹腔液离心，上清液于620nm处测定光密度值。
结果表明，草乌甲素各剂量组均能对抗H + 刺激所引起的小鼠腹腔毛细管通透性的增高，抑制作用随剂量增大而增强(见表2)。
2.3 小鼠扭体法 [6] 小鼠70只，随机分成7组，组别、剂量及给药方法同上，最后一次给药后45min，小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1ml/10g，记录5～15min小鼠“扭体”反应数，计算并比较组间差异显著性。
结果表明，给予草乌甲素软胶囊0.5mg/kg时，5-15min内对小鼠“扭体反应”发生的抑制率为47%;0.75mg/kg的抑制率达68%，作用强于阿司匹林200mg/kg(见表3)。
2.4 小鼠热板法
[7] 测痛装置系紫铜圆筒，放在56℃恒温水浴内，每次测试不超过60s。以小鼠舔后足作为痛反应指标，挑选反应敏感小鼠。 小鼠70只，雌性，随机分成7组，组别、剂量及给药方法同上，最后一次给药45min，放入上述测痛装置内，记录给药前及给药后45、60、90、120min小鼠舔后足的时间计算并比较组间差异的显著性。
结果表明:i.g.草乌甲素软胶囊0.5和0.75mg/kg，45min后，痛反应时间延长，随着剂量的增加，作用强度也增 强，显示一定的量效关系(见表4)。
2.5 小鼠甲醛伤害反应法(痒痛模型) [8] 小鼠60只，雌雄不拘，随机分成6组，组别、剂量及给药方法同上，最后一次给药后45min于小鼠右后足注射0.5%25μl甲醛，单只放于透明观察箱内记录前10min舔咬右后足时间和后20min舔咬右后足或抓咬阴器的时间，计算并比较组间差异的显著性。结果表明:生理盐水及空白溶媒组注射甲醛后舔咬后足反应强烈，全身躁动、焦急不安，草乌甲素软胶囊0.5mg/kg能减少小鼠舔咬后足时间，小鼠较为安静，且随着剂量增加而作用加强，呈现一定的量效关系，草乌甲素软胶囊0.75mg/kg作用强度大于阿司匹林200mg/kg(见表5)。
表2 草乌甲素软胶囊对小鼠腹腔血管通透性的影响 (略)
注: ˇ 各给药组均与空白溶媒组比较
表3 草乌甲素软胶囊对小鼠腹腔注射醋酸后发生“扭体反应”的抑制作用 (略)
注: ˇ 各给药组均与空白溶媒组比较
表4 草乌甲素软胶囊对小鼠热板致痛痛反应的影响 (略)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001均与空白溶媒组比较
表5 草乌甲素软胶囊对小鼠甲醛伤害反应的影响 (略)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001均与空白溶媒组比较
3 讨论
草乌甲素软胶囊药效学试验显示本品0.5、0.75mg/kg i.g.明显拮抗物理或化学性刺激所致疼痛(小鼠热板或扭体法);抑制伤害反应(小鼠甲醛法)和渗透性增加(小鼠腹腔染料法);显著拮抗大鼠关节炎模型的足肿胀，呈现量效关系方式，并优于同剂量的草乌甲素片剂，本试验为草乌甲素片剂改为软胶囊用于临床镇痛抗炎提供了必要的药效学依据。考虑到草乌甲素注射剂、片剂和软胶囊的小鼠LD 50 分别为910(s.c);2900(i.g.)和8704(i.g.)μg/kg，显然软胶囊安全性提高且无注射剧痛或吞服片剂口麻的缺陷。
参考文献
1 黎光南.云南中药志.昆明:云南科技出版社，1989，128-131.
2 王浴生.中药药理与应用.北京:人民卫生出版社，1992，788-793.
3 沙静姝.新药评价-草乌甲素注射液.中国药学杂志，1993，28(6):318.
4 唐希灿.3-2酰乌头碱的抗炎作用.中国药理学报，1984，5(2):85-89.
5 Whittle BA.The use of changes in capillary permeability in mice distinˉguish between narcotic and nonnareotic analgesics.Brit J Pharmacol，1964，22(2):246.
