【摘要】 目的 原核表达活性BACE1，并建立灵敏、简便、低廉、适于高通量筛选的BACE1酶活性检测体系，为进一步筛选特异性抑制剂及研究BACE1结构与功能关系奠定基础。

    方法 利用PCR技术扩增获得全长BACE1，并构建了BACE1功能区的原核表达重组质粒pMALc2-BACE1。重组质粒转化至E.coli JM109，以IPTG诱导MBP-BACE1融合蛋白的表达。经Amylose Resin亲和层析及阴离子交换FPLC纯化MBP-BACE1后，通过Xa因子切割去除MBP标签以获取BACE1。最后，通过电洗脱及阴离子交换FPLC纯化BACE1并用Western blot做了鉴定，以带有APP Swedish突变位点的荧光多肽为底物，荧光共振能量转移(FRET)检测其酶活性。

    结果 纯化后的MBP-BACE1及BACE1纯度分别达到98%和99%。酶活性检测显示，所表达的BACE1体现出相对于BACE1S标准蛋白的低活性。

    结论 FRET是一种灵敏、简便的检测BACE1活性的方法，为筛选抑制剂建立了检测平台。原核表达的BACE1具有一定活性，为进一步研究BACE1结构与功能关系奠定了基础。

    【关键词】 BACE1 原核表达 荧光共振能量转移 β-淀粉样蛋白 阿尔茨海默病

    Expression，purification and in vitro activity assay of BACE1in E.coli Meng Jun，Yang Ying，Li Ying，et al.

    Department of Biochemistry and Molecular Biology，The School of Basic Medical Sciences， Peking University，Beijing100083.

    【Abstract】 Objective To obtain active recombinant BACE1in E.coli and establish a sensitive，convenient assay for BACE1activity in vitro for high-thru screening the inhibitors of BACE1and further researches on the rela-tionship between BACE1's structure and function.Methods The complete coding sequence of BACE1was amplified from a human fetal brain cDNA library using PCR.The recombinant plasmid for the prokaryotic expression of BACE1's function domain ......