麦迪霉素微生物检定条件的改进
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庞西英
麦迪霉素含量测定采用微生物方法检定，抑菌圈易出现双圈，造成卡尺测量上的误差，更难以用ZY—300A多功能抑菌圈自动测试仪直接测定，对生物检定统计分析结果影响很大，经过改变培养基成份和实验用菌种，从而消除了抑菌圈双圈，现就检定的条件进行改进予以报告。
1 资料和方法
1.1 仪器：ZY—300A多功能抑菌圈自动测试仪(北京先驱威锋技术开发公司)；游标卡尺，精密度为0.05mm；培养基，蛋白栋6g，牛肉侵膏1.5g，酵母浸膏6g，葡萄糖1g，琼脂约20g加水制成1000ml，加热溶解，使灭菌后pH为7.8～8.0，高压灭菌116℃20分钟；缓冲液，磷酸氢二钾5.59g，磷酸二氢钾0.41g，加水至1000ml，滤过，在115℃灭菌30分钟，pH值为7.8。检定菌，藤黄八叠球菌(28001)；麦迪霉素标准品由中国药品生物制品栓定所提供，每毫克相当于970单位；麦迪霉素样品：鱼它滨制药厂，批号9701030。
, 百拇医药
1.2 试药：双碟制备，按中国药典1995年版二部，微生物检定法制备〔1〕；藤黄八叠球菌悬液，取藤黄八叠球菌的普通琼脂斜面培养物，接种于普通斜面培养基的培养瓶中， 在26～27℃培养24小时用培养基Ⅲ将菌苔洗下，备用。
1.3 实验方法：按文献〔1〕方法操作，双碟一组4只，底层培养基20ml，菌层培养基5ml，标准品、样品的高低剂量为20U/ml、40U/ml，滴入不锈铜小管内，37℃培养16～18小时，测量抑菌圈面积和直径进行生物检定统计法及效价计算。
2 结果
2.1 实验结果见表1、2
表1 两种检定条件所致抑菌圈的比较
剂量单位 改进后条件仪器侧量(mm) 部颁标准条件卡尺测量(mm)
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标准品(SH) 样品(UH) 标准品(SH) 样品(UH)
高剂量(40U/ml)
20.55 20.40 21.45 21.45
20.55 20.50 21.95 21.85
20.65 20.45 21.75 21.35
20.60 20.55 21.55 21.75
低剂量(20U/ml)
18.45 18.30 18.40 18.90
18.50 18.40 18.65 18.85
, http://www.100md.com
18.55 18.45 18.95 18.60
18.40 18.35 18.55 18.75
表2 生物检定的统计分析
项目自由度 新条件仪器测量 部颁标准卡尺量 方差分析 P
自由度 9 9
估计效价 700 700
双碟数 4 4
回归 3489.7451 165.2676 回归的F值应大于1056 <0.01
偏离平行 0.95114 0.8375 偏离平行F值应小于5.12 >0.05
, 百拇医药
剂间 1185.4365 2.6556 剂间的F值应大于6.99 <0.01
碟间 2.4548 55.5848 碟间的F值应小于3.86 >0.05
效价比 1 0.9742
可信限率 2.8 11.5
2.2 回收率及稳定性实验：以高低剂量分别为40U/ml、20U/ml、测量三组不同加入量的回收率为100.5%，变异系数为0.39%。
对同一样品pH7.8磷酸盐缓冲液稀释成100U/ml，在20～25℃放置不同时间。测定结果表明麦迪霉素的抗菌活性稳定不变(见表3)。
表3 麦迪霉素片及原料药测定的结果
, http://www.100md.com 试样 批号 效价(含量)
U/mg 标示量
% 可信限率
%
原料药
970415 710 - 4.85
970315 715 - 4.75
970625 705 - 4.25
片剂
970609 - 97.5 4.05
970608 - 96.8 4.15
, 百拇医药
970607 - 96.9 4.25
3 讨论
3.1 两种方法在测试浓度、培养基的成份、菌量等相同的条件下，抑菌圈随培养基及检定菌的改变则抑菌圈有改变。部颁标准〔2〕所用的检定菌为枯草芽孢杆菌，培养基为1号培养基，在该条件下所致抑菌圈形成双圈，易引起测量误差，本文采用检定菌为腾黄八叠 球菌，培养基为Ⅱ号培养基，经改进培养基和检定菌后，可生成直径为18～24mm的无双圈抑菌圈，而且抑菌圈清晰圆整，可用仪器直接测定，卡尺测量误差也大大减小。
3.2 经过改变培养基的成份和实验用的菌种后，不仅消除了抑菌圈双圈，而且实验的可信限率达到了不得大于5%〔1〕的指标，并提高了工作效率和实验的准确性。
作者单位：宁夏药品检验所 750004
4 参考文献
1 中国药典二部.1995.70～74
2 卫生部药典委员会编.卫生部部颁标准.1993
责编：杨自革
(收稿：1998—08—20)
宁夏医学杂志
NINGXIA MEDICAL JOURNAL
1999年 第21卷 第4期 Volume21 No.4 1999, 百拇医药
