肠道病毒71型外壳蛋白VP1在Pichia pastoris酵母中的表达
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杨国威；何雅清；薛颖；周世力；马骊；金奇
肠道病毒71型|VP1|Pichiapastoris酵母|基因表达,肠道病毒71型外壳蛋白VP1在Pichiapastoris酵母中的表达,关键词：
参见附件(46kb)。
杨国威；何雅清；薛颖；周世力；马骊；金奇 病毒基因工程国家重点实验室 北京100052；深圳市卫生防疫站 深圳518001 病毒学报 2003 2
关键词：肠道病毒71型；VP1；Pichiapastoris酵母；基因表达
利用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒pPIC9K/VP1,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,甲醇诱导表达。SDS PAGE分析显示:表达产物的分子量约为34kD,与天然VP1大小一致。凝胶薄层扫描分析显示:目的蛋白表达量占培养上清总蛋白的60%以上。ELISA实验表明,重组蛋白VP1具有较好的抗原性。使用饱和硫酸铵分级沉淀法初步纯化的表达产物,能够较特异性地与EV71感染者血清中的抗体产生反应,而且与抗柯萨奇病毒A16特异性抗体不产生反应。通过利用表达产物作为抗原,对156份血清的检测初步证实.
关键词：肠道病毒71型；VP1；Pichiapastoris酵母；基因表达
利用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒pPIC9K/VP1,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,甲醇诱导表达。SDS PAGE分析显示:表达产物的分子量约为34kD,与天然VP1大小一致。凝胶薄层扫描分析显示:目的蛋白表达量占培养上清总蛋白的60%以上。ELISA实验表明,重组蛋白VP1具有较好的抗原性。使用饱和硫酸铵分级沉淀法初步纯化的表达产物,能够较特异性地与EV71感染者血清中的抗体产生反应,而且与抗柯萨奇病毒A16特异性抗体不产生反应。通过利用表达产物作为抗原,对156份血清的检测初步证实.
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