6 陈奇.钻山风药理研究.中草药，1983，146(10):23.
7 周雪仙.雪里开的镇痛作用.中草药，1987，18(6):27.
8 徐淑云.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，1982，693-729.
作者单位:650031云南省天然药物药理重点实验室，昆明医学院
(编辑秋 实), 百拇医药(雷伟亚 陈 鹏 李 玲 吴婉玲 沈志强)
关键词 草乌甲素 软胶囊 抗炎镇痛
龙头乌头(Aconition Longtounense T.L.Ming)系毛茛科乌头属植物 [1] 药用其根，产于云南滇南地区，为云南民间常用草药，主要用于治疗风湿性关节炎、肩周炎、四肢扭伤，沿用历史悠久 [2] 。
昆明植物研究所于20世纪90年代成功地提取分离出有效成份———滇西嘟拉碱甲，又名草乌甲素 [3] ，用于治疗风湿性关节炎，疗效显著 [4] 。因原有剂型(片剂，注射剂)存在口服口麻及注射疼痛等不便之处，急需进行剂型改进，本实验初步评价草乌甲素软胶囊的抗炎镇痛作用，为草乌甲素片剂改为软胶囊用于临床抗炎镇痛提供进一步的科学依据。
1 材料
1.1 动物 Wistar大鼠，体重(80～230g)。雌雄各半，由中科院昆明动物所提供(合格证号:云卫动管字第B06号)。ICR小鼠，体重18～23g，雌雄各半，由云南省天然药物药理重点实验室提供(合格证号:云卫动管第A12号)。
1.2 药物与试剂 草乌甲素软胶囊由昆明制药股份有限公司提供。草乌甲素片由云南弥勒制药厂生产。阿司匹林(aspirin，asp)结晶，sigma公司产品，使用前溶于100mmol/L 的Na 2 CO 3 中，以HCl调pH值约7.0。
1.3 仪器 临床生化分析仪(CL-770，日本岛津公司)。
2 方法和结果
2.1 大鼠角叉菜胶足肿胀法 Wistar大鼠60只，雌雄各半，随机分成6组:生理盐水及空白溶媒对照组均给予等体积(20ml/kg)，阿司匹林组(200mg/kg)，草乌甲素片组(0.5mg/kg)、草乌甲素软胶囊低剂量组(0.5mg/kg)和高剂量组(0.75mg/kg)，上述各组动物，均每日上午、下午各灌胃一次，连续3天，第四天上午按各组剂量一次给药，45min后，于大鼠右侧足跖皮下注射1%角叉菜胶混悬液0.1ml，左侧注射生理盐水0.1ml，采用毛细管放大法(容器内盛水银)测量足体积变化，于致炎后1、2、3、4、5、6h测量两足差值。
结果表明，对照组大鼠右足明显肿胀，厚度增加，两足差异较大，而给药组两足差异明显低于对照组，表明草乌甲素各剂量组与阿司匹林组均有较好的抑制炎症作用，抗炎作用明确，特别是草乌甲素软胶囊给予0.5mg/kg即出现明显的抗炎消肿作用，作用可持续6h以上，并随剂量的增大而作用增强，显示有一定的量效关系(见表1)。
表1 草乌甲素软胶囊对大鼠足跖肿胀的影响 (略)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01均与空白溶媒组比较
2.2 小鼠腹腔血管通透性 实验参考Whittle法 [5] ，小鼠60只，随机分成6组，组别、剂量及给药方法同上。最后一次给药后45min，尾静脉注射0.5%伊文思蓝0.2ml/只后及时腹腔注射0.7%醋酸0.2ml/只，15min后处死动物，腹腔 ˇ 基金项目:云南省新药基金资助项目(NO:ynkmzd08) 注射生理盐水5ml，轻揉后抽取腹腔液离心，上清液于620nm处测定光密度值。
结果表明，草乌甲素各剂量组均能对抗H + 刺激所引起的小鼠腹腔毛细管通透性的增高，抑制作用随剂量增大而增强(见表2)。
2.3 小鼠扭体法 [6] 小鼠70只，随机分成7组，组别、剂量及给药方法同上，最后一次给药后45min，小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1ml/10g，记录5～15min小鼠“扭体”反应数，计算并比较组间差异显著性。
