冠心病患者抗心磷脂抗体与对氧磷激酶活性的关系研究
【摘要】 目的 探讨抗心磷脂抗体(ACA)阳性冠心病患者血清对氧磷酶活性(PON)的变化，及其在该类病人中的致病作用。 方法 酶免法检测112例冠心病患者、64例正常对照者血清ACA、氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶(SOD)、乙酸苯酯法测定PON。 结果 冠心病患者ACA阳性率为24.11%，显著高于对照组(阳性率为7.81%，P<0.05)。ACA阳性冠心病患者PON活性为120.31±37.08KU/L、OX-LDL为0.78±0.22mg/L、MDA为7.94±0.84μmol/L、SOD为72.06±18.68NU/ml，与ACA阴性冠心病相比PON活性降低，OX-LDL、MDA升高，SOD无明显变化。相关分析显示PON活性与OX-LDL、MDA呈负相关性(r分别为-0.49、P<0.05;-0.61、P<0.01)，与SOD无相关性。 结论 ACA阳性冠心病患者反映脂质过氧化程度的OX-LDL、MDA增高，与PON活性降低有关，PON的改变可能是ACA致动脉粥样硬化的因素之一。
关键词 冠状动脉疾病 抗心磷脂抗体 对氧磷酶 脂质过氧化
Analysis of relationship between anticardiolipin antibody and paraoxonase in patients with coronary heart disease
Bailing，Ma Aiqun，Bai Xiaojun，et al.
Dept.of Cardiovascular，The1st Hospital of Xi'an Jiao-Tong University，Xi'an710061.
【Abstract】 Objective To investigate the alteration and pathopoiesis effection of paraoxonae(PON)in anti-cardiolipin antibody(ACA)positive coronary heart disease(CHD).Methods ACA and oxidatively modified low den-sity lipoprotein(OX-LDL)were measured by enzyme linked immunoasorbent assay，malondialdehycle(MDA)by thio-barbiuric acid，superoxide dismutase(SOD)by xanthine superoxidase，PON by the method of phenyl acetate in112pa-tients with CHD and64healthy persons.Results PON、OX-LDL、MDA、SOD levels were120.31±37.08KU/L，0.78±0.22mg/L，7.94±0.84μmol/L，72.06±18.68NU/ml respectively in ACA positive CHD.PONwas significantly decreased(P<0.05)，OX-LDL and MDA levels were significantly increased(P<0.05)，but SOD was not diffrent compared with ACA negative CHD.Conclusion The results suggested that the increasing of lipid peroxidation(OX-LDL，MDA)was related to the decreasing of PON in ACA positive CHD.The alteration of Pon may be one of ACA pathogenesis in patients with CHD.
Key words coronary heart disease anticardiolipin antibody paraoxonase lipid peroxidaton
免疫因素在动脉粥样硬化、心脑血管疾病的发病过程中起重要作用，抗心磷脂抗体是与血栓形成相关的自身免疫性抗体，ACA致血栓形成的机制并不清，目前认为ACA是通过与带负电荷磷脂结合后发挥其病理作用的 [1] 。对氧磷酶(paraoxonase，PON)可促使高密度脂蛋白(HDL)发挥抑制低密度脂蛋白(LDL)过氧化修饰，而对LDL起保护作用，PON下降被认为是心血管疾病的独立危险因素 [2] 。脂蛋白中含有ACA作用的靶物质，研究脂质代谢在ACA致病中的作用甚少。本课题通过对比ACA阳性与阴性冠心病患者脂质过氧化程度与PON活性的关系以探讨ACA致血栓形成过程中PON的变化。
1 对象和方法
1.1 研究对象 我院2000年8月～2001年6月间住院的冠心病患者112例，男85例，女27例，平均年龄58.4±7.9(37～81)岁;其中急性心肌梗死48例，陈旧性心肌梗死52例，不稳定性心绞痛12例，均符合世界卫生组织(WHO)冠心病诊断标准。对照组为同期门诊健康体检者64例，男49例，女15例，平均年龄55.6±9.4(45～72)岁。排除心、肝、肾等器质性疾病，所有研究对象当日禁食，次日清晨抽取空腹静脉血分别检测ACA、PON、OX-LDL、MDA、SOD、TG、TC、HDL、LDL。
1.2 研究方法 (1)ACA检测:采用酶联免疫法，试剂盒购自美国Trinity biotech公司，Index Value≥1.10为阳性。(2)OX-LDL检测:双抗体夹心法检测，试剂盒为上海荣盛生物试剂厂提供。(3)MDA检测:采用硫代巴比妥酸法，试剂盒购自南京建成生物技术公司。MDA(μmol/L)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×10μmol/L×样本稀释倍数。(4)PON活性测定:采用乙酸苯酯法，步骤如下:反应缓冲液1.3ml(2mmol/L)cacl，0.1mmol/L Tris/HCl)与5mmol/L的乙酸苯酯150μl于25℃下20min，加入1∶10倍稀释的样本血清50μl，90s后用0.5mmol/L EDTA100μl终止反应，紫外分光光度计下270nm波长测吸光度值。酶活性(KU/L)=A×103×f×FV/t×SV×L×ε，A:标本吸光度-血清对照和底物对照的吸光度;f:标本稀释倍数;FV:反应体积;t:反应时间;SV:样本体积;L:光径;ε:摩尔消光系数。(5)血脂测定:TG、TC采用酶法，试剂盒由上海长征康仁医学科学有限公司提供。HDL、LDL采用酶法，试剂盒由日本第一医药株式会社。日立全自动生化分析仪，单位采用μmol/L。
1.3 统计学分析 计量资料以均数±标准差表示(X±s)，计数资料组间用X 2 检验，计数资料组间用t检验，并行直线相关分析。
2 结果
112例冠心病患者ACA阳性者27例(阳性率24.11%)，64例健康对照者仅6例(阳性率7.81%)，二者差异有显著性，P<0.05。以ACA分层比较PON活性、OX-LDL、MDA、SOD发现，ACA阳性冠心病患者血清PON活性显著降低，而OX-LDL、MDA明显升高，P<0.05;但SOD无明显变化，见表12。以PON为自变量，OX-LDL、MDA、SOD为应变量，直线相关分析PON活性与OX-LDL、MDA、SOD关系发现:血清PON的活性与OX-LDL、MDA呈负相关，相关系数分别为r=-0.49，P<0.05;r=-0.61，P<0.01;PON活性与SOD无相关性。
表1 ACA阳性与阴性冠心病患者血清PON、OX-LDL、MDA、SOD比较 (略)注:与ACA阴性冠心病相比， * P<0.05; ** P>0.05
3 讨论
冠心病是受遗传及环境因素相互作用所致的疾病，新的危险因素的认识是预防冠心病的前提。近年来ACA被认为是参与心脑血管疾病发生的异质性抗体，我们既往的研究也表明ACA与冠心病发生密切相关，本试验通过对观察人群ACA的检测再次证明了这一结果。目前对ACA致血栓形成的机制并不清楚。ACA是通过与体内带负电荷磷脂结合而发挥致病作用，如与内皮细胞膜上磷脂结合促进分泌粘附分子，与血小板结合激活其粘附、聚集功能。脂蛋白中含有大量磷脂也可能成为ACA作用的靶物质 [3] 。体内脂质过氧化程度增加使LDL易于氧化成OX-LDL，加速血管壁的损伤及泡沫细胞的形成。大量流行病学证实OX-LDL在冠心病中期起重要作用。越来越多的证据表明PON在脂蛋白代谢中发挥着重要作用，并进而影响冠心病和动脉粥样硬化的发生 [4] 。PON与HDL结合，可起到对LDL的保护作用，PON可预防LDL免受氧化的修饰，降低体内OX-LDL水平，因此PON活性下降是心血管疾病的独立危险因素。本试验结果表明ACA阳性冠心病患者体内OX-LDL、MDA明显升高，MDA是LDL氧化过程中的产物，反映体内过氧化程度，而这类冠心病患者PON活性却明显下降，进一步分析发现冠心病患者血清PON活性与OX-LDL、MDA呈负相关，说明ACA阳性冠心病患者体内OX-LDL增高系PON活性降低所致。PON酶的高活性及低活性有其基因多肽性的遗传学基础，ACA的产生受环境及遗传因素作用，ACA阳性冠心病患者PON活性受其基因多肽性影响而降低，而PON的降低是该类患者OX-LDL增高的直接因素，所以PON的改变可能是ACA阳性冠心病患者的致病因素之一 [5] 。
参考文献
1 AviramM.Dose paraoxonase play a role in susceptibility to cardiovascu-lar disease?Mol Med Today，1999，5:381-386.
2 白玲，马爱群，燕航.冠心病患者抗磷脂抗体与人巨细胞病毒感染关系初步探讨.中国循环杂志，2000，15:148-150.