麦迪霉素含量测定采用微生物方法检定，抑菌圈易出现双圈，造成卡尺测量上的误差，更难以用ZY—300A多功能抑菌圈自动测试仪直接测定，对生物检定统计分析结果影响很大，经过改变培养基成份和实验用菌种，从而消除了抑菌圈双圈，现就检定的条件进行改进予以报告。
1 资料和方法
1.1 仪器：ZY—300A多功能抑菌圈自动测试仪(北京先驱威锋技术开发公司)；游标卡尺，精密度为0.05mm；培养基，蛋白栋6g，牛肉侵膏1.5g，酵母浸膏6g，葡萄糖1g，琼脂约20g加水制成1000ml，加热溶解，使灭菌后pH为7.8～8.0，高压灭菌116℃20分钟；缓冲液，磷酸氢二钾5.59g，磷酸二氢钾0.41g，加水至1000ml，滤过，在115℃灭菌30分钟，pH值为7.8。检定菌，藤黄八叠球菌(28001)；麦迪霉素标准品由中国药品生物制品栓定所提供，每毫克相当于970单位；麦迪霉素样品：鱼它滨制药厂，批号9701030。
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1.2 试药：双碟制备，按中国药典1995年版二部，微生物检定法制备〔1〕；藤黄八叠球菌悬液，取藤黄八叠球菌的普通琼脂斜面培养物，接种于普通斜面培养基的培养瓶中， 在26～27℃培养24小时用培养基Ⅲ将菌苔洗下，备用。
1.3 实验方法：按文献〔1〕方法操作，双碟一组4只，底层培养基20ml，菌层培养基5ml，标准品、样品的高低剂量为20U/ml、40U/ml，滴入不锈铜小管内，37℃培养16～18小时，测量抑菌圈面积和直径进行生物检定统计法及效价计算。
2 结果
2.1 实验结果见表1、2
表1 两种检定条件所致抑菌圈的比较
剂量单位 改进后条件仪器侧量(mm) 部颁标准条件卡尺测量(mm)
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标准品(SH) 样品(UH) 标准品(SH) 样品(UH)
高剂量(40U/ml)
20.55 20.40 21.45 21.45
20.55 20.50 21.95 21.85
20.65 20.45 21.75 21.35
20.60 20.55 21.55 21.75
低剂量(20U/ml)
18.45 18.30 18.40 18.90
18.50 18.40 18.65 18.85
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18.55 18.45 18.95 18.60
18.40 18.35 18.55 18.75
表2 生物检定的统计分析
项目自由度 新条件仪器测量 部颁标准卡尺量 方差分析 P
自由度 9 9
估计效价 700 700
双碟数 4 4
回归 3489.7451 165.2676 回归的F值应大于1056 <0.01
偏离平行 0.95114 0.8375 偏离平行F值应小于5.12 >0.05
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剂间 1185.4365 2.6556 剂间的F值应大于6.99 <0.01
碟间 2.4548 55.5848 碟间的F值应小于3.86 >0.05
效价比 1 0.9742
可信限率 2.8 11.5
2.2 回收率及稳定性实验：以高低剂量分别为40U/ml、20U/ml、测量三组不同加入量的回收率为100.5%，变异系数为0.39%。
对同一样品pH7.8磷酸盐缓冲液稀释成100U/ml，在20～25℃放置不同时间。测定结果表明麦迪霉素的抗菌活性稳定不变(见表3)。
表3 麦迪霉素片及原料药测定的结果
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U/mg 标示量
% 可信限率
%
原料药
970415 710 - 4.85
970315 715 - 4.75
970625 705 - 4.25
片剂
970609 - 97.5 4.05
970608 - 96.8 4.15
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970607 - 96.9 4.25
3 讨论
3.1 两种方法在测试浓度、培养基的成份、菌量等相同的条件下，抑菌圈随培养基及检定菌的改变则抑菌圈有改变。部颁标准〔2〕所用的检定菌为枯草芽孢杆菌，培养基为1号培养基，在该条件下所致抑菌圈形成双圈，易引起测量误差，本文采用检定菌为腾黄八叠 球菌，培养基为Ⅱ号培养基，经改进培养基和检定菌后，可生成直径为18～24mm的无双圈抑菌圈，而且抑菌圈清晰圆整，可用仪器直接测定，卡尺测量误差也大大减小。
3.2 经过改变培养基的成份和实验用的菌种后，不仅消除了抑菌圈双圈，而且实验的可信限率达到了不得大于5%〔1〕的指标，并提高了工作效率和实验的准确性。
作者单位：宁夏药品检验所 750004
4 参考文献
1 中国药典二部.1995.70～74
2 卫生部药典委员会编.卫生部部颁标准.1993
责编：杨自革
(收稿：1998—08—20)
宁夏医学杂志
NINGXIA MEDICAL JOURNAL
1999年 第21卷 第4期 Volume21 No.4 1999, 百拇医药