结果表明，给予草乌甲素软胶囊0.5mg/kg时，5-15min内对小鼠“扭体反应”发生的抑制率为47%;0.75mg/kg的抑制率达68%，作用强于阿司匹林200mg/kg(见表3)。
2.4 小鼠热板法
[7] 测痛装置系紫铜圆筒，放在56℃恒温水浴内，每次测试不超过60s。以小鼠舔后足作为痛反应指标，挑选反应敏感小鼠。 小鼠70只，雌性，随机分成7组，组别、剂量及给药方法同上，最后一次给药45min，放入上述测痛装置内，记录给药前及给药后45、60、90、120min小鼠舔后足的时间计算并比较组间差异的显著性。
结果表明:i.g.草乌甲素软胶囊0.5和0.75mg/kg，45min后，痛反应时间延长，随着剂量的增加，作用强度也增 强，显示一定的量效关系(见表4)。
2.5 小鼠甲醛伤害反应法(痒痛模型) [8] 小鼠60只，雌雄不拘，随机分成6组，组别、剂量及给药方法同上，最后一次给药后45min于小鼠右后足注射0.5%25μl甲醛，单只放于透明观察箱内记录前10min舔咬右后足时间和后20min舔咬右后足或抓咬阴器的时间，计算并比较组间差异的显著性。结果表明:生理盐水及空白溶媒组注射甲醛后舔咬后足反应强烈，全身躁动、焦急不安，草乌甲素软胶囊0.5mg/kg能减少小鼠舔咬后足时间，小鼠较为安静，且随着剂量增加而作用加强，呈现一定的量效关系，草乌甲素软胶囊0.75mg/kg作用强度大于阿司匹林200mg/kg(见表5)。
表2 草乌甲素软胶囊对小鼠腹腔血管通透性的影响 (略)
注: ˇ 各给药组均与空白溶媒组比较
表3 草乌甲素软胶囊对小鼠腹腔注射醋酸后发生“扭体反应”的抑制作用 (略)
注: ˇ 各给药组均与空白溶媒组比较
表4 草乌甲素软胶囊对小鼠热板致痛痛反应的影响 (略)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001均与空白溶媒组比较
表5 草乌甲素软胶囊对小鼠甲醛伤害反应的影响 (略)
注: ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001均与空白溶媒组比较
3 讨论
草乌甲素软胶囊药效学试验显示本品0.5、0.75mg/kg i.g.明显拮抗物理或化学性刺激所致疼痛(小鼠热板或扭体法);抑制伤害反应(小鼠甲醛法)和渗透性增加(小鼠腹腔染料法);显著拮抗大鼠关节炎模型的足肿胀，呈现量效关系方式，并优于同剂量的草乌甲素片剂，本试验为草乌甲素片剂改为软胶囊用于临床镇痛抗炎提供了必要的药效学依据。考虑到草乌甲素注射剂、片剂和软胶囊的小鼠LD 50 分别为910(s.c);2900(i.g.)和8704(i.g.)μg/kg，显然软胶囊安全性提高且无注射剧痛或吞服片剂口麻的缺陷。
参考文献
1 黎光南.云南中药志.昆明:云南科技出版社，1989，128-131.
2 王浴生.中药药理与应用.北京:人民卫生出版社，1992，788-793.
3 沙静姝.新药评价-草乌甲素注射液.中国药学杂志，1993，28(6):318.
4 唐希灿.3-2酰乌头碱的抗炎作用.中国药理学报，1984，5(2):85-89.
5 Whittle BA.The use of changes in capillary permeability in mice distinˉguish between narcotic and nonnareotic analgesics.Brit J Pharmacol，1964，22(2):246.
6 陈奇.钻山风药理研究.中草药，1983，146(10):23.
7 周雪仙.雪里开的镇痛作用.中草药，1987，18(6):27.
8 徐淑云.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，1982，693-729.
作者单位:650031云南省天然药物药理重点实验室，昆明医学院
(编辑秋 实), 百拇医药(雷伟亚 陈 鹏 李 玲 吴婉玲 沈志强)