3 Etein O.Atheroprotective mechanisms of HDL.Atheosclerosis，1999，144:285-301.
4 Mackness MI，Macknes B，Purrington PN，et al.Paraoxonase and coro-nary heart disease.Curr Opin Lipidol，1998，9:319-324.
5 James RW，Leviev I，Ruiz J，et al.Promoter polymorphism T(-107)C of paraoxonase PON1gene is a risk factor for coronary heast disease in type2diabetic patients.Diabetes，2000，48:1390-1393.
(编辑罗 彬)
作者单位:710061西安交通大学第一医院心血管内科, http://www.100md.com(白 玲 马爱群 白晓君)
关键词 冠状动脉疾病 抗心磷脂抗体 对氧磷酶 脂质过氧化
Analysis of relationship between anticardiolipin antibody and paraoxonase in patients with coronary heart disease
Bailing，Ma Aiqun，Bai Xiaojun，et al.
Dept.of Cardiovascular，The1st Hospital of Xi'an Jiao-Tong University，Xi'an710061.
【Abstract】 Objective To investigate the alteration and pathopoiesis effection of paraoxonae(PON)in anti-cardiolipin antibody(ACA)positive coronary heart disease(CHD).Methods ACA and oxidatively modified low den-sity lipoprotein(OX-LDL)were measured by enzyme linked immunoasorbent assay，malondialdehycle(MDA)by thio-barbiuric acid，superoxide dismutase(SOD)by xanthine superoxidase，PON by the method of phenyl acetate in112pa-tients with CHD and64healthy persons.Results PON、OX-LDL、MDA、SOD levels were120.31±37.08KU/L，0.78±0.22mg/L，7.94±0.84μmol/L，72.06±18.68NU/ml respectively in ACA positive CHD.PONwas significantly decreased(P<0.05)，OX-LDL and MDA levels were significantly increased(P<0.05)，but SOD was not diffrent compared with ACA negative CHD.Conclusion The results suggested that the increasing of lipid peroxidation(OX-LDL，MDA)was related to the decreasing of PON in ACA positive CHD.The alteration of Pon may be one of ACA pathogenesis in patients with CHD.
Key words coronary heart disease anticardiolipin antibody paraoxonase lipid peroxidaton
免疫因素在动脉粥样硬化、心脑血管疾病的发病过程中起重要作用，抗心磷脂抗体是与血栓形成相关的自身免疫性抗体，ACA致血栓形成的机制并不清，目前认为ACA是通过与带负电荷磷脂结合后发挥其病理作用的 [1] 。对氧磷酶(paraoxonase，PON)可促使高密度脂蛋白(HDL)发挥抑制低密度脂蛋白(LDL)过氧化修饰，而对LDL起保护作用，PON下降被认为是心血管疾病的独立危险因素 [2] 。脂蛋白中含有ACA作用的靶物质，研究脂质代谢在ACA致病中的作用甚少。本课题通过对比ACA阳性与阴性冠心病患者脂质过氧化程度与PON活性的关系以探讨ACA致血栓形成过程中PON的变化。
1 对象和方法
1.1 研究对象 我院2000年8月～2001年6月间住院的冠心病患者112例，男85例，女27例，平均年龄58.4±7.9(37～81)岁;其中急性心肌梗死48例，陈旧性心肌梗死52例，不稳定性心绞痛12例，均符合世界卫生组织(WHO)冠心病诊断标准。对照组为同期门诊健康体检者64例，男49例，女15例，平均年龄55.6±9.4(45～72)岁。排除心、肝、肾等器质性疾病，所有研究对象当日禁食，次日清晨抽取空腹静脉血分别检测ACA、PON、OX-LDL、MDA、SOD、TG、TC、HDL、LDL。
