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编号:11152122
黄精功效成分(多糖、皂甙)测定和提取方法实验
http://www.100md.com 2005年6月23日 药物分析网
     黄精是一种名贵的中药材,具有调节血糖、调节血脂、免疫调节、抗疲劳和延缓衰老等保健作用。目前已完成对其营养成分的分析,并试制了黄精果脯;同时还开展了对黄精功效成分(多糖及皂甙)的定性、定量及提取方法的研究,以便将黄精功效成分添加到食物中制成不同类型的保健食品,为更好的开展和利用黄精资源提供科学依据。

    本实验对黄精中多糖、皂甙进行定性,以确定黄精中多糖、皂甙的存在,并测定其含量。在此基础上,进一步对黄精中多糖、皂甙小试提取方法进行摸索试验,为开发利用黄精的功效成分提供科学可行的分析、提取方法。

    1 样品来源及制备 采自陕西省华阴县(华山地带)春、秋两季黄精之根茎,洗净后分为生样、蒸熟样和药店炮制黄精三种,切成片、晾干,给予55℃~60℃ 烘干,粉碎,过28目筛,供作多糖、皂甙的定性、定量及功效成分提取用。药店炮制样作为阳性对照品。(见表1)

    2 黄精中多糖及皂甙的测定方法 ◇黄精多糖的定性 ①氧化亚铜沉淀法; ②纸层析法:氨性硝酸银显色法。 ◇黄精多糖的定量 苯酚?硫酸分光光度法:以葡聚糖作为标准,在485nm处比色测定。◇黄精总皂甙的定性 ①泡沫试验; ②薄层层析法:10%硫酸乙醇显色斑点定性法。◇黄精总皂甙的定量 黄精总皂甙经提取,大孔树脂分离,在酸性条件下,香草醛显色,以人参皂甙Re作标准,在555nm处比色测定。

    3 黄精中多糖及皂甙测定结果 ◇黄精中多糖测定结果 ①黄精多糖定性结果阳性 ②黄精中粗多糖含量测定结果(见表2) ③准确度与精密度样品中进行不同浓度的加标回收实验,回收率为 90.5%~104.0%;同一样品进行6次测定,相对标准偏差为4.0%。◇黄精中皂甙测定结果 ①黄精中皂甙定性结果阳性 ②黄精中总皂甙含量测定结果(见表3) ③准确度与精密度样品中进行不同浓度的加标回收试验,回收率为 85.6%~100.2%;同一样品进行6次测定,相对标准偏差为3.5%。

    4 黄精中功效成分(多糖、皂甙)的提取分离方法◇黄精粗多糖的提取方法 取黄精制备干粉100克,加水500毫升,回流3次;合并滤液,过滤,浓缩至较小体积;遂加乙醇使乙醇量达80%,搅拌、放置、离心,收集沉淀加水,如前重复操作。80%乙醇液中沉淀出暗蓝灰色沉淀,回收溶剂,低温(55℃~60℃)干燥,即得粗多糖。 生样干粉、蒸熟样干粉的提取率分别为11.8%和18.2%。◇黄精总皂甙的提取方法 取黄精干粉100克,加入回流装置,加乙醇300毫升,回流2小时;过滤,再重复提取2次;回收乙醇,至小体积时,加水溶解残渣,用乙醚提取;弃乙醚,用水饱和的正丁醇提取3次;回收正丁醇,提取物低温烘干即得总皂甙粉。生样干粉、蒸熟样干粉的提取率分别为6.5%和6.3%。?表1? 样品处理方法 取样重(g) 烘干重(g) 干样得率(%)鲜样烘干 2200 385 17.5 鲜样蒸15分钟烘干 2200 420 19.1 药店炮制烘干 520 430 82.7

    ?表2? 样品号 样品处理方法 粗多糖含量(n=6)(以葡聚糖计,mg/g) 1 鲜样烘干粉 57.8 2 鲜样蒸15分钟烘干粉 58.3

    ?表3? 样号 样品处理方法 总皂甙含量(n=6)(以人参皂甙Re计,mg/100g) 1 鲜样烘干粉 593.8 2 鲜样蒸15分钟烘干粉 475.0