1.2 研究方法 (1)ACA检测:采用酶联免疫法，试剂盒购自美国Trinity biotech公司，Index Value≥1.10为阳性。(2)OX-LDL检测:双抗体夹心法检测，试剂盒为上海荣盛生物试剂厂提供。(3)MDA检测:采用硫代巴比妥酸法，试剂盒购自南京建成生物技术公司。MDA(μmol/L)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×10μmol/L×样本稀释倍数。(4)PON活性测定:采用乙酸苯酯法，步骤如下:反应缓冲液1.3ml(2mmol/L)cacl，0.1mmol/L Tris/HCl)与5mmol/L的乙酸苯酯150μl于25℃下20min，加入1∶10倍稀释的样本血清50μl，90s后用0.5mmol/L EDTA100μl终止反应，紫外分光光度计下270nm波长测吸光度值。酶活性(KU/L)=A×103×f×FV/t×SV×L×ε，A:标本吸光度-血清对照和底物对照的吸光度;f:标本稀释倍数;FV:反应体积;t:反应时间;SV:样本体积;L:光径;ε:摩尔消光系数。(5)血脂测定:TG、TC采用酶法，试剂盒由上海长征康仁医学科学有限公司提供。HDL、LDL采用酶法，试剂盒由日本第一医药株式会社。日立全自动生化分析仪，单位采用μmol/L。
1.3 统计学分析 计量资料以均数±标准差表示(X±s)，计数资料组间用X 2 检验，计数资料组间用t检验，并行直线相关分析。
2 结果
112例冠心病患者ACA阳性者27例(阳性率24.11%)，64例健康对照者仅6例(阳性率7.81%)，二者差异有显著性，P<0.05。以ACA分层比较PON活性、OX-LDL、MDA、SOD发现，ACA阳性冠心病患者血清PON活性显著降低，而OX-LDL、MDA明显升高，P<0.05;但SOD无明显变化，见表12。以PON为自变量，OX-LDL、MDA、SOD为应变量，直线相关分析PON活性与OX-LDL、MDA、SOD关系发现:血清PON的活性与OX-LDL、MDA呈负相关，相关系数分别为r=-0.49，P<0.05;r=-0.61，P<0.01;PON活性与SOD无相关性。
表1 ACA阳性与阴性冠心病患者血清PON、OX-LDL、MDA、SOD比较 (略)注:与ACA阴性冠心病相比， * P<0.05; ** P>0.05
3 讨论
冠心病是受遗传及环境因素相互作用所致的疾病，新的危险因素的认识是预防冠心病的前提。近年来ACA被认为是参与心脑血管疾病发生的异质性抗体，我们既往的研究也表明ACA与冠心病发生密切相关，本试验通过对观察人群ACA的检测再次证明了这一结果。目前对ACA致血栓形成的机制并不清楚。ACA是通过与体内带负电荷磷脂结合而发挥致病作用，如与内皮细胞膜上磷脂结合促进分泌粘附分子，与血小板结合激活其粘附、聚集功能。脂蛋白中含有大量磷脂也可能成为ACA作用的靶物质 [3] 。体内脂质过氧化程度增加使LDL易于氧化成OX-LDL，加速血管壁的损伤及泡沫细胞的形成。大量流行病学证实OX-LDL在冠心病中期起重要作用。越来越多的证据表明PON在脂蛋白代谢中发挥着重要作用，并进而影响冠心病和动脉粥样硬化的发生 [4] 。PON与HDL结合，可起到对LDL的保护作用，PON可预防LDL免受氧化的修饰，降低体内OX-LDL水平，因此PON活性下降是心血管疾病的独立危险因素。本试验结果表明ACA阳性冠心病患者体内OX-LDL、MDA明显升高，MDA是LDL氧化过程中的产物，反映体内过氧化程度，而这类冠心病患者PON活性却明显下降，进一步分析发现冠心病患者血清PON活性与OX-LDL、MDA呈负相关，说明ACA阳性冠心病患者体内OX-LDL增高系PON活性降低所致。PON酶的高活性及低活性有其基因多肽性的遗传学基础，ACA的产生受环境及遗传因素作用，ACA阳性冠心病患者PON活性受其基因多肽性影响而降低，而PON的降低是该类患者OX-LDL增高的直接因素，所以PON的改变可能是ACA阳性冠心病患者的致病因素之一 [5] 。
参考文献
1 AviramM.Dose paraoxonase play a role in susceptibility to cardiovascu-lar disease?Mol Med Today，1999，5:381-386.
2 白玲，马爱群，燕航.冠心病患者抗磷脂抗体与人巨细胞病毒感染关系初步探讨.中国循环杂志，2000，15:148-150.
3 Etein O.Atheroprotective mechanisms of HDL.Atheosclerosis，1999，144:285-301.
4 Mackness MI，Macknes B，Purrington PN，et al.Paraoxonase and coro-nary heart disease.Curr Opin Lipidol，1998，9:319-324.
5 James RW，Leviev I，Ruiz J，et al.Promoter polymorphism T(-107)C of paraoxonase PON1gene is a risk factor for coronary heast disease in type2diabetic patients.Diabetes，2000，48:1390-1393.
(编辑罗 彬)
作者单位:710061西安交通大学第一医院心血管内科, http://www.100md.com(白 玲 马爱群 白